DB34/T822-2020《动物组织中地西洋的残留测定 酶联免疫吸附法》 前言 本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则》的规定起草，代替DB34/T822-2008《动物组织中地西泮的残留测定—酶联免疫吸附法》。主要技术变化包括：修改标准名称，优化试剂和溶液内容（第4章），合并试样制备章节并优化样品处理方法（第6章），增加匀浆机和离心机参数要求（第5.2和5.3），将百分吸光度值改为相对吸光度并增加稀释倍数换算描述（第8章），提高检测灵敏度，检测限调整为1.0μg/kg（第9.1章），修改确认方法表述（第10.2章）。 本标准由安徽省兽药饲料监察所提出，由安徽省农业标准化技术委员会归口。起草单位包括安徽省兽药饲料监察所、安徽华测检测技术有限公司、宁国市金鼎家庭农场、合肥市动物疫病预防与控制中心、安徽华澳生物技术有限公司、安徽省农产品质量安全检测中心、合肥市动物卫生监督所、安徽省水产技术推广总站、铜陵市义安区畜牧兽医局、宁国市自然资源和规划局。本标准主要起草人包括许世富、郑新勇、李生龙、卡红正、何广、汪桃花、徐勇、许晓靖、孙德祥、刘红云、何为俊、王美娟。 1 范围 本标准规定了动物肌肉、肝脏、肾脏中地西洋残留的酶联免疫吸附测定方法，适用于动物组织中地西洋残留的快速检测。 2 规范性引用文件 凡是注日期的引用文件，其所注日期版本适用于本标准；未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。本标准引用： - GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 残留在组织中的地西洋经提取后用于酶联免疫分析。试样中的地西洋抗原与微孔板上包被的地西洋特异性抗体发生免疫竞争反应，加入显色底物和终止液后，在450nm处测量吸光度，试样中地西洋含量与颜色呈反比，通过换算可获得样本中地西洋含量。 4 试剂和溶液 4.1 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。 4.2 竞争酶标免疫法地西洋检测试剂盒2℃～8℃冰箱保存。 4.2.1 微孔板：包被地西洋抗体。 4.2.2 地西洋标准溶液：1 μg/mL。 4.2.3 地西洋标准工作液：0 μg/L，0.1 μg/L，0.2 μg/L，0.4 μg/L，0.8 μg/L，1.6 μg/L。 4.2.4 酶标二抗。 4.2.5 费抗体工作液（浓缩复溶液：0.5%磷酸盐缓冲液）。 4.2.6 底物A液：TMB缓冲液。 4.2.7 底物B液：双氧水溶液。 4.2.8 显色剂。 4.2.9 终止液：2 mol/L硫酸溶液。 4.3 洗涤工作液：用水20倍稀释厂商提供的浓缩洗涤液。 4.4 复溶工作液：用水2倍稀释厂商提供的浓缩复溶液。 4.5 0.1 mol/L氢氧化钠溶液：称取0.4 g氢氧化钠，加水定容至100 mL，混匀备用。 4.6 正己烷。 5 仪器设备 5.1 酶标仪（带450nm滤光片）。 5.2 匀浆机：≥10000 rpm。 5.3 离心机：≥5000 rpm。 5.4 分析天平：感量0.01 g。 5.5 氮吹仪。 5.6 振荡器。 5.7 离心管：20 mL。 5.8 微量移液器及配套吸头（单道50 μL，100 μL，1000 μL，多道50 μL～300 μL）。 6 试样制备 6.1 样品处理 动物肌肉、肝脏、肾脏去筋后切成小块，制成肉糜。10000 rpm均质2 min，取2 g±0.05 g均质样品，加入8 mL 0.1 mol/L氢氧化钠溶液，震荡混匀5 min，5000 rpm离心10 min，取1 mL上清液加入10 mL正己烷，震荡混匀5 min，5000 rpm离心5 min，取上层正己烷5 mL，50℃氮气吹干，加1 mL复溶工作液溶解，取50 μL用于检测。 6.2 样品贮存 试样按照测试和备用分别存放于-20℃～-16℃条件下保存。 7 测定步骤 后续章节包括具体的酶联免疫吸附操作步骤及数据分析。