ICS 07.060；13.020 CCS Z19 中华人民共和国海洋行业标准 HY/T 0319—2021 贝类脂溶性海洋生物毒素的检测 液相色谱-串联质谱法 Shellfish—Determination of lipophilic marine biotoxins—LC-MS/MS method 2021-07-02 发布 2021-11-01 实施 中华人民共和国自然资源部 发布 前言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由中华人民共和国自然资源部提出，由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC283）归口。 本文件起草单位：国家海洋环境监测中心、中国科学院海洋研究所、厦门大学、中国水产科学研究院黄海研究所。 本文件主要起草人：许道艳、梁玉波、刘仁沿、刘磊、陈猛、于仁诚、潭志军、高春蕾、续彦龙。 警示 为避免毒素危害，操作时应佩戴手套。使用过的移液器吸头及废弃提取液等，应在 5% 次氯酸钠溶液中浸泡 1 h 以上以使毒素分解。 1 范围 本文件规定了贝类中脂溶性海洋生物毒素（包括大田软海绵酸、鳍藻毒素、蛤毒素、虾夷扇贝毒素、原多甲藻酸毒素、环亚胺毒素等共11种毒素化合物）的液相色谱-串联质谱检测方法的原理、操作步骤及结果计算。 本文件适用于贝类样品中脂溶性海洋生物毒素的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过规范性引用构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件，仅该版本适用；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 贝类样品经甲醇提取，在碱性条件下水解释放酯化态毒素，经 HLB 固相萃取柱净化后，采用液相色谱分离、串联质谱检测，并通过外标曲线法进行定量分析。 4 试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯或以上级别。 4.1 乙腈（CH3CN），色谱纯。 4.2 甲醇（CH3OH），色谱纯。 4.3 甲酸（HCOOH）。 4.4 甲酸铵（HCOONH4）。 4.5 氨水（NH3·H2O），浓度 ≥25%。 4.6 氢氧化钠（NaOH）。 4.7 盐酸（HCl），浓度 ≥36%。 4.8 氢氧化钠溶液（2.5 mol/L）：称取 50 g 氢氧化钠，加水定容至 500 mL。 4.9 盐酸溶液（2.5 mol/L）：量取 104.5 mL 盐酸，加水定容至 500 mL。 4.10 30% 甲醇溶液：30 mL 甲醇与 70 mL 水混合。 4.11 20% 甲醇溶液：20 mL 甲醇与 80 mL 水混合。 4.12 0.3% 氨水甲醇溶液：0.3 mL 氨水用甲醇定容至 100 mL。 4.13 脂溶性海洋生物毒素标准溶液（见附录A）：包括 OA、DTX1、DTX2、PTX2、YTX、homoYTX、AZA1、AZA2、AZA3、GYM、SPX1 等，纯度 ≥97%，于 -20℃ 避光保存。 4.14 标准储备液：将各标准溶液用甲醇配制，经 0.22 μm 滤膜过滤，-20℃ 避光保存。典型浓度为： OA 40 ng/mL，DTX1 40 ng/mL，DTX2 40 ng/mL，YTX 400 ng/mL，homoYTX 400 ng/mL，PTX2 1000 ng/mL，SPX1 200 ng/mL，GYM 10 ng/mL，AZA1 200 ng/mL，AZA2 100 ng/mL，AZA3 100 ng/mL。 4.15 混合标准工作溶液：分别配制正离子模式（PTX2、AZA1、AZA2、AZA3、GYM、SPX1）和负离子模式（OA、DTX1、DTX2、YTX、homoYTX）混合标准溶液，经 0.22 μm 滤膜过滤，-20℃ 避光保存。