QB 2525—2001.
f)5%苯酚溶液:将苯酚(CH,OH) 5g于60℃溶于50 mL水，将溶液冷却至室温，用水稀释至100 mL;
g)4-氨基安替比林-苯酚显色剂:在 Tris-磷酸缓冲液（pH7.2）40 mL中，加入葡萄糖氧化酶(5 mg 葡萄糖氧化酶“Amano”2)550单位和过氧化物酶（0.76 mg，16$ U/mg的过氧化物酶“Amano”2) 125单位，再加入0.4%4-氨基安替比林溶液1 mL和5%苯酚溶液1.4 mL，用Tris-磷酸缓冲液（pH7.2)稀释至50 mL(随配随用);
h)底物溶液:将α-甲基葡萄糖(CH,0;)2.0g溶解于水50 mL中，用水稀释至100mL<5℃~15℃可稳定二星期)。
4.1.3测定方法
`4.1.3.1 样品溶液的制备
用酶制剂配制酶溶液使其0.5 mL的Ao-A介于0.15和0.32之间:吸取酶制剂1 mL,加到一个适当大小的容量瓶中，用经冷却的水稀释至刻度，混匀。
示例:α-葡萄糖转苷酶L“Amano":[n-300〕稀释1 mL--300 mL。
4.1.3.2测定
吸取底物溶液（4.1.2h）1mL和0.02 molL乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.0)(4.1.2c)1mL`加入试管(15 mm× 150 mm)内，在（40±0.5）℃的恒温水浴箱中保温10 min。加入样品稀释酶液（4.1.3.1）0. 5 mL，混匀，于（40士0.5)℃的恒温水浴箱中准确保温60 min后，将试管转移至沸水浴中加热 5 min，然后用流水快速冷却。冷却后，吸此溶液0.1 mL到试管中，并加入4-氨基安替比林-苯酚显色剂(4.1.2g) 3 mL,混匀.将此试管放入（40土0.5)℃的恒温水浴中，保温20 min，测定500 nm处的吸光度Aso。
空白对照:吸0.02 molL乙酸-乙酸钠缓冲液(pH5.0)(4.1.2c） 1 mL和样品稀释酶液(4.1.3.1)0.5mL加入试管(15mm× 150mm)内，混匀。将试管转移至沸水浴中加热5min,然后用流水快速冷却。冷却后，加入底物溶液（4.1.2h) 1 mL，混匀。吸此溶液0.1 mL至空试管（15 mm× 150 mm)内，加入4-氨基安替比林-苯酚显色剂（4.1.2 g) 3 mL，混匀。将此试管放入《40士0.5）℃的恒温水浴中，保温20min，测定500nm处的吸光度A。
精确称取105℃下干燥6h的葡萄糖(CH,0) 1.000g，溶于100mL水中，分别取1mL,2mL，3mL，4mL，5mL，用水定容至100mL(每1mL该溶液分别含有100 pg , 200 ug,300 ug . 400 ug和500 ug的葡萄糖)。
分别吸取以上葡萄糖标准液0.1 mL和4-氨基安替比林-苯酚显色剂(4.1.2g) 3 mL,加入试管（15 mm×150 mm）内，混匀。将这些试管放入（40士0.5）℃的馆温水浴箱中，保温20mnin，测定波长500 nm处的吸光度AsosAs2o，As3AssoAsso。
·标准液的空白对照:用水来替代葡萄糖标准液，按上述方法测定空白对照液吸光度Aso。
4.1.4 分析结果的表述
在此试验条件下，在反应混合物2.5 mL 中，60min产生1 ug葡萄糖所需的酶量定义为一-个α-葡萄糖转苷酶活力单位。

分类号X41
备囊号488-2001
中华人民共和国轻工行业标准
QB2525—2001
食品添加剂
α葡萄糖转苷酶
2001-11-15发布
中国轻工业联含会
2002-05-01实施
825252001
