WS/T 791—2021 ICS 11.020 CCS C 61 中华人民共和国卫生行业标准 钩虫检测及虫种鉴定标准 钩虫培养法 Detection and identification standard of hookworm — Hookworm larvae coproculture techniques 发布：2021-11-23 实施：2022-05-01 中华人民共和国国家卫生健康委员会发布 前言 本标准由国家卫生健康标准委员会寄生虫病标准专业委员会负责技术审查和技术咨询，由中国疾病预防控制中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委疾病预防控制局负责业务管理、法规司负责统筹管理。 本标准起草单位：河南省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、浙江省疾病预防控制中心。 本标准主要起草人：许汴利、邓艳、郑彬、陈伟奇、张雅兰、陈颖丹、阮卫、张红卫。 1 范围 本标准规定了钩虫培养法对十二指肠钩口线虫和美洲板口线虫进行检测的方法。 本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对钩虫的检测及虫种鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过规范性引用构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件仅适用于该版本，不注日期的引用文件其最新版本（包括修改单）适用本标准。 WS 233 病原微生物实验室生物安全通用准则 WS/T 439 钩虫病的诊断 3 术语和定义 3.1 十二指肠钩口线虫 Ancylostoma duodenale（十二指肠钩虫） 属于钩口科、钩口线虫属，我国主要分布于北方地区。 3.2 美洲板口线虫 Necator americanus（美洲钩虫） 属于钩口科、板口线虫属，我国主要分布于南方地区。 3.3 钩虫幼虫 hookworm larvae 钩虫的幼虫，分为杆状幼虫和丝状幼虫两个阶段，其中丝状幼虫为感染阶段，其形态特征有助于虫种鉴定。 4 仪器设备 4.1 生物显微镜（物镜10×、40×，目镜10×）。 4.2 培养箱（隔水式恒温）。 4.3 目镜测微尺（5mm/50/0.1mm）和物镜测微尺（1mm/100/0.01mm）。 5 试剂或材料 5.1 试管（12.0cm×1.5cm）或15mL离心管。 5.2 滤纸条（12cm×2cm），边缘整齐、无毛边。 5.3 蒸馏水。 5.4 试管架。 5.5 载玻片（76mm×26mm）。 5.6 盖玻片（20mm×20mm）。 5.7 吸管（2mL、10mL）。 5.8 镊子。 5.9 刮棒（加藤板配套刮棒）。 5.10 温度计。 6 检测步骤 6.1 样本采集 取5g～10g新鲜粪便置于采样盒或采样袋中，标记编号与日期，及时送检。如不能及时检测，应在4℃～8℃冷藏保存，不超过24h。 6.2 样本检测 6.2.1 在试管上标注编号和日期。 6.2.2 加入约2mL室温蒸馏水。 6.2.3 滤纸条沿长轴对折保持挺直。 6.2.4 取0.3g～0.5g粪便均匀涂抹于滤纸中段偏上部，两端留空（示意见附录A）。 6.2.5 将滤纸插入试管，使粪膜下缘距水面约1cm。 6.2.6 在31℃培养4天或26℃～30℃培养6～8天，期间保持液面高度防止干燥。 6.2.7 分离幼虫：加入45℃蒸馏水淹没滤纸，静置1小时后取出滤纸，再静置1小时后吸取沉淀液约0.5mL。 6.3 镜下观察 将沉淀物置载玻片，加盖玻片，在10×10低倍镜下观察，发现疑似虫体后在40×10高倍镜下观察，并用测微尺测量大小。 6.4 结果判定 未检出钩虫幼虫判为阴性；检出则判为阳性，并依据丝状幼虫形态进行十二指肠钩虫与美洲钩虫鉴定。 6.5 废弃物处置 所有实验废弃物按WS 233规定处理。 附录A（资料性）钩虫培养法操作示意 包括粪样涂抹与培养操作示意图。