本文件描述了人工汗液萃取后通过液相色谱法测定皮革和毛皮中防霉剂含量的试验方法。 本文件适用于皮革、毛皮及其制品中苯噻氰(TCMTB)、4-氯-3-甲基苯酚(PCMC)、邻苯基苯酚(OPP)、N-辛基异噻唑啉酮(OIT)4种防霉剂含量的测定，亦适用于蓝湿革、白湿革等半成品皮革。

ICS59.140.30
CS Y 46
中华人民共和国国家标准國
GB/T 38403.2—2024
皮革和毛皮
防霉剂的测定
第2部分：液相色谱法（人工汗液萃取）Leather and fur-Determination of the preservative content-Part 2:Liquid chromatography method(artificial perspiration extraction)[ISO 13365-2:2020,Leather-Chemical determination of the preservative(TCMTB,PCMC,OPP,OIT)content in leather by liquid chromatography-Part 2:Artificial perspiration extraction method,MODl2024-03-15发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2024-10-01 实施
GB/T38403.2—2024
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件是GB/T38403《皮革和毛皮防霉剂的测定》的第2部分。GB/T38403已经发布了以下部分：
皮革和毛皮化学试验防霉剂（TCMTB、PCMC、OPP、OIT）的测定：液相色谱法（GB/T38403-2019);
第2部分：液相色谱法（人工汗液萃取）。本文件修改采用IS013365-2:2020《皮革液相色谱法测定防霉剂(TCMTB、PCMC、OPP、OIT)的含量第2部分：人工汗液萃取法》。本文件与IS013365-2：2020相比，在结构上有较多调整。两个文件之间的结构编号变化对照一览表见附录A.
本文件与IS013365-2:2020相比，存在较多技术差异，在所涉及的条款的外侧页边空白位置用垂直单线（1）进行了标示。这些技术差异及其原因一览表见附录B。本文件做了下列编辑性改动：
标准名称更改为《皮革和毛皮防霉剂的测定第2部分：液相色谱法（人工汗液萃取）》；试剂和材料的表述由表格形式更改为章条形式：酸性人工汗液的组成更改为表格形式：一删除了标准工作溶液制备时的浓度稀释示例，增加了使用不同仪器分析时的稀释浓度范围-更改了公式（2)中的字母代号：-增加了公式(3)的编号：
增加了4种防霉剂的物质信息：
一增加了4种防霉剂的色谱图和光谱图；增加了方法定量限的内容。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国轻工业联合会提出。本文件由全国皮革工业标准化技术委员会(SAC/TC252)归口。本文件起草单位：中轻检验认证（温岭)有限公司、广东产品质量监督检验研究院、浙江方圆皮革轻纺检测认证有限公司、中国皮革制鞋研究院有限公司、深圳市宝龙辉鞋业有限公司、天创时尚股份有限公司、东莞市中标科技有限公司、中轻检验认证有限公司。本文件主要起草人：虞新华、王娜、谈敦旭、步巧巧、沈云、宁全海、倪兼明、万耀珠、高雅。GB/T38403.2—2024
皮革、毛皮中由于存在胶原、蛋白质、油脂等成分，容易发霉，加入防霉剂是防止皮革和毛皮产品霉变的最有效手段，因此防霉剂是皮革、毛皮中的常见添加物。但防霉剂在有效防止皮革发霉的同时，也会给人类及环境带来不同程度的负面影响，无其是皮革、毛皮中的防霉剂含量较高时，极易导致人体过敏事件的发生。皮革中防霉剂含量的检测是目前皮革(毛皮)制品(如服装、鞋、包袋、沙发等)企业非常关注的问题。因此，皮革和毛皮中防霉剂含量的测定已越来越受到社会的关注。GB/T38403旨在为皮革和毛皮中防霉剂含量的测定提供依据，拟由三个部分构成。第1部分：液相色谱法（乙睛萃取）。目的在于确立乙睛萃取后通过液相色谱法测定皮革和毛皮中防霉剂含量的试验方法。
