GB/T 39030-2020
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标准简介
GB/T 39030-2020.Technical specification of physiological activity evaluation for enzyme preparations.
1范围
GB/T 39030规定了酶制剂生理活性评价基本要求、试验方法、消化促进率计算及结果表述。
GB/T 39030适用于饲料和食品添加用脂肪酶制剂、蛋白酶制剂和碳水化合物水解酶制剂的生理活性评价。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6432饲料中粗蛋 白的测定凯氏定 氮法
GB/T 6433饲料中粗脂肪的测定
GB/T 15672食用菌中 总糖含量的测定
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
酶制剂 enzyme preparations
从生物中提取、提纯加工后的具有生物催化能力的生物制品。
注:本标准中的酶制剂特指添加到饲料或食品中提高饲料或食品消化率的生物制品,包括脂肪酶、蛋白酶或碳水化合物水解酶等酶制剂。
3.2
体外消化模型 in vitro digestion model
在生物体外采用动物或人体内相近的消化环境和消化酶系,模拟动物或人体内消化生理过程,体外评价酶制剂对底物消化生理活性影响的体系。
3.3
酶制剂生理活性 physiological activity of enzyme preparations
酶制剂在动物或人体内消化生理环境中,受温度、pH、消化酶等因素影响表现出的对底物的消化能力。
3.4
胃模拟消化液 simulated gastric fluid
模拟动物或人体胃液中的pH、温度、离子强度及胃蛋白酶浓度设置的消化液。
3.5
肠模拟消化液 simulated intestinal fluid
模拟动物或人体肠液中的pH、温度、离子强度及胰酶浓度设置的消化液。
1范围
GB/T 39030规定了酶制剂生理活性评价基本要求、试验方法、消化促进率计算及结果表述。
GB/T 39030适用于饲料和食品添加用脂肪酶制剂、蛋白酶制剂和碳水化合物水解酶制剂的生理活性评价。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6432饲料中粗蛋 白的测定凯氏定 氮法
GB/T 6433饲料中粗脂肪的测定
GB/T 15672食用菌中 总糖含量的测定
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
酶制剂 enzyme preparations
从生物中提取、提纯加工后的具有生物催化能力的生物制品。
注:本标准中的酶制剂特指添加到饲料或食品中提高饲料或食品消化率的生物制品,包括脂肪酶、蛋白酶或碳水化合物水解酶等酶制剂。
3.2
体外消化模型 in vitro digestion model
在生物体外采用动物或人体内相近的消化环境和消化酶系,模拟动物或人体内消化生理过程,体外评价酶制剂对底物消化生理活性影响的体系。
3.3
酶制剂生理活性 physiological activity of enzyme preparations
酶制剂在动物或人体内消化生理环境中,受温度、pH、消化酶等因素影响表现出的对底物的消化能力。
3.4
胃模拟消化液 simulated gastric fluid
模拟动物或人体胃液中的pH、温度、离子强度及胃蛋白酶浓度设置的消化液。
3.5
肠模拟消化液 simulated intestinal fluid
模拟动物或人体肠液中的pH、温度、离子强度及胰酶浓度设置的消化液。
标准图片预览
标准内容
ICS07.080
A21
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T39030—2020
酶制剂生理活性评价技术规范
Technical specification of physiological activity evaluation forenzymepreparations
