HJ 1215—2021.
1适用范围
HJ 1215规定了测定水中浮游植物的滤膜-显微镜计数法。本标准适用于地表水中浮游植物的快速测定。
当样品最大过滤体积为1000 ml时，方法检出限为40 cells/L。方法检出限计算方法详见附录A。
规范性引用文件
HJ 1215引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
GB/T 14581
水质湖泊和水库采样技术指导
HI/T 91
地表水和污水监测技术规范
HIJ 494
水质采样技术指导ol
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1
浮游植物phytoplankton
在水中营浮游生活的微小藻类植物，通常浮游植物就是浮游藻类，包括原核的蓝藻和其它各类真核藻类。
3.2
计数单位counting unit
显微镜视野下选择计数的最小单元，如细胆。
3.3
浮游植物密度density of phytoplankton
服务平台
单位体积内浮游植物的细胞数，cells/L。
3.4
显微镜计数视野microscope counting field
显微镜视野中限定一定面积的区域，用来定量计数浮游植物。
4方法原理
5试剂和材料
除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂,实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水。
5.1碘()。
5.2碘化钾(KI。
5.3甲醛溶液: w(HCHO)=37%~一40%。
5.4鲁哥氏碘液:
称取60g碘化钾(5.2）溶解在100 ml水中，再加入40g碘（5.1)，充分搅拌使其完全溶解，加水定容至1000 ml，转移至棕色磨口玻璃瓶，室温避光保存。
5.5显微镜浸没油:n=1.515或-1518，配透明玻璃滴棒。
5.6 滤膜:混合纤维素酯膜，直径25 mm，孔径0.45 um一3 um。
注:每批次滤膜应进行水化测试和油透明测试，满足可水化和可透明要求后方可使用。将1张未使用的滤膜放入盛
水的烧杯中,若滤膜被水完全浸润,则滤膜可水化。取Ⅰ张未使用的滤膜,置于滴有显微镜浸没油的载玻片上，若滤膜被浸没油完全浸润，则滤膜可透明。

中华人民共和国国家生态环境标准HJ1215—2021
滤膜-显微
Wa er a lity
Filtrationmeml
本电子版为正式标准
文本，由生
2021-11-29发布
勿的测定
-数法
phytoplanl
coutingnt
lethod
不境部环境示准研究所审校排版。惠服务平
2022-06-01实施
行业标准信息服务平台
适用范围
规范性引用文件
术语和定义
方法原理
试剂和材料
仪器和设备
分析步骤.
结果计算与表示..
精密度..
质量保证和质量控制
废物处置
附录A（规范性附录）
附录B（资料性附录）
附录C（资料性附录）
参考文献
方法检
惠爱分
丝状售
........
出限计算方法
目镜分划板标定.
似球形群体浮游机
...........
...i..+....
数量估等
..........
.........
HJ1215—2021
息服务平台
HJ1215—2021
为贯彻《中华人民共和国环境保护法》《中华人民共和国水污染防治法》，防治生态环境污染，改善生态环境质量，规范水中浮游植物的测定方法，制定本标准。本标准规定了测定地表水中浮游植物的滤膜-显微镜计数法。本标准的附录A为规范性附录，附录B和附录C为资料性附录。本标准为首次发布。
本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准组织制订。态环境监测中心。
本标准主要起草单位：浙江省生盗测中心
本标准验证单位：上海市环境
浙江省宁波生态环境监测中心
浙社省海祥监测预报中心、浙江省杭州生态环境监测中心、江苏省常州环境监测中心有自然资流部第二海洋研究所。本标准生态环境部2021车1
29日批准。
本标准自2022年6月