第2部分：液相色谱法（人工汗液萃取）。目的在于确立人工汗液萃取后通过液相色谱法测定皮革和毛皮中防霉剂含量的试验方法。一第3部分：气相色谱-质谱法（甲醇萃取）。目的在于确立甲醇萃取后通过气相色谱-质谱法测定皮革和毛皮中防霉剂含量的试验方法（不适用于TCMTB的测定）。皮革、毛皮加工过程中所使用的防霉剂，以苯噻氰(TCMTB)、4-氯-3-甲氧基苯酚(PCMC)、邻苯基苯酚(OPP)、N-辛基异噻唑啉酮(OIT)4种物质为有效成分的商品应用最广，国外部分皮革采购商已经对皮革中4种物质的含量提出要求。现阶段我国皮革和毛皮中防霉剂含量的测定主要采用液相色谱法(乙睛萃取），即通过在超声波作用下用乙睛萃取出试样中的防霉剂，净化处理后通过液相色谱法进行测定。除液相色谱法（乙睛萃取）外，目前国际上还发布了IS013365-2：2020，为皮革中防霉剂的测定提供了一种新的方法，该方法模拟皮革和毛皮在实际穿用过程中防霉剂的测定，特别适用于评估皮革和毛皮在实际使用过程中防霉剂的潜在释放，但我国尚未有该方法标准。鉴于此，确有必要进行转化，以不断适应国内外产品的新变化，满足不同条件下产品测试的新需求，提高与国际标准的一致性程度，确保标准与行业发展相协调。
本文件为GB/T38403的第2部分；GB/T38403一2019修订时拟作为GB/T38403的第1部分，并更改标准名称为“皮革和毛皮防霉剂的测定第1部分：液相色谱法（乙萃取）”；《皮革和毛皮防霉剂的测定第3部分：气相色谱-质谱法（甲醇萃取）》目前正处于制定环节中。1范围
皮革和毛皮防霉剂的测定
第2部分：液相色谱法（人工汗液萃取）GB/T38403.2—2024
本文件描述了人工汗液萃取后通过液相色谱法测定皮革和毛皮中防霉剂含量的试验方法。本文件适用于皮革、毛皮及其制品中苯噻氰(TCMTB)、4-氯-3-甲基苯酚(PCMC)、邻苯基苯酚(OPP)、N-辛基异噻唑啉酮(OIT)4种防霉剂含量的测定，亦适用于蓝湿革、白湿革等半成品皮革。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682
GB/T39364
2017,MOD)
QB/T1267
2002,MOD)
QB/T1272
QB/T1273
分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,IS0
3696:1987, MOD)
皮革化学、物理、机械和色牢度试验取样部位（GB/T39364一2020,IS02418：毛皮bzxz.net
QB/T2716
QB/T2717
3术语和定义
化学、物理和机械、色牢度试验取样部位（QB/T
1267—2012,IS0
化学试验样品的准备（QB/T1272一2012，IS0化学试验挥发物的测定（QB/T1273—2012，IS0化学试验样品的准备（QB/T2716—2018，IS0皮革
化学试验挥发物的测定（QB/T
本文件没有需要界定的术语和定义。4原理
4044:2008,MOD)
4684:2005,MOD)
4044:2008,MOD)
2717—2018,IS0
4684:2005,MOD)
在恒温振荡条件下，用人工汗液对皮革/毛皮进行萃取，萃取液经过滤后通过带有紫外(UV）检测器或质谱仪(MS）的高效液相色谱仪(HPLC）进行分析。注：本文件规定的测试方法用于评估皮革和毛皮在使用过程中防霉剂的潜在释放。5试剂和材料
5.1除特殊规定外，所用试剂均为分析纯，HPLC测试用水应符合GB/T6682中一级水的规定，其他试验用水应符合GB/T6682中三级水的规定。5.2氢氧化钠(NaOH)溶液，0.1 mol/L5.3氯化钠(NaC1)。
GB/T38403.2—2024
5.4L-组氨酸盐酸盐(CH,O2N3HCI-H2 O),CAS5.5二水合磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)。乙腈，色谱纯。
5.7甲酸，色谱纯。
5.8甲醇，色谱纯。
5.9碳酸氢铵。
号：5934-29-2。