2020-07-21发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
发布
2021-02-01实施
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草本标准由中国标准化研究院提出并归口本标准起草单位：江南大学、中国标准化研究院、北京萨姆伯科技有限公司。GB/T39030—2020
本标准主要起草人：吴晓玲、传来、匡华、马爱进、王忠兴、刘丽强、徐丽广、马伟、郝帅，1范围
酶制剂生理活性评价技术规范
GB/T39030—2020
本标准规定了酶制剂生理活性评价基本要求、试验方法、消化促进率计算及结果表述。本标准适用于饲料和食品添加用脂肪酶制剂、蛋白酶制剂和碳水化合物水解酶制剂的生理活性评价。
规范性引用文件
2
SZC
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件GB/T6432饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法GB/T6433饲料中粗脂肪的测定
GB/T15672食用菌中总糖含量的测定3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
Jenzymepreparations
酶制剂
从生物中提取、提纯加工后的具有生物催化能力的生物制品注：本标准中的酶制剂特指添加到饲料或食品中提高饲料或食品消化率的生物制品，包括脂肪酶、蛋白酶或碳水化合物水解酶等酶制剂。
3.2
体外消化模型
invitrodigestionmodel
在生物体外采用动物或人体内相近的消化环境和消化酶系，模拟动物或人体内消化生理过程，体外评价酶制剂对底物消化生理活性影响的体系。3.3
酶制剂生理活性
physiologicalactivityofenzymepreparations酶制剂在动物或人体内消化生理环境中，受温度、pH、消化酶等因素影响表现出的对底物的消化能力。
3.4
胃模拟消化液
simulatedgastricfluid
模拟动物或人体胃液中的pH、温度、离子强度及胃蛋白酶浓度设置的消化液。3.5
肠模拟消化液
simulated intestinal fluid
模拟动物或人体肠液中的pH、温度、离子强度及胰酶浓度设置的消化液，4基本要求
按照相关法律法规和标准要求对样品进行接收、保管、交接、配制、回收、退还/销毁处理，并制定相4.1
1
GB/T39030—2020
应的管理制度和程序。
4.2评价使用的仪器与设备种类、数量、性能、量程、精度应能满足评价的需要4.3评价实验结束后，实验材料应进行无害化处理。5试验方法
5.1
试验设计
应符合表1要求。
表1试验设计
项目
处理设计
酶制剂选择
重复次数
5.2样品溶液制备
5.2.1固体酶制剂
酶制剂产品
试样实验组、空白对照组
根据评价目标和评价需要选择一种或多种不少于3次
待测生物产品若为块状固体产品应进行粉碎或充分研磨处理，过0.25mm孔径筛。所检测固体酶制剂如果有使用说明，按其使用说明计算100g饲料或食品中所需酶制剂的量，并准确称取（若所测酶制剂无使用说明，则准确称取50mg固体酶制剂），用水溶解，定容至100mL，配制成0.5mg/mL的工作溶液备用。
5.2.2液体酶制剂
所检测液体酶制剂如果有使用说明，按其使用说明计算100g饲料或食品中所需酶制剂的量，并准确量取（若所测酶制剂无使用说明，则准确吸取50μL液体酶制剂），用水稀释成浓度为0.5μL/mL的工作溶液备用。
5.3体外消化试验
5.3.1试样实验组
准确称取3.0g食品模拟物（淀粉+鸡蛋白十大豆油，质量比3：1：1)或饲料模拟物（玉米十麸皮十豆，质量比1：1：1），放入50mL具塞三角瓶中，加人1mL待测酶制剂样品溶液和8mL胃电解质溶液（参见附录A的A.2或A.3），用1mol/L盐酸溶液将pH值调至2.0混合均匀，静置10min，加人1mL体外模拟胃液（参见A.4），混合均匀，37℃生化培养箱内振荡消化（120次/min)4h。之后，在胃模拟消化物中再加入9mL肠电解质溶液（参见附录B的B.2或B.3),用1mol/L氢氧化钠溶液调整pH值至7.0。加人1mL体外模拟肠液（参见B.4），混合均匀，37℃生化培养箱内振荡消化(120次/min)16h。