本标准的全部技术内容为强射性，前
食品恭剂-葡菌糖特的是出黑山要（Aspeier）发酵法生产，经热处理过滤，浓缩提纯类，，供食品工业生产作加工助剂用。本标准出十国轻工业联合会综合业务部掘出。本标准出全国食初发酵标准化中心归口。本标维中中国食品发游工业研究归、北京良，赛生物技权有限公负专超草。本标准主要起草人：张启先、灵玉宏，刘莲茂，-tiYkoar KAca-
中华人民共和国轻工行业标准
食品添加剂
α-葡萄糖转苷酶
QB25252001
本标准规定了食品添加剂r-满转片醇（Fppdadditive-α-Gtucogidase）的按术要求试验方法、扮鉴规则和标惠，包装、运输、这伴。本标准造用于由黑器露（Aspergiusngr）发牌法生产，经热处理、过滤、救缔提纯取而每的食品添加剂~随菌糖转甘醉，供品工业生产性划工助剂用。2引用标准
下别殊准所包含款条文，通过在手标准牛引用而成为本标准拍条支，本标准出版时，所六版本均为有效，所有标准会被慎订，使用本标排的各存应提讨使用下多标涨聚新版本的可能学。
GB/T8449-1987食品添2剂中销的定方送GBT84-1987食品解加剂的测定方法GE/T8451-1937食品添州划六章金展限累试验方法GB4789.2一1994食品卫生微生物学检险菌落总数烫定GB4789.3-1994食品卫生微尘物学检验人肠谢群测定G日4789.4一1994食品卫牛微生物学检验沙门氏菌验验GB4785.6-194食品卫生微生物学检验致泻大厨埃希氏菌检验QB71S03—1993工业酶制剂通月试验方法3技术要求
3.1性状
本战为褐色液体，
3.2里化错标
理化指标应符宫表1的规定。
3. 3微生物指标
微生物指标应荐合表2的规货。
中国轻工业联合会2001-11-15批准2002-05-01实施
α-前期转苷牌后力，U/mL
薪化醛活力，LI/mL
律（As)ngkg
铅(Pb)，mg/kg
金风（mg/kg
荫落总数、fwnf,
门氏商
坡希氏大肠杆蓝
试验方法www.bzxz.net
QB2525-2001
300000
4.50~-5. 50
1x 104
不得检备
不得捡.E：
本试验所用的试剂和水，在没有基他特殊署求时：均使用分析纯试剂和蔗密水或相当纯疫的水。
4.1在-确萄转苷解流力的激究
4.1.1原程
用《-简萄转苷能作用成物α-F室D葡萄芒生成有，质生成约而整能与含有的萄辨氧化酶，过氧化酵的4-氨基安替比林（4-Aminoantipyrin）和的试剂进行显色反应来定望测定。其化学友应式如下：4-基-D 葡荷：特性D-葡萄糖 +甲醇D-葡萄糖、血萄刺血,化酶 葡萄糖酸 + H202H,O2 + 4-氧基安替比林+酚过机化物孵，本醒4. 1. 2试剂和落滤
a）0.1mnlT.乙牌溶凌：将乙（CHCO0H）6.0g熔于水，稀释至1000mLrb）0.1mo/L乙酸钠落没，将之.酸钠（CHCOONa）8.20g落于水，稀释至1000mL）0.02mo艺-艺酸钠缨冲滤（5.0）一将0.1mol/L乙酸溶滤20mL溶于水，稀释至10DmL（试剂A）：将0.1mol/L铂溶液20uL格于水，释释至100mL（式剂H)一将A和B混合，调pH至5.0
d）Tris-磷酸缓冲液（pH7.2)：格Iris（羟平些）氨基甲烷【H,NC(CH;OH),}36.3g2
TY KAbNBY KAa-
Q32525—2001
和二水磷塑二驾纳（NaHPO·2H0）50.0g浪于900mL水，用2mo1/L盐酸游滤调H至7.2，用水带幕至1000mL：
e）0.4%4-氢基安替比林溶滋：将4~氨基安替比林C,Hg0N,)200m溶于水，貌科金mL.
