本标准给出了牛蛙的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性，以及检测方法。本标准适用于牛蛙的种质检测与鉴定。 GB 19163-2003 牛蛙 GB19163-2003 标准下载解压密码：www.bzxz.net

Cs 65. 150
中华人民共和国国家标准
CB19163-2003
2003-06-04发布
Bullfrog
2003-12-01实施
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
本标准的第 5 章、第 7 章为强制性,其余为推荐性本标推的附录B为规范性附录附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和农业部提出。本标准由叶国水产科学研究院长江水产研究所归几本标准起草单位：湖南农业火学、湖南省畜牧水产局。本标准主要起草人：干晓清、干宇、肖克宇、汪旭光、张元秩、陈立拌、松青。GD19163—2003
GB19163—2003
本标给出了牛蛙（RanacatesheianaShaw>的主要形态构造特征，生长与繁殖、遗传学特性，以放检测方法，
本标准适用于牛蛙的种质检测与鉴定。2规范性引用文件
下列文件中的象款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡注日期的引用文件，其随后所有的改单（不包括勘误的内容）或订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的客方研究是否可使用这些文件的量新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB17716清鱼
3名称与分类
3.1学名
牛蛙Runa catesbeiana Shaw。
3. 2 分类位置
无尾目（Anura）、蛙科（Ranidae)、蛙属（Rana）。4术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。4.1
头长head length
吻端至上下颌额关节后缘的长度。4.2
头宽 bead width
左右颌关节间之距离。
眼径 eye diameter
服眶直径。免费标准bzxz.net
鼓膜径 drum diameter
鼓膜直径。
前量长forearm length
时关节至第3指末端的长度。
指（趾）序finger(toe）order
各指(趾）由短到长的顺序。
GB 19163—2003
婚垫 nuptial pad
雄蛙第一指内侧较发达的肉瘤，与牛殖活动有美。4.8
后肢长hindlegJength
泄殖孔至第4趾末端的长度。
足长fout lengih
自内赋突的近至第四趾末端的长度。4. 10
体长hoxly length
峻端玺尾表端的长度。
5主要形态构造特征
5.1外部形态特征
5. 1. 1 外形
身休粗短，头部宽面扁,略呈三角形，1对圆彤鼓膜位于喂后方,鼓膜颜色与头部背面额色基本一致，没眼后到鼓膜上方有明显的皮肤褶，皮肤较光滑，背部喀显粗糙，有极微细的肤校。前肢4指，无踏,指疗为山、II、亚，雌蛙第一指内侧有发达的婚挚，牛殖季节显著增大，蛙没有婚垫：后肢特别发达-5 趾,全蹼+蹼不完企达趾端,趾序为I、Ⅱ、V、Ⅱ,I。体色随柄息环境、年龄、性别,背养状况而异。通常头部为绿色，背部为绿褐色、黄褐色或黑揭色，有深浅不的不规则状斑快或斑纹，腹部为灰白色，有暗灰色斑纹。成熟雄蛙下颜部为金黄色，雌蛙与腹部颜色一效，
牛蛙的外形见图1：
）背面观
5.1.2可量性状
图1牛蛙外形（台）
h)腹面观
1 龄-~2 龄,体长 10. 3 cm-~16, 1 c11.体重 175, 2 ~548. 7 官的牛蛙,实测可量性状比例值见表 1。2
体长/头长
3.093 10.247
2, 981±0.243
5.2内部构造特征
头宽/头长
1.162±0.096
1.168±0.089
表1实测可量性状比例值
鼓展径/眼径
0,912±0.08
1. 338 1 0. 154
后股长/体长
1. 4671 0.078
1.475±0.102
雉蛙咽部有 1对内声囊,开口于口咽腔;雌蛙无声囊。5.2.2脊推
足长/前臂长
1.609上0.119
1,613±0.115
颈椎骨1枚、躯摊骨7枚、荐椎骨1枚、尾杆骨1枚。属前凹后凸的参差型推体。5.2.3生殖系统
GB19163—2003
趾曦宽
1.770±0.242
1.708 1 0.244
雄体有一对浅黄色卵圆形的精巢，保留有退化状态的缪勒氏管。雌体有，-对囊状结构的卵巢，卵巢内含有黄色的早期卵和动物极为黑色，植物极为乳白色的成熟卵或接近成熟卵。生殖腺的前方各有一个指状脂肪体，性成熟前为白色或淡黄色·性成熟后为黄色，大小随季节及营养状说等因素变化。
生长与繁葬
6.1生长
不同月龄组的牛娃体长、体重的实测值见表2。生长方程、体长与体重关系式见附录 A，表2不月龄组牛蛙的体长、体重实测值月龄/龄
伴长/em
体再/名
6.2繁殖
6.2.1性成熟年龄与体重
115,73
± 17. 56
1 龄～2龄。雌蛙 350 g以上,雄蛙300 区以上。6.2.2产郎季节
北方地区为5月～8月份，湖南，潮北等省为4月9月份，东、福建等省为3月～11月份，适宜产卵水温20℃-30℃
6.2.3产卵次数与类型
