DB51/T2708—2020 副猪嗜血杆菌防治技术规范

发布日期：2020-10-21
实施日期：2020-12-01
发布单位：四川省市场监督管理局

前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由四川省农业农村厅提出、归口并解释。本文件由四川省市场监督管理局批准。
本文件起草单位：四川省畜牧科学研究院。
本文件主要起草人：康润敏、于吉锋、谢晶、曹冶、魏勇、林毅、廖党金、叶勇刚、李兴玉、肖璐、叶健强、潘梦、戴卓建、张先惠。

1 范围
本文件规定了副猪嗜血杆菌病的术语和定义、诊断、预防和治疗方法的要求。本文件适用于四川省行政范围内副猪嗜血杆菌病的诊断和防治。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
NY/T3075 畜禽养殖场消毒技术
NY5027 无公害食品畜禽饮用水水质
NY/T5030 无公害农产品兽药使用准则

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 副猪嗜血杆菌病
副猪嗜血杆菌病又称格拉泽氏病。是由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPs）所引发的一种泛嗜性细菌性传染病，各年龄段猪均可发病，主要影响断奶前后和保育阶段的猪，临床特征以多发性浆膜炎（如关节炎、心包炎、腹膜炎）和伴发肺炎为主。

4 诊断
4.1 流行特点
病猪和病原携带猪是主要传染源，经呼吸道传播。当群中存在呼吸道疾病或饲养环境不良时，本病易多发。断奶、转群、混群或运输也是常见的诱因。副猪嗜血杆菌主要感染仔猪，断奶前后和保育阶段仔猪易感，常见于2～8周龄的仔猪，断奶后10～40d出现发病峰值。
4.2 临床症状
4.2.1 急性型
高热，体温达40℃～41℃，食欲减退及厌食，咳嗽、呼吸困难，关节肿胀、跛行、步态僵硬，同时出现身体颤抖、共济失调等神经症状，可视粘膜发绀。
4.2.2 慢性型
消瘦，被毛粗乱，精神萎靡，咳嗽，呼吸频率和深度都显著增加，腹式呼吸，关节发炎甚至肿大，病猪站立困难，不愿行走，呈侧卧状态。
4.3 病理变化
胸膜肺炎，胸膜腔积液、肺部被纤维蛋白膜包裹，腹膜存在纤维蛋白沉淀，浆液性、纤维素性渗出特征明显；心包积液、心包内常见干酪样渗出物与心脏粘连形成“绒毛心”；全身淋巴结肿大出血，关节肿大，有浆液性渗出性炎症。
4.4 实验室检测
4.4.1 细菌分离培养
无菌采集病料接种含1μg/mL NAD和5%小牛血清的胰蛋白大豆琼脂培养基（Tryptic Soy Agar，TSA），37℃培养24～48h，经48h培养后可见不溶血、半透明、圆形隆起、边缘整齐、光滑湿润、直径约1-2mm的菌落。革兰氏染色镜检可见呈短杆状、长线状等多种形态的革兰氏阴性杆菌。
将TSA平板上疑似菌落与金黄色葡萄球菌垂直划线无NAD的鲜血琼脂平板，37℃培养24～48h，可在金黄色葡萄球菌周围长出“卫星现象”。
4.4.2 生化鉴定
将纯培养的疑似副猪嗜血杆菌接种含1μg/mL NAD的葡萄糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖、甘露醇等微量生化鉴定管，置体积分数5% CO2培养箱，37℃培养24h。副猪嗜血杆菌过氧化氢酶试验和硝酸盐还原试验为阳性，能发酵葡萄糖、麦芽糖、木糖、阿拉伯糖、蔗糖、果糖等碳水化合物。
4.4.3 聚合酶链式反应（PCR）
模板制备：挑取单菌接种含1μg/mL NAD和5%小牛血清的TSB液体培养基，37℃摇床中160r/min振荡培养12～16h，采用商品化细菌DNA提取试剂盒提取。
引物合成：采用副猪嗜血杆菌16S rDNA序列中一段合成上游引物：5'-GTGATGAGGAAGGGTGGTGT-3'，下游引物：5'-GGCTTCGTCACCCTCTGT-3，片段长度约821bp。
反应体系（25μl）：2倍PCR Mix 12.5μl，上游引物1.0μl，下游引物1.0μl，模板2.0μl，ddH2O 9.5μl。
反应条件：94℃变性3min；94℃30s，55℃30s，72℃1min，共35个循环，72℃终延伸10min。
结果判定：PCR产物经1.2%的琼脂糖凝胶电泳，出现约821bp大小的条带判定为副猪嗜血杆菌阳性。
4.4.4 血清型鉴定
制备待检菌株的分型抗原，用副猪嗜血杆菌标准阳性血清和阴性血清，按照琼脂扩散试验分型方法进行。

5 预防
5.1 饲养管理
国内外引种应隔离饲养1个月以上方可混群；饲喂营养丰富的全价料；保持猪舍通风、光照合理、密度适宜、禁止混养；做好猪舍冬季保温、夏季防暑降温，保障猪舍内饮水器及食槽数量；饮水