f）5%未翻游液：将苯龄（C,H,OH）5各手60C溶于50mL水，将落滤冷虾至温,用水稀释至100mL：
）4-氮基安替比林·苯酚显色剂：在Tris-陈酸缓说液（H7.2）40mL中：加入葡菊树氧北醇（5mg葡氧化\Amano”2）55u单位和此氧化物醇【U.76mg，165UJ/mg的过氧化物酶“A”2）125单位，再入.4%4-数基安替比林落液1和5%采陷溶落14m，用T-燃塑冲液（pl[7.2）稀释至5ml（随底随用)：h）成物波，将αr-平坐药费糖（,H心,）2.0g落幅于水50mL中，用水薪至1(0mL（5℃15℃可稳定二星期）。
4.1.3测定方法
4.1.3.1样品资范的制各
用醇制剂酶溶液使其0.5药A-A介于6.15和.32之间，吸取醛制剂1到一个适当大小的容盘瓶中，用经冷却的水稀释至刻度，海勾示例：-确菊地转醇“Amanu，［n300稀1mL--—→300mL。4. 1.3.2 激定
双取底物落泄【4.1.2h）1mL0.02moi/L乙酸-乙盟钠器汁液（pH5.0）（4.1.2）1ml加入试管（[5m×150mm）内，在（40土0.5）℃约慎温水粮中保温10im，折入样品稀群液（41.31）0.5ml润每，于（+0.5）的面温水盗销中催保温码min后，将试管转移室沸水浴巾切热5min，然唇用流水快速冷缸，冷却后，吸此溶液0.！mL到让管中，并州入4-要基安替比怀-举研显色剂（4.1.2g>3m，派勾。将此试管入（40±0.5）℃的恒温水中，等温20min，测定500n外节吸光双Am白对照：喊.(2mol乙酸-乙壁钠經冲液（pH5.0）（4.1.2）m和样品稀释酶液（4.1.3.1)0.5入试管（15um×150mm）内，句，将试管转移余沸水落中热签后用凉水快速冷却，冷眉：如入底物溶液（4.1.2）1m，滤每。双此缩滤.1m，至空试管（15mm×150mm）内，加入4-氯半安替比林-禁厨显色剂（4.1.2）3mL，混句择此试管放入<4U±0.s）的恒温水溶穴，保滤20min，测定500mm处的光度Au。特确移取105下于6的简离（CH0）1.C00，格100m水中，分别取12ml，3ml，4㎡L，5mT，用本定存至100ml，（mL该游液分别含有100码，200，300，40和500的葡）.
分别吸取以上替楼标准滚0.1mE和4-氢基安替比林-萍酚显色剂（4.1.2g）3mL圳入试管（15×150）内，混勾，将这些试管放入（40主0.5）的担温水资中，保盟20min，测定波长5Dmm处的吸光度AsoAgaAga，AsaAssi：标准液的空凸对照：用水来替代谢馨糖标准液，按上述方法测定空白对摄液吸光应As。4.1.4分析结果的述
在此试验条件下，在反应据合赖2.5mT.中，0min产生1码葡萄越所需断醇直定义为一个一面萄转者活力单位。
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4.1.4.「相当十驱光瘦差为1,000时的葡的显G（】按式（1）计算。50
G-Asip-Ae. + Asin-An . Asa -An..Asn -An. Akgo.- 4en.F
4.1.4:2次-葡药糖转苷幕活力拨式（2）计其u-葡郁糖转矿酶活力(UhL)=(Abo-4)xG×x0.1\4.5
式中：A一样品反应液的光度：
A。——空自游滤的吸光度
G-吸北度差为1.0时，由葡葡糖标谁曲线求得的萄药籍量，g，见式（1);2.3 一反应体系的总穿量，ml
们,1一一反虑染系的取择其，mL:n-一爵样品的稀释倍数：
0.5.一反应体系中酶学品的漆树量、mJ.4.1.5结果均允许差
实行当相对供差不得超过5%。
4.2糖化酶活力的测定
4.2.1原理
辉作月于滨贫缩液生成还原糖。熬片加人费林式剂（4.2.2，在年热的情上，定量生成氧北亚沉淀。在加入碘化评和虚业后，牛嵌游离碘，此时，立即用做代碗酸钓游波消定，4.2.2试剂和溶液
a）30%碘亿塑率液，读化钾150含案解于350mL水，保存在揭自试和瓶中，避免阳光育务：
b）25%硫酸溶液：疏酸125%率丁375mL水：）0.05mnl/T，流代流腰钠率液：将定盘分析用的0.1mc.硫代流酸钠母液500mJ,用激沸过的冷却水稀释，所号游泄的总体积为1m。配制好后，应进行标定，求出浓皮校正系数值：
）酸-酸销袋溶源4：将销落满到资减，调14.5：
e）可性淀粉溶液（pH4.52：将可溶性淀粉（试剂级）在105℃干燥4h后称量计算含水量，然后，恨据=溶性淀粉的含水置称收0.50（折于）的可溶性沉粉，级整加入到部水50mL中，患游5min，用自来水冷后，加入moL，乙酸-么酸拍级冲溶液5mL，用水定容室100mL：
