饲料中维吉尼霉素M的测定 液相色谱-串联质谱法 DB35/T1141-2011 本标准规定了液相色谱-串联质谱法测定饲料中维吉尼霉素M含量的方法。适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中维吉尼霉素M的含量测定。本方法的检出限为2μg/kg，定量限为7μg/kg。 前言 本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则编写，由福建省质量技术监督局提出并归口，福建省产品质量检验研究院起草，主要起草人包括陈永煊、黄永辉、欧阳立群、林钦、戴明、黄红霞、郑小严。 1 范围 本标准规定了液相色谱-串联质谱法测定饲料中维吉尼霉素M含量的方法。适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中的维吉尼霉素M含量测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的： GB/T6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 试样中维吉尼霉素M经乙睛-甲酸水溶液超声提取，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂与材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T6682-2008规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙睛：色谱纯。 4.3 甲酸：优级纯。 4.4 0.2% 甲酸水溶液：取1mL甲酸（4.3），加水至500mL，混匀。 4.5 0.3% 甲酸水溶液：取3mL甲酸（4.3），加水至1000mL，混匀。 4.6 提取溶液：取400mL乙睛（4.2）与100mL甲酸水溶液（4.4）混匀。 4.7 标准物质：维吉尼霉素M（CAS：21411-53-0），纯度≥95.0%。 4.8 标准储备溶液：准确称取3.5mg维吉尼霉素M，用甲醇溶解配制成浓度为0.33mg/mL标准储备溶液，-20℃保存，有效期6个月。 4.9 标准中间溶液：吸取适量维吉尼霉素M标准储备溶液（4.8），用甲醇配成13.3μg/mL和2.7μg/mL两种浓度的标准中间溶液，-20℃保存，有效期1个月。 4.10 基质标准工作溶液：吸取适量维吉尼霉素M标准中间溶液（4.9），用与试样基质相应的空白样品按6.1处理方法制备的空白样品提取液，配成0.3ng/mL～226.6ng/mL的基质标准工作溶液，现配现用。 5 仪器 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。 5.2 超纯水纯化系统。 5.3 电子天平：感量0.0001g。 5.4 冷冻离心机：最大转速不低于10000r/min。 5.5 聚丙烯离心管：50mL。 5.6 旋涡混匀器。 5.7 超声波清洗器：频率为40kHz。 5.8 高速万能粉碎机。 5.9 尼龙膜过滤器：0.22μm。 6 分析步骤 6.1 试样预处理 称取适量试样（1g~5g，精确至0.1mg），置于50mL离心管（5.5）中，加入25mL提取溶液（4.6），涡旋后冰浴超声提取40min，于4℃15000r/min离心5min，将上清液转移至50mL容量瓶中。再往残渣中加入25mL提取溶液（4.6），同法重复提取一次，合并上清液，用提取溶液（4.6）定容至50mL，摇匀，过0.22μm滤膜（5.9），供液相色谱-串联质谱仪测定。 6.2 测定 6.2.1 液相色谱条件 a) 色谱柱：C18柱，柱长50mm，柱内径2.1mm，柱填充物粒度1.7μm，或相当者。 b) 柱温：40℃。 c) 进样量：2.0μL。 d) 流速：0.5mL/min。 e) 流动相：35%的乙腈（4.2）和65%的甲酸水溶液（4.5）。 6.2.2 参考质谱条件 a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）。 b) 扫描方式：正离子扫描。 c) 检测方式：多反应监测（MRM）。 d) 毛细管电压：3500V。 e) 干燥气温度：325℃。 f) 干燥气流速：5L/min。 g) 雾化气压力：45psi。 h) 鞘气温度：400℃ i) 鞘气流速：12L/min。 j) 其他质谱参数见表1。 6.2.3 定性测定 维吉尼霉素M主要参考质谱参数：母离子 (m/z) 526.3, 子离子 (m/z) 508.2、355.1、337.1，滞留时间 (ms) 200，裂解电压 (V) 200。