5.3.2空白对照组
不加酶制剂试样，而其他处理与实验组相同，2
5.4消化残渣的处理
GB/T39030—2020
消化结束后，三角烧瓶静置10min，消化产物通过布氏漏斗过滤，吸取15mL丙酮清洗瓶中剩余残渣后并过滤，用丙酮清洗3次并抽干，将消化残渣转移入新的三角烧瓶中，105℃烘箱内烘干，备用。消化残渣处理后，根据酶制剂的特性，分别进行粗蛋白、粗脂肪或总糖含量的测定5.5测定
5.5.1粗蛋白的测定
将5.4中烘干的残渣分别按GB/T6432规定的方法进行粗蛋白含量测定，并分别计算试样实验组残渣中粗蛋白含量W1.和空白对照组残中粗蛋白含量W2i。同时，另取5.3.1中的食品或饲料模拟物3.0g，按GB/T6432规定的方法进行消化处理前模拟物中粗蛋白含量W。测定。5.5.2粗脂肪的测定
将5.4中烘干的残渣分别按GB/T6433规定的方法进行粗脂肪含量测定，并分别计算试样实验组残渣中粗脂肪含量W1，和空白对照组残渣中粗脂肪含量W2i。同时，另取5.3.1中的食品或饲料模拟物3.0g，按GB/T6433规定的方法进行消化处理前模拟物中粗脂肪含量W。测定，5.5.3总糖的测定
将5.4中烘干的残渣分别按GB/T15672规定的方法进行总糖含量测定，并分别计算试样实验组残渣中总糖含量W1和空白对照组残渣中总糖含量W2k。同时，另取5.3.1中的食品或饲料模拟物3.0g，按GB/T15672规定的方法进行消化处理前模拟物中总糖含量W测定。6消化促进率计算
按式（1)计算：
W,-W,
P=-
Wo
式中：
P——消化促进率，%；
W。一一未消化的饲料或食品模拟物中粗蛋白/粗脂肪/总糖的含量，单位为毫克（mg）；...（1)
W，一一试样实验组残渣中饲料或食品模拟物中粗蛋白/粗脂肪/总糖的含量，单位为毫克（mg）；W，一一空白对照组残渣中饲料或食品模拟物中粗蛋白/粗脂肪/总糖的含量，单位为毫克（mg）。以平行样的平均值为最终促进消化率值，计算结果保留到小数点后两位。7结果表述
7.1生理活性评价结果以消化促进率表示。7.2应表述出评价产品的名称，生产组织名称，酶制剂的名称，使用浓度，消化残渣的粗蛋白、粗脂肪以及总糖的含量和消化促进率。
3
GB/T39030—2020
A.1胃蛋白酶免费标准下载网bzxz
附录A
（资料性附录）
胃蛋白酶活力要求及体外模拟胃液的配制活力为1：10000生化级胃蛋白酶（临用前可按《中华人民共和国兽药典》中规定的方法测定胃蛋白酶活力）。
胃电解质溶液（适用于饲料模拟物）A.2
称取3.1g氯化钠、1.1g氯化钾、0.15g氯化钙、0.6g碳酸氢钠，溶解于1000mL水中A.3胃电解质溶液（适用于食品模拟物）称取2.0g氯化钠，溶解于1000mL水中。A.4体外模拟胃液
称取9.0g胃蛋白酶，加入100mL胃电解质溶液中，混合均匀，用1mol/L盐酸溶液调pH值至2.0。
4
B.1胰酶
附录B
（资料性附录）
胰酶活力要求及体外模拟肠液的配制GB/T39030—2020
本标准采用的胰酶应满足40℃，5min内，能将其质量的25倍的淀粉转化成水溶性的碳水化合物；40℃，60min内（pH7.5），消化掉其质量25倍的酪蛋白；37℃（pH9.0），每毫克胰酶每分钟能够从橄榄油中至少水解生成2umol脂肪酸。B.2
肠电解质溶液（适用于饲料模拟物）称取5.4g氯化钠、0.65g氯化钾、0.33g氯化钙，溶解于1000mL水中。B.3
肠电解质溶液（适用于食品模拟物）称取6.8g磷酸二氢钾，溶解于1000mL水中。体外模拟肠液
B.4
称取20.0g胰酶加入到100mL肠电解质溶液中，混合均匀，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH值至7.0。
SAC
5
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A21
GB
中华人民共和国国家标准
GB/T39030—2020
酶制剂生理活性评价技术规范
