ICS 11.020 C 62 WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 569—2017 疟原虫检测血涂片镜检法 Microscopic examination of blood films for malaria parasites 2017-08-01 发布 2018-02-01 实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准起草单位：海南省疾病预防控制中心、江苏省寄生虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、云南省寄生虫病防治所、海南省农垦总局医院。 本标准主要起草人：王善青、高琪、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李雨春、刘莹、欧阳范献。 1 范围 本标准规定了血涂片镜检法检测疟原虫的技术规范。 本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原虫的显微镜检测。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 疟原虫（Plasmodium spp） 疟原虫是一类单细胞、寄生性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。寄生于人体的疟原虫主要有恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）、间日疟原虫（Plasmodium vivax）、三日疟原虫（Plasmodium malariae）和卵形疟原虫（Plasmodium ovale）等。 2.2 血涂片（blood films） 将血液涂制于载玻片上制成的涂片。供显微镜疟原虫检查用的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片两种。 3 仪器和器材 3.1 生物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×目镜） 3.2 计数器 3.3 载玻片（无划痕无油污的洁净载玻片） 3.4 推片 3.5 血片染色架 3.6 血片干燥架 3.7 玻片盒 3.8 染色盘和染色缸 4 试剂和材料 4.1 吉氏染色原液 4.2 pH 7.2磷酸盐缓冲液（PBS） 4.3 甲醇（分析纯） 4.4 香柏油或专用浸油（折射率≥1.5） 4.5 二甲苯（分析纯） 4.6 75%酒精 4.7 一次性采血针 4.8 一次性手套 5 检测步骤 5.1 血涂片的制作 5.1.1 采血部位及取血方法 经75%酒精消毒采血部位后待干，用一次性采血针在耳垂或指端扎刺取血，婴儿可从拇趾或足跟取血。取推片制作厚血膜约4 μL～5 μL血液，再取1 μL～1.5 μL血液制作薄血膜。 5.1.2 厚血膜制作 将血滴涂于载玻片中央偏左，划圈形成直径0.8 cm～1.0 cm圆形厚血膜，厚度以每个油镜视野可见5～10个白细胞为宜。 5.1.3 薄血膜制作 将推片与载玻片成25°～35°角快速推制，使形成舌状薄血膜。每张载玻片包含1个厚血膜和1个薄血膜。 5.1.4 编号 血膜干燥后用铅笔编号标识。 5.2 固定与溶血 5.2.1 薄血膜固定 用甲醇轻抹薄血膜表面进行固定，避免接触厚血膜。 5.2.2 厚血膜溶血 滴加蒸馏水覆盖血膜进行溶血，待呈浅灰色后倾去溶液；制作后1天内可免溶血。 5.3 吉氏染色 5.3.1 吉氏染液配制 吉氏染液由原液与PBS配制，常用浓度为2%、3%和10%。原液由吉氏粉、甘油和甲醇配制，可避光长期保存，工作液需现配现用。 5.3.2 单张血涂片染色 用于临床检测，3%染液染色约30 min；10%快速染色约8～10 min，但不适合长期保存。 5.3.3 成批血涂片染色 用于流行病学调查，常采用2%吉氏染液进行批量染色。 5.4 镜检 在染色血膜上加香柏油或浸油，用100×油镜及低倍目镜进行显微镜检查。