日起实
本标准由生态环境部军释
息服务平台
1适用范围
浮游植物的测定
HJ1215—2021
滤膜-显微镜计数法
本标准规定了测定水中浮游植物的恶膜-显微镜计数法。本标准适用于地表水中浮游植防的快速测定当样品最大过滤体积为100°ml时m
2规范性引用文件
件或共
本标准引用了下列文
凡是未注日期的引用文售
GB/T14581
HJ/T91
3术语和定义
地表水
法检出限为cells/L。方法检出限计算方法详见附录A。引用件，仅注日期的版本适用于本标准。适用于本标
明泊和水库采样技术指目
和污水监测技术规范
采样技术指导
用于本材准。
下列术语和定义适
勿phytoplnkton
浮游植物
在水中营浮游生活的小藻类植物游类，包活原核的蓝藻和其它各类真核藻类。
计数单位
countinguni
显微镜视野下选择计数的最入单元，如3.3
浮游植物密度densityofphytopla.+on单位体积内浮游植物的细胞数，cells/L。显微镜计数视野
microscope counting field
息服务平台
显微镜视野中限定一定面积的区域，用来定量计数浮游植物。4方法原理
样品通过一定孔径的滤膜，群体、丝状体及单细胞浮游植物截留在滤膜上，滤膜经透明处理后在显微镜下镜检。
HJ1215—2021
5试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水5.1碘（I2)。
5.2碘化钾（KI)。
5.3甲醛溶液：w(HCHO)=37%～40%。5.4鲁哥氏碘液：
称取60g碘化钾（5.2）溶解在100ml中，再加六40g碘（5.1），充分搅拌使其完全溶解，加水定容至1000ml，转移至棕色磨口玻璃瓶，室温避光保存。
5.5显微镜浸没油：n-1.515或
5.6滤膜：混合纤维素酯膜
直径25
配透明玻璃滴棒。
n，孔径0.45um
明测试，满足可水化和可透明要求后可使用。将1张未使用的滤膜放入盛注：每批次滤膜应进行水化氵
试和消透
水的烧杯中，若滤膜被水完全漫间，则滤膜可水化。取1张未使月的滤膜，若滤膜被浸没油完全
6仪器和设备
6.125号浮游生物网
定性采样瓶：30
采水器：不锈钢
定量采样瓶：1L
冷藏箱。
真空抽滤装置：
爱润，则
网托直
径0.064mm，网呈圆
ml广口聚乙烯瓶。
成有机玻
璃材质
口聚乙
包括漏斗
（相对真空度≤一17kP
（直径25mm
6.7载玻片：25mmX
注：载玻片和盖玻片使片前应用浓笠酸6.8盖玻片：25mm×5lm
无齿组织镊子。
载玻片晾片板：适配同知格载
烘箱：70℃土2℃，温度高调。
于滴有显微镜浸没油的载玻片上，口套在铜环上，
网底端有出水开关活塞。
深规格要
满足来档
要求。
200 ml）、多孔聚酯滤膜支撑板、收集瓶、真空泵选可直接值用的载玻片或盖玻片。6.12正置生物显微镜或倒置生物显断镜：物镜4、10×
6.13载物台测微计：又称镜台测微计，20×、40×；自镜10X或15×。
划值为0.01mm。
m/100DV*
注：DIV指等分格，1mm/100DIV即1mm等分成100格。6.14惠普尔目镜分划板（Whipplegrid）：边长为7mm～10mnl的正方大格，划分为100个相同的正方形中格，位于中央的1个中格进一步划分为25个相同的正方形小格。注：不具备惠普尔目镜分划板时，亦可使用同规格的网格型目镜分划板（即中央的中格未细分为25小格的网格型目镜分划板）
6.15计数器。
一般实验室常用设备。
7样品
7.1样品采集
7.1.1定性样品
点位布设及采样频次按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494的相关规定执行。使用25号浮游生物网（6.1）采集定HJ1215—2021
游生物网底端出水活塞开关，在水面表层至中品。天内
0.5m水深处以20cm/s～30cm/s的速度做“co”形往复，缓尽拖动约1min~3min，待网中明显有浮提出水面
游植物进入，将浮游生物网（6.1）10ml）时，将底端出口移入定
时，用25号浮游生物网（6.