性成熟摊蛙每年可产卵1次～2次，并以春季产邸为主。卵球形，卵径1.2mm～1.5mm，必物极深黑色，植物极乳白色，产的卵外包胶质膜，相可粘连成单层或团状卵块。6.2.4怀卵量
性成熟的雌蛙尘殖季节卵巢系数为12.6%~-27.6%，绝对怀卵量（5.010.77)×10°粒，相对怀卵量(106.7±8.69)粒/g。
7避传学特性
7.1细胞遇传学特性
牛蛙体细胞染色体数：2m=26.臂数（NF）：52.核型公式,222m+1sm。牛蛙染色体组型见图2。
GB 19163—2003
x×× ××
图2牛蛙染色体组型图
7.2生化遗传学特性
10 yen
牛蛙心肌的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳酶谱见图3.同工酶酶带扫描图见图4，酶带的活性强度见表3。
牛蛙心肌 LH 同工酶电泳酶谱
图4牛蛙心肌LDH同工酶酶带扫描图表3牛蛙心肌LDH同工醇酶带活性强度醇
相对迁移率
活性强度/）
8检测方法
生物学性状测定
可量性状用分规测定、直尺读数,精确到 0,1 cm;体重用电子秤称取,精确到0, 1 g。内部构造特征采而解剖观察，对照标准规旋。8. 2繁殖力的测定
在繁殖季节,解剖未产卵的雌亲蛙,取出卵巢,用电子秤称重,再称取1,0卵,两个样品，分别计数每克卵的平均那粒数。卵巢中所含的个部卵粒数即为绝对怀卵量，单位体重(g)所含的卵粒数为相对怀卵量。
8. 3染色体的检测
8.3.1标本制备
术前 8 h~12 h 腰腔注射 0. 1%的植物血避聚素(PHA)0. 5 mL. ~1. 0 mL(100 g 体重) ,术前 4 h~6h腹腔注射秋水仙紊溶液（每克体重10 g--15 g);解牛蛙.从般骨和胫骨中取骨髓,投人 0.4为的氯化钾（KCE)溶液中，37℃水浴15nin~20min。以1000r/min离心10min.充共上清液，加1mL固定液(甲醇冰乙酸为 3 11),4 T条件下固定20 min,重复固定两。再加少量固定液,制取细胞悬液;取细胞悬液滴片，在酒精灯上文火烘十，浸没在吉姆萨(Gielsa)上作液（配制按GB 17716的规定执行）中染色30min，用蒸罐水冲去多余染液，空气干燥制片。8.3.2染色体计数
按GB17716的规定快行。
8.3.3组型分析
按GH17716的规定执行，
8.4生化遗传分析
8.4.1试样的制备与保存
GB 19163—2003
解剖牛辅，取心肌，用生理荧水洗去血液底称直、切碎，按15（质量浓斑）加生理盐水低温勾兼，4℃条件下以12000r/min离心10min。取上清液加人等量40%的蔗糖溶液，播勾后作好标记置手一25么冰箱中保存。
8.4.2电泳分商
用稳流稳压电泳仪及6%聚丙烯酰胺凝胶柱状电泳分离。电冰在10℃左右进行，点样量50mL，用漠醛蓝作指示剂。稳压280V，电泳80min～90min，至漠蓝到达熙i胶前沿1cm处停止8.4.3染色固定
电泳结束后，取凝胶放人预先配好的染色液中，37温浴10min～30min，至条带清晰，倾出染色液，用固定液（甲醇：乙酸水为45：12：43)终止反应。同工酶染色液的配制见附录B8.4.4扫描测定
用激光扫描仪对电泳图谱进行扫描和定量分析。GB19163—2003
4. 1 体长和体重生长方程
（资料性附录）
生长方程和体长体重关系式
体长和体重生长方程见式（A.1）式（A,2L 17. 32[1—c-0 293 7+1. 02>M, = 681, 77L1 - e: D.314 6(417.20 21 73.955 7式中：
f龄时牛蛙体长，单位为厘米（cm）一t龄时牛蛙体重，单位为克（g)；e—白然对数的底；
牛蛙的月龄，单位为龄。
A,2 体长体重关系式
牛蛙体长体重关系式见式（A.3），M - 0. 0:38 7 × 13.48
式中：
牛蛙体重，单位为克()：
牛蛙体长，单位为厘求(crm)。
++++++++++++++++( A, I )
+--+ A. 2 )
......( A,3)
B.1磷酸盐缓冲减(0,5mol/L)的配制附录B
(规范性附录）
同工醇染色液的配制
GB19163—2003
取磷酸二氢钾(KH.PO,)6.8g溶于约80mI.蒸馏水中，以氢氧化钠(Na)H)溶液(2mol/L)调节pH至 7. 4.再用蒸馏水定容至 100 mL,B.2氯化硝基四氨唑蓝(NBT)勉液(mg/mL)的配制取50mg氯化硝基四氮唑蓝VBT）定容于50tmL蒸馏水中，4℃保存。B.3辅酶I(NAD)贮液(mz/ml.)的配制取100mg辅酶I(NAD)定穿于10mL蒸馏水中。B.4崂嗪甲酯硫酸盐（PMS)贮液（mg/mL.)的配制取50mg吩嗪甲酯蔬酸盐(PMS)定容于50mI.蒸馏水中，4℃暗处保存。B. 5氯化钠(NaCI)溶液(0. 1 mol/L)的配制取氟化钠581mg定容于100mL蒸留水中3.6氯化镁（MgCl）溶液(0.005mol/L)的配制取氯化镁(MgCl：6H,0)100 mg定容于100ml.蒸馏水中。B.7乳酸钠溶液(1mOl/L)的配制
取DL-乳酸钠9.35mL（浓度600mg/mlL.)加蒸馏水至50mlB.8染色液的配制
取磷胶盐缓冲液7.5tmL,加氧化硝基四氮唑蓝溶液7.5ml、辅酶T溶液3.0ml.、盼嗪甲酯硫酸盐溶液.75mL、氯化钠溶液3.0ml.、氯化镁溶液3.0ml.、乳酸钠溶液3.0mL，混钉即成。
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