Technical specification of physiological activity evaluation forenzymepreparations
2020-07-21发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
发布
2021-02-01实施
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草本标准由中国标准化研究院提出并归口本标准起草单位：江南大学、中国标准化研究院、北京萨姆伯科技有限公司。GB/T39030—2020
本标准主要起草人：吴晓玲、传来、匡华、马爱进、王忠兴、刘丽强、徐丽广、马伟、郝帅，1范围
酶制剂生理活性评价技术规范
GB/T39030—2020
本标准规定了酶制剂生理活性评价基本要求、试验方法、消化促进率计算及结果表述。本标准适用于饲料和食品添加用脂肪酶制剂、蛋白酶制剂和碳水化合物水解酶制剂的生理活性评价。
规范性引用文件
2
SZC
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件GB/T6432饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法GB/T6433饲料中粗脂肪的测定
GB/T15672食用菌中总糖含量的测定3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
Jenzymepreparations
酶制剂
从生物中提取、提纯加工后的具有生物催化能力的生物制品注：本标准中的酶制剂特指添加到饲料或食品中提高饲料或食品消化率的生物制品，包括脂肪酶、蛋白酶或碳水化合物水解酶等酶制剂。
3.2
体外消化模型
invitrodigestionmodel
在生物体外采用动物或人体内相近的消化环境和消化酶系，模拟动物或人体内消化生理过程，体外评价酶制剂对底物消化生理活性影响的体系。3.3
酶制剂生理活性
physiologicalactivityofenzymepreparations酶制剂在动物或人体内消化生理环境中，受温度、pH、消化酶等因素影响表现出的对底物的消化能力。
3.4
胃模拟消化液
simulatedgastricfluid
模拟动物或人体胃液中的pH、温度、离子强度及胃蛋白酶浓度设置的消化液。3.5
肠模拟消化液
simulated intestinal fluid
模拟动物或人体肠液中的pH、温度、离子强度及胰酶浓度设置的消化液，4基本要求
按照相关法律法规和标准要求对样品进行接收、保管、交接、配制、回收、退还/销毁处理，并制定相4.1
1
GB/T39030—2020
应的管理制度和程序。
4.2评价使用的仪器与设备种类、数量、性能、量程、精度应能满足评价的需要4.3评价实验结束后，实验材料应进行无害化处理。5试验方法
5.1
试验设计
应符合表1要求。
表1试验设计
项目
处理设计
酶制剂选择
重复次数
5.2样品溶液制备
5.2.1固体酶制剂
酶制剂产品
试样实验组、空白对照组
根据评价目标和评价需要选择一种或多种不少于3次
待测生物产品若为块状固体产品应进行粉碎或充分研磨处理，过0.25mm孔径筛。所检测固体酶制剂如果有使用说明，按其使用说明计算100g饲料或食品中所需酶制剂的量，并准确称取（若所测酶制剂无使用说明，则准确称取50mg固体酶制剂），用水溶解，定容至100mL，配制成0.5mg/mL的工作溶液备用。
5.2.2液体酶制剂
所检测液体酶制剂如果有使用说明，按其使用说明计算100g饲料或食品中所需酶制剂的量，并准确量取（若所测酶制剂无使用说明，则准确吸取50μL液体酶制剂），用水稀释成浓度为0.5μL/mL的工作溶液备用。
5.3体外消化试验
5.3.1试样实验组
准确称取3.0g食品模拟物（淀粉+鸡蛋白十大豆油，质量比3：1：1)或饲料模拟物（玉米十麸皮十豆，质量比1：1：1），放入50mL具塞三角瓶中，加人1mL待测酶制剂样品溶液和8mL胃电解质溶液（参见附录A的A.2或A.3），用1mol/L盐酸溶液将pH值调至2.0混合均匀，静置10min，加人1mL体外模拟胃液（参见A.4），混合均匀，37℃生化培养箱内振荡消化（120次/min)4h。之后，在胃模拟消化物中再加入9mL肠电解质溶液（参见附录B的B.2或B.3),用1mol/L氢氧化钠溶液调整pH值至7.0。加人1mL体外模拟肠液（参见B.4），混合均匀，37℃生化培养箱内振荡消化(120次/min)16h。