及时将浮游生物网清洗干净。
采样开
自然通过网乳滤出，待底部剩少许水样（5ml~内内
（6.2）中，打开底端活塞开关收集定性样品。采集分层样品过滤特定水层样品，其他步驿同采集表层样品。定性样品采集完成后集后放入冷藏箱（6.5）冷策避光运偷。样品菜
如有定性样品采集技大规范，
定量样品
按照GB/T14581、
使用采水器（6.3）
量较少时，应酌情增加
注1：有些浮游植物
注2：定量样品采集
样品保存
定性样品
HJ/T91
采样体
《如蓝节
在定胜机
和HJ494的相关规定
2L样品至定量采
定量样品采集完质店
常上浮石
品采集
定性样品采集后应立几加入告哥氏样品不加鲁哥氏碘液（5.4）固家。样品
+)中。
定量采样并
可在此
，以们
若水体透明度较高，浮游植物数(6.4)
不应装满，以便摇匀。
华密集团
域采样作为峰值参考。
结果之宜
可相互比较。
量为水样体利的1.0%~1.5%。镜检活体充性样品在室温避光条件下可保存3周：1℃～5℃冷藏避光条件下可保存12个月。活体样品℃u
定量样品
冷藏避光条件下可
来存36h
定量样品采集后立即加入鲁哥氏曲液（5.4）固定，用量水样体积的1.0%～1.5%。也可将鲁哥氏碘液（5.4）提前加入定量采样瓶（6.4）中带至现场使布，定量样品在室温避光条件下可保存3周：1℃5℃冷藏避光条件下可保存12个月。样品在保存过程中，应每周检查鲁哥氏碘液（5.4）的氧化程度，若材品颜色变浅，应向样品中补加适量的鲁哥氏碘液（5.4），直到样品的颜色恢复为黄褐色。注：若样品需长期保存，应加入甲醛溶液（5.3），用量为水样体积的4%。3
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分析步骤
试样制备
按照8.1.2～8.1.5的要求完成预检装片，判断样品浮游植物密度，便于样品的后续分析。8.1.2混匀样品
每次取样前，采用上下颠倒至少30次的8.1.3
过滤体积
根据预检估算浮游植物密度，
胞。不同预检估计密度水
预估浮游植物细
湿匀样品，
混匀动作要轻。
整样品过滤体积，最终使滤膜上约有40个～105个浮游植物细下推荐
包密厚水
（cells/L）
的样品过虑体积Vo（ml）
应证后续样品加入时不扰动滤
专莫上的浮清植物。
注1：样品过滤体积大于漏斗容量吨注2：样品过滤体积小于5ml时
以实房水再悬浮样品。首先用多液器（6（6）量取一定体积的样品至10ml～不的实购月水，使悬源
50ml规格的离心管中，再加
后样品总值积在5ml及以上即可，最后用胶头滴管（6.16）加入2滴～3滴鲁哥碘液454定8.1.4样品过滤
用量筒或移液器（6.16）快速量取适量样品体积，将样品加入装有滤膜：5.6）的真空抽滤装置（6.6）漏斗中，静置2min～3min，真空抽滤，至漏斗中有0.5cm液层时关闭真空泵，使利余液体完全通过漏斗，切忌抽干滤膜。
8.1.5装片制备
样品过滤完成后，用无齿组织镊子（6.9）取下滤膜，保持截留浮游植物的一面向上，放在滴有2滴显微镜浸没油（5.5）的载玻片（6.7）上，再用透明玻璃滴棒在滤膜上滴2滴显微镜浸没油（5.5），将载玻片（6.7）放入载玻片晾片板（6.10），置于烘箱（6.11）中，70℃土2℃加热2h。2h后取出载玻片晾片板（6.10），观察滤膜是否透明。若已透明，再在滤膜上滴加2滴显微镜浸没油（5.5），盖上盖玻片4
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（6.8），装片制备完成。若滤膜加热2h后未透明，延长加热时间，不超过24h。盖上盖玻片（6.8）时，勿扰动滤膜。
8.2定性样品分析
在显微镜（6.12）下观察定性样品，鉴定浮游植物的种类。优势种类鉴定到种，其他种类至少应鉴定到属。部分鉴定参考资料见参考文献。注：种类鉴定除用定性样品观察外，还可吸取已完成计数的定量样品进行观察。8.3定量样品分析
8.3.1显微镜标定
计数前标定显微镜（6.12