f）费林试剂
铜溶液，酸34,66：溶解于水中，定容至50mL酒石酸钾钠磁窖湾，酒石酸钾钠173含和氢氧化钠50名落酷子水中，定容至500mL:
一使用前，精确地取等体识的钢游液和碱液充分混合。4.2.3测定方法
4.2.3.1样虽溶液的制备
YYKANEKAA-
QB2525-2001
用水稀释静祥品，使得到配液的（-7%）×1×1.62值为3mg~10m前秘量示刚：转甘酶：［m-100］稀释1ml.→100mL。4. 2. 9. 2 定
将可咨性淀扮落微<4.2.2e）10m加入到100mlErtammy三角瓶中，每于（40±0.5）℃恒泻水浴中，预势10mi~15anin，入样品稀酶液（4.2,3.1）1mL。准确加热30 ri后+加入费林试奔，（4.2:22）4r使海失活。将三角瓶直接在煤气唤灯（或电炉）.5加热2min后，立即放在自来水中冷却。确后，加入30%弹化伴溶液（42.2a）2mL和25%龄溶泄（4.2.2b）2mL，用0.05mol/L硫代筑酸钠溶液（4.22c）潮定游离出的碘，以蓝色潜完为滴定终点（
定白对照试验：以水取代酶减，布另一个三集瓶中用E述间样的趣作步骤剂定空白对照值（mL)。咨近终点时，加入1%可落性淀份溶减【应使旧可接性淀粉（试剂缆）另行配制1滴一2滴，以蓝色消大作为滴定落点。4.2.4分析给果的表述
有此试验条性下，反应30i，反应液中产生相尚于0菊带辅的还原蜡所帝能酵蛋，定义为1个糖化酶后力单位。
42.4.1摘化活为按式（3）计算。糖化酶活力 (L/m)=(,-)×了×L62x10
式中：T—降反应液滴定消耗硫代碳酸球准游液的体积，L，。一-空白磷液满定消耗础代疏酸钠标准落液的体积，证：F—0.5nol/L靠代蔬酸钠液液度的校正系数：1.52——摄算系数
1/10一该分折法的带数（相当于15m葡萄糖的逐原将）：-样品的格释微，
4.2.5结票的允许差
平行试验相对误差应不超过5%，4.3H的想定
技QBT1803-1993中pH的试验方法进行滤定4.4砷的测定
按 CDT845D进行测定。
4.5错的测定
嵌GB/T8449进行测定，
4.5重金属的测定
按GB/T&451进行测定。
4.7语总数然就定
技GB4789.2进行划定，
4.8大两来群的测定
按GB4789.3进行测定。
4.沙门压蓝检验
按04789.4进行测定。
4.10埃希氏谢检验
按G4789.6进行定，
5捡验规则
Q2525-—2001
5.1产品应经生产厂质量检验部门检验合格，并附上合格证底右可包装入库或出厂。5.2生产厂以同懂次生产的且经包装出的产品为一批5.3取样方法
成品埋化指标分析和微生物指标分析分别采用两种不同的取样行法，5.3.1成品理化指标分析取
从发酵灌中取样，取样前底动拌装置，揽拌液体酶至少12h，用温水消洗取样阀，从中故出酌浓13叫以洗取样阀，再放出薛液80于玻璃瓶中，放入冰箱以各作理化龄验用：
5.3.2成品微生锁指标分折取性
从发辟楼中政样，取样前启动揽排装置，境津液体酶至少4h，温水清选取样阀，然后用碘型消洗样阀，从中放出酶液100湛L以冲掉取样阀的阅液，再效出液80mL丁无荣玻消瓶中，减入冰箱以备作微生物险验用。5.4产品在衡数糖转势酶活力、糖化酶活力、PH、微生物指标为必检项目。砷、钳和重全网为型式跨验项目，半年格查一次，好果抢韵中有一项指标不符合标准要求，应加倍攻样，对不合格项目进行复验，如仍不仓咯，又该批产品判为不合格。5.5当供需双方对产品质量发生异议需要仲裁时，仲裁机构由次方协商选定。仲裁时应按照本标准规定的检验方法行他越分析，6标志、包装、运输、贮存
5.1标流
产品包装上应赔有车固的标志，际切气产厂名称、厂址、产品名称、丽标、产品型号，批号、坐产日期、保活期，产品药主要参数、净含量以及采用的产品标准号，并标有“女品添加刻”字样，并所有产品合证，6.2免满
6.2.1比包装为20L乙烤。
6.2.2外包装为玺箱感200L.内滤铁插再种包装彩式，6.3运输
运输过程巾应轻装轻卸，不得与有晕、有害和易污染物品装混运，严防前淋、毒瞻，6.4 贮存
产号应存放在虏凉1蜂的15℃～25室内，遍免有举、有害、易腐，易污染等物一起存放。
6.5保质期
在符合规定的贮运条件和包装完监、未开启封口的尚说下，保质期为3个月，超过保质期，醛活力可能降低，但仍可使用，便用量应相应增加。
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