中华人民共和国国家生态环境标准 HJ1190—2021 水质 灭菌生物指示物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的鉴定 生物学检测法 Water quality-Identification of biological indicator (Bacillus subtilis var. niger) for sterilization-Biological detection method。本电子版为正式标准文本，由生态环境部环境标准研究所审校排版。2021-09-17发布，2022-04-01实施。 前言 为贯彻《中华人民共和国环境保护法》《中华人民共和国水污染防治法》，防治生态环境污染，改善生态环境质量，规范水中灭菌生物指示物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的鉴定方法，制定本标准。本标准规定了鉴定水中灭菌生物指示物的生物学方法，用于微生物实验室灭菌效果的评价。本标准附录A和附录B为规范性附录。本标准为首次发布，由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订，主要起草单位为浙江省生态环境监测中心、江苏省常州环境监测中心、华东师范大学、上海市松江区和青浦区环境监测站。标准由生态环境部于2021年9月17日批准，并自2022年4月1日起实施，由生态环境部解释。 警告：检测人员应采取必要的生物安全防护措施，包括一次性手套、口罩、防护服、防护眼镜及鞋套等；操作应在无菌条件下进行。 1 适用范围 本标准规定了鉴定水中灭菌生物指示物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的生物学方法，适用于微生物实验室灭菌效果的评价。 2 规范性引用文件 本标准引用《消毒技术规范》等相关文件。凡注明日期的引用文件，其标注版本适用于本标准，新版本（包括所有修改单）同样适用。 3 术语和定义 3.1 枯草芽孢杆菌黑色变种（Bacillus subtilis var. niger）：在含酪氨酸的培养基上形成黑色素的革兰氏阳性芽孢杆菌，作为灭菌效果评价试验的增示菌。 3.2 灭菌（sterilization）：用物理或化学方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病微生物、芽孢和病毒，使其达到无菌保障水平。常用方法包括化学试剂灭菌、射线灭菌、湿热灭菌、干热灭菌及过滤除菌。 3.3 生物指示物（biological indicator）：含有对特定灭菌过程具有一定耐受力的活微生物，用于评估灭菌过程是否达到杀灭指定数量微生物的要求，并提供置信水平信息。 4 方法原理 经灭菌处理后，含枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的水样通过孔径为0.45 μm的滤膜过滤，细菌和芽孢被截留在滤膜上。随后将滤膜置于酪氨酸琼脂培养基上，在36℃ ±1℃条件下培养72～96小时。枯草芽孢杆菌黑色变种产生的酪氨酸酶可分解并利用酪氨酸形成黑色素，产生黑色特征菌落。对特征菌落进行染色镜检，并通过生化试验进一步鉴定，其能利用甘油和甘露糖，还原硝酸盐并水解淀粉，但不能利用苦杏仁苷和甘露醇，确认为革兰氏阳性芽孢杆菌。