数视野面积（Whiple视野或目镜视场视野）。显微镜标定工具确定计
和惠普尔镜分划板（6.14)。惠普尔目镜划板标定方法参见附录B。包括载物台测微计（6.13）
显微镜计数
荐视野美别及
不同密度水平样品推
易视野进行镜检计数。
台上，用Whipple视野或目镜视
计数。根据浮游植物细
包大心，
类及数量
每个视野的浮游植物利
选择目镜10×、物铲，
将装片（8.15）置于显微镜（6.12）载物度水子
子样品计数，建议选择目镜视场视野镜1×、物镜40×放大倍数镜检，记录不同密度水平样品推荐视野类别及计数视野类野类别
高密度水平（10cellS及以上）
中密度水平（10%c
es/0cells/L)
低密度水平（10cellsL以下
Whipple视野计数规购
wmpple视野
Whipple视野
视国中处
现丝体等较大个体显著穿过
藻类不计入总数，如图1。看
单独计数，再计入总数。破损纠胞存移动显微镜载物台，应避免在
区域本
显微镜视野在滤膜上的移动方向如图U为不计数在内
类计入总
病个或多
推荐计数视野数
>10个
>20个
>20个
数，处于上边界及左边界线的
个格子的边界时，应在低倍镜下丝状体或似球形群体细胞效估算参见附录C。计数时宜缓慢，确保
2所示
膜上、
、右和中部区域的视野均有抽样。平台
c为在内
图1Whipple视野计数约定规则示意图5
HJ1215—2021
9结果计算与表示
9.1结果计算
样品中浮游植物的纟
式中：N-
样品中浮
滤膜有效
移动轨迹
参考线
透明滤膜
亚微镜视野在滤膜上的移动示意图en
Snvironme
安照公
胞密度
存植物的
细胞密度，cells/L；
过滤面租
（镜漫
-计数面积
计数的
显微镜观
mm?：
-数的视
浮游植
的取信体
积，ml；
过滤样品
立换算系
数，ml/L。
体积单
结果表示
测定结果以科学计数表示，民密10精密度
6家实验室分别对含高密度水
（t.0×Te*cells）、中密度水平（4.0×10°cells/L）和低密度水平（7.0×104cells/L）的浮游植物样品进行了6次量复测定实验室内相对标准偏差分别为0.18%～0.64%，0.22%~0.49%，0.37%~1.16%；实验至同相对标准偏差别为：0.28%、0.68%、1.57%。计算精密度所用数据均经以10为底进行对数转换。高、中、低密验证样品的实验室间95%置信区间见表3。
表3高、中、低密度水平验证样品的实验室间95%置信区间样品
高密度水平
中密度水平
低密度水平
均值（cells/L）
95%置信区间（cells/L）
9.3×107~1.0×108
3.6×1064.4×106
5.7X104~8.2X104
质量保证和质量控制
最小计数量：优势种种类计数最少100个～150个。11.1
HJ1215—2021
每批次样品中，随机抽取10%的样品做平行测定，用计数差异百分比（percentdifferenceinenumeration，PDE）评估数据的精密度。按照公式（2）计算PDE。N2
式中：PDE
计数差异百分比，
均值celbzxz.net
平行样1测定结果的
的均值
平行样2测定结
定期标定显微镜，标定目镜分
废物处置
立分类收
实验中产生的废液厂
cells/L
的板及视野面积，每年车少1次。集中保官，依法委
质的单位进行处理。
息服务平台
HJ1215—2021
附录A
（规范性附录）
方法检出限计算方法
附录A给出了方法检出限的计算方法。方法检出限与计数视野数、可计数视野总数及子样本体积有关。假设样品在滤膜上符合随机分布，可通过泊松统计确定其检出限，计算公式见公式（A.1）。eD
式中：MDL
-显著性水平D.01时的方法检出限，cells/L；可计数视野总数：
野数：
观察的计数
e.pu010ao
样品的过波
-显著性水
息服务平台
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