ICS 07.060；13.060.01 Z17 HY 中华人民共和国海洋行业标准 HY/T 228—2018 藻类脂肪酸的测定 气相色谱法 Determination of fatty acids in algae — Gas chromatography 2018-02-13发布 2018-05-01实施 国家海洋局发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家海洋局提出。 本标准由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC 283）归口。 起草单位：国家海洋局第一海洋研究所、中国科学院海洋研究所、中国海洋大学。 主要起草人：杨佰娟、李倩、郑明刚、郑立、韩笑天、刘涛、朱明壮、陈发荣。 1 范围 本标准规定了藻类中脂肪酸的气相色谱测定方法。 本标准适用于藻类中脂肪酸的测定，其他藻类样品可参考使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件，仅注日期版本适用；不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 方法原理 藻类样品中的脂肪酸经皂化、甲酯化处理后，用正己烷提取，再采用气相色谱法进行分离与检测，从而实现脂肪酸的定性与定量分析。 4 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 氢氧化钾（KOH） 4.1.2 盐酸（HCl） 4.1.3 氯化钠（NaCl） 4.1.4 正己烷（C6H14），色谱纯 4.1.5 甲醇（CH3OH），色谱纯 4.1.6 无水硫酸钠（Na2SO4），400℃灼烧4 h，冷却密闭保存，有效期1个月 4.2 试剂配制 4.2.1 饱和氢氧化钾甲醇溶液 称取40 g氢氧化钾溶于100 mL甲醇中，混匀澄清备用，室温可保存2个月。 4.2.2 盐酸甲醇溶液（1 mol/L） 取10 mL盐酸加入110 mL甲醇中混匀，室温可保存2个月。 4.2.3 饱和氯化钠溶液 称取360 g氯化钠溶于1 L蒸馏水中，室温可保存2个月。 4.3 标准品 4.3.1 十一碳酸甘油三酯（纯度>99%） 4.3.2 十一碳酸甲酯标准品（纯度>99%） 4.3.3 混合脂肪酸甲酯标准品 4.3.4 单个脂肪酸甲酯标准品（纯度>99%） 4.4 溶液配制 4.4.1 内标溶液（0.15 mg/mL） 称取15 mg十一碳酸甘油三酯定容至100 mL甲醇中，4℃避光保存，有效期1个月。 4.4.2 单个脂肪酸甲酯标准溶液（1 mg/mL） 称取100 mg标准物质定容至100 mL正己烷中，-20℃保存，有效期3个月。 4.4.3 混合脂肪酸甲酯标准溶液（10 μg/mL） 将混合标准溶液稀释至10 μg/mL，-20℃保存，有效期3个月。 5 仪器和设备 5.1 气相色谱仪（配氢火焰离子化检测器） 5.2 电热恒温水浴锅（25℃~100℃，精度±1℃） 5.3 电子天平（感量0.1 mg） 5.4 粉碎机 5.5 具塞离心管 5.6 容量瓶 5.7 研钵 6 分析步骤 6.1 藻粉制备 藻类样品冷冻干燥24 h。大型藻经粉碎机粉碎并过80目筛，微藻直接用于后续处理。 6.2 皂化 称取约20 mg藻粉于研钵中，加入0.2 mL十一碳酸甘油三酯内标溶液，并加入液氮进行处理（后续步骤略）。