5.10TCMTB、PCMC、OPP、OIT标准品：TCMTB、OIT纯度≥99.7%,PCMC、OPP纯度≥99.5%。注：4种防霉剂标准品的相关信息见附录C。5.11标准储备溶液：分别称取适量的4种标准品（5.10），用乙（5.6）制备质量浓度为100mg/L的标准储备溶液。也可直接使用市售溶液。5.12标准工作溶液，根据所用分析仪器用乙睛将标准储备溶液（5.11)稀释成至少4个适当质量浓度的标准工作溶液，如采用HPLC-UV分析测试时，可稀释为2mg/L～50mg/L；采用HPLC-MS分析测试时，可稀释为0.05mg/L～2mg/L。注：由于不同的样品中防霉剂的含量差异较大，故单一的标准曲线无法完全覆盖整个测试范围。6仪器和设备
6.1分析天平，分度值为0.0001g。6.2高效液相色谱仪(HPLC)，带有UV或MS检测系统，或其他合适的检测器。6.3分离柱，反相Cg或C8，带有预处理柱。6.4水浴振荡器，能够保持（37土2）℃的温度，水平振摇频率（60土5)r/min或轨道振摇频率（100土10)r/min。
6.5膜式过滤器，连接有10mL的注射器，聚酰胺材质，孔径0.45μm。6.6提取瓶，50mL,可密封。
7取样及试样的制备
7.1取样
皮革按GB/T39364的规定进行。
的规定进行，取样过程中应避免毛被损失，保持毛被完好。毛皮按QB/T1267
如果不能从标准部位取样（如直接从鞋、服装上取样），在可利用面积内的任意部位取样，试样应具有代表性，并在试验报告中注明。7.2试样的制备
皮革按QB/T2716的规定进行。
毛皮按QB/T1272的规定进行，试样需要连同毛被一起试验。蓝湿革、白湿革等半成品革试样制备前应先按QB/T2716、QB/T1272的规定进行干燥。
8试验步骤
8.1酸性人工汗液的制备
酸性人工汗液应每天新鲜制备，具体成分见表1。2
L-组氨酸盐酸盐(5.4)
氯化钠（5.3）
二水合磷酸二氢钠(5.5）
表1酸性人工汗液成分
用0.1mo1/L的Na0H溶液（5.2)调节pH至（5.5土0.1）8.2试样分析溶液的制备
质量浓度
GB/T38403.2—2024
单位为克每升
称取约1g（精确至0.0001g）的试样于50mL提取瓶中，向提取瓶中准确加入10.0mL的酸性人工汗液（8.1），置于温度（37土2）℃的水浴中振荡萃取（24土1)h。对于毛皮试样，若无法浸没，可适当增加酸性人工汗液的用量，并记录实际加入的体积。将萃取液通过膜式过滤器（6.5)过滤到适当的分析瓶中，必要时进行离心处理，然后通过HPLC对防霉剂含量进行分析。
8.3分析程序
萃取液通过HPLC(6.2）进行分析。可使用各种类型的带有UV或MS检测器的HPLC，可供参考的仪器条件见附录D。在附录D给出的条件下，4种防霉剂的色谱图和光谱图见附录E。用制备的标准工作溶液（5.12)）得到峰面积与质量浓度（mg/L）的标准工作曲线9结果计算与表示
9.1结果计算
每种防霉剂的含量按公式（1)进行计算，结果精确至0.1mg/kg：exVxF
式中：
试样中待测防霉剂的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；从标准曲线上得到的对应防霉剂的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L);萃取液的体积，单位为毫升(mL);F—稀释倍数;
试样质量，单位为克（g）。
必要时，通过公式（2)按QB/T1273或QB/T2717的规定计算以试样绝于质量计的防霉剂含量：Wdm=w;XD
式中：
以试样绝干质量计的防霉剂含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；试样中测定的防霉剂的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；绝干系数，通过公式(3)计算。
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式中：
按QB/T1273
结果表示
或QB/T2717
