ICS 07.060；13.060.01 Z17 HY 中华人民共和国海洋行业标准 HY/T 231—2018 藻类总脂的提取和测定 Extraction and determination of the total lipid in algae 2018-02-13发布 2018-05-01实施 国家海洋局发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家海洋局提出。 本标准由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC 283）归口。 起草单位：国家海洋局第一海洋研究所、中国科学院海洋研究所、中国海洋大学。 主要起草人：杨佰娟、李倩、郑明刚、郑立、韩笑天、刘涛、朱明壮、陈发荣。 1 范围 本标准规定了海洋藻类中总脂的提取和测定方法。 本标准适用于海洋藻类中总脂的提取和测定，其他藻类样品可参考使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡注日期的引用文件，仅注日期版本适用；凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 方法原理 藻类样品中的脂类化合物经甲醇-氯仿混合溶液提取后，采用重量法测定其总脂含量。 4 试剂 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。 4.1 氯化钠（NaCl） 4.2 无水硫酸钠（Na2SO4） 4.3 氯仿（CHCl3） 4.4 甲醇（CH3OH） 4.5 液氮 4.6 甲醇-氯仿混合溶液（体积比2:1），临用前配制 4.7 1%氯化钠溶液：称取1 g氯化钠溶于水并定容至100 mL，有效期1个月 5 仪器和设备 5.1 电子天平（感量0.1 mg） 5.2 粉碎机 5.3 超声波清洗器（200 W） 5.4 氮吹仪 5.5 离心机（8000 r/min） 5.6 烘箱 5.7 冷冻干燥器 5.8 研钵 5.9 分液漏斗 5.10 具塞离心管 5.11 鸡心浓缩瓶 6 总脂的提取及测定 6.1 藻粉制备 藻类样品经冷冻干燥器干燥24 h。大型藻经粉碎机粉碎并过80目筛，微藻可直接进行后续处理。 6.2 提取 6.2.1 称取约0.2 g藻粉于研钵中，加入液氮反复研磨2～3次，每次约5 min。用7.0 mL甲醇-氯仿混合溶液分2～3次转移至离心管中。 6.2.2 将离心管置于超声波清洗器中超声提取5 min后，以6000 r/min离心15 min，收集上清有机相。残渣再用1.5 mL甲醇-氯仿混合溶液超声提取2次，每次5 min，合并有机相。 6.2.3 将合并溶液加入分液漏斗中，加入2.5 mL氯仿和3.0 mL 1%氯化钠溶液，混匀静置分层，回收下层有机相。 6.2.4 对上、中层溶液再次用氯仿萃取，合并下层溶液，经无水硫酸钠脱水后转入已称重鸡心浓缩瓶，用氮吹仪吹至近干。 6.3 总脂测定 将鸡心浓缩瓶置于烘箱中50℃烘干至恒重，称量得到总脂与容器总质量。 7 结果计算 总脂质量分数按公式计算： w = (m2 - m1) / m × 100% 式中： m 为干藻粉质量（g）； m1为鸡心浓缩瓶质量（g）； m2为总脂与鸡心浓缩瓶总质量（g）。 结果保留两位小数。 8 精密度 重复性条件下，两次独立测定结果的相对差值不大于10%；再现性条件下不大于15%，在规定条件下不超过5%。 参考文献 [1] https://www.thesprucepets.com/defining-micro-and-macro-algae-2924083