5.3.2空白对照组
不加酶制剂试样，而其他处理与实验组相同，2
5.4消化残渣的处理
GB/T39030—2020
消化结束后，三角烧瓶静置10min，消化产物通过布氏漏斗过滤，吸取15mL丙酮清洗瓶中剩余残渣后并过滤，用丙酮清洗3次并抽干，将消化残渣转移入新的三角烧瓶中，105℃烘箱内烘干，备用。消化残渣处理后，根据酶制剂的特性，分别进行粗蛋白、粗脂肪或总糖含量的测定5.5测定
5.5.1粗蛋白的测定
将5.4中烘干的残渣分别按GB/T6432规定的方法进行粗蛋白含量测定，并分别计算试样实验组残渣中粗蛋白含量W1.和空白对照组残中粗蛋白含量W2i。同时，另取5.3.1中的食品或饲料模拟物3.0g，按GB/T6432规定的方法进行消化处理前模拟物中粗蛋白含量W。测定。5.5.2粗脂肪的测定
将5.4中烘干的残渣分别按GB/T6433规定的方法进行粗脂肪含量测定，并分别计算试样实验组残渣中粗脂肪含量W1，和空白对照组残渣中粗脂肪含量W2i。同时，另取5.3.1中的食品或饲料模拟物3.0g，按GB/T6433规定的方法进行消化处理前模拟物中粗脂肪含量W。测定，5.5.3总糖的测定
将5.4中烘干的残渣分别按GB/T15672规定的方法进行总糖含量测定，并分别计算试样实验组残渣中总糖含量W1和空白对照组残渣中总糖含量W2k。同时，另取5.3.1中的食品或饲料模拟物3.0g，按GB/T15672规定的方法进行消化处理前模拟物中总糖含量W测定。6消化促进率计算
按式（1)计算：
W,-W,
P=-
Wo
式中：
P——消化促进率，%；
W。一一未消化的饲料或食品模拟物中粗蛋白/粗脂肪/总糖的含量，单位为毫克（mg）；...（1)
W，一一试样实验组残渣中饲料或食品模拟物中粗蛋白/粗脂肪/总糖的含量，单位为毫克（mg）；W，一一空白对照组残渣中饲料或食品模拟物中粗蛋白/粗脂肪/总糖的含量，单位为毫克（mg）。以平行样的平均值为最终促进消化率值，计算结果保留到小数点后两位。7结果表述
7.1生理活性评价结果以消化促进率表示。7.2应表述出评价产品的名称，生产组织名称，酶制剂的名称，使用浓度，消化残渣的粗蛋白、粗脂肪以及总糖的含量和消化促进率。
3
GB/T39030—2020
A.1胃蛋白酶免费标准下载网bzxz
附录A
（资料性附录）
胃蛋白酶活力要求及体外模拟胃液的配制活力为1：10000生化级胃蛋白酶（临用前可按《中华人民共和国兽药典》中规定的方法测定胃蛋白酶活力）。
胃电解质溶液（适用于饲料模拟物）A.2
称取3.1g氯化钠、1.1g氯化钾、0.15g氯化钙、0.6g碳酸氢钠，溶解于1000mL水中A.3胃电解质溶液（适用于食品模拟物）称取2.0g氯化钠，溶解于1000mL水中。A.4体外模拟胃液
称取9.0g胃蛋白酶，加入100mL胃电解质溶液中，混合均匀，用1mol/L盐酸溶液调pH值至2.0。
4
B.1胰酶
附录B
（资料性附录）
胰酶活力要求及体外模拟肠液的配制GB/T39030—2020
本标准采用的胰酶应满足40℃，5min内，能将其质量的25倍的淀粉转化成水溶性的碳水化合物；40℃，60min内（pH7.5），消化掉其质量25倍的酪蛋白；37℃（pH9.0），每毫克胰酶每分钟能够从橄榄油中至少水解生成2umol脂肪酸。B.2
肠电解质溶液（适用于饲料模拟物）称取5.4g氯化钠、0.65g氯化钾、0.33g氯化钙，溶解于1000mL水中。B.3
肠电解质溶液（适用于食品模拟物）称取6.8g磷酸二氢钾，溶解于1000mL水中。体外模拟肠液
B.4
称取20.0g胰酶加入到100mL肠电解质溶液中，混合均匀，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH值至7.0。
SAC
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