测定的试样中挥发物的含量，%。试样中的防霉剂含量以两次平行试验结果的算术平均值作为结果，精确至0.1mg/kg。10
方法的可行性
定量限
见附录F，
精密度
2次平行试验结果的差值与平均值之比不应大于10%。10.3
回收率
加标浓度为0.3mg/kg~150
mg/kg时，4种防霉剂的加标回收率均应在80%～120%范围内。11
试验报告
试验报告应包含以下内容：
本文件编号；
样品的详细信息及取样与GB/T39364液相色谱仪的检测器类型；
或QB/T
1267不一致的情况；
防霉剂的含量，以mg/kg计，精确至小数点后1位；试验过程中出现的异常情况；
与本文件规定方法的任何偏离之处，附录Ａ
(资料性）
13365-2:2020结构编号对照情况本文件与ISO
表A.1给出了本文件与IS013365-2:2020结构编号对照一览表。13365-2:2020结构编号对照情况表A.1：
本文件与ISO
本文件结构编号
附录A～附录C
附录D
附录E
附录F
IS013365-2:2020结构编号
7.1第1句前半句和第2句
7.1第1句后半句和第2段
7.2～7. 4
附录A
38403.2—2024
38403.2—2024
附录B
(资料性)
本文件与IS013365-2:2020技术差异及其原因表B.1给出了本文件与IS013365-2:2020技术差异及其原因的一览表。表B.1本文件与1S013365-2:2020技术差异及其原因本文件结构编号
技术差异
增加了对毛皮的适用性，扩大了标准的适用范围：删除了对4种防霉剂分解产物测定的适用性；明确了对蓝湿革、白湿革等半成品革的适用性删除了“3术语和定义”中有关ISO和IEC术语数据库的描述
明确了萃取水溶液为人工汗液；将方法可用于评估皮革、毛皮实际应用过程中防霉剂的潜在释放调整为说明性的注删除了氢氧化钠、氯化钠、乙腈、甲酸等物质的CAS号
修改了HPLC测试用水的纯度要求：关于试验用水的要求，用规范性引用的GB/T6682替换了ISO3696
修改了OIT标准品的纯度要求
删除了标准工作溶液的保存条件修改了水浴的振荡频率单位
增加了“提取瓶”
增加了毛皮处置部分，并增加了对QB/T1267、QB/T1272的规范性引用
关于皮革取样的规定，用规范性引用的GB/T39364替换了ISO2418
关于皮革试样制备的规定，用规范性引用文件的QB/T2716替换了IS04044
修改了称样精确度要求；
修改了萃取瓶的类型
修改了标准曲线中防霉剂的浓度单位原因
符合GB/T1.1的编写规定，并适合我国需要：标准所述方法中并未涉及到防霉剂分解产物的测定；
与“取样及试样的制备”中内容相对应无实际内容，不影响标准的理解和使用使原理的表述更加清晰，符合我国习惯，便于理解和使用
所涉及试剂均为常见试验试剂，删除后不影响理解使用，与行业内其他标准中保持一致与我国水质标准相对应，符合我国情况；以适应我国的技术条件，便于使用与我国目前现有标准中保持一致各实验室根据实际情况自行掌控，符合我国习惯
结合设备的实际情况修改，表述更准确根据试验的实际需要增加，便于使用与标准范围相对应，便于使用
以适应我国的技术条件，便于使用以适应我国的技术条件，便于使用与分析天平的精度保持一致：
100mL的锥形瓶，10mL的萃取溶剂很难淹没试样，可能会允许萃取效果，满足萃取条件的提取瓶均可使用
与标准工作溶液中保持一致，便于使用本文件结构编号
表B.1本文件与IS013365-2:2020技术差异及其原因（续技术差异
修改了计算公式中防霉剂的浓度单位；关于皮革中挥发物含量的测定，用规范性引用的QB/T2717替换了ISO4684,增加了对QB/T1273的规范性引用
增加了对试样测试结果的表示方法增加了方法的可行性相关内容，包括定量限、精密度、回收率等
增加了对GB/T39364和QB/T1267的规范性引用
38403.2—2024
与标准工作溶液和标准曲线中保持一致，便于使用；
以适应我国的技术条件，便于使用增强结果的准确性
在试验验证的基础上增加，便于实验室统一参考使用，利于方法的推广和使用以适应我国的技术条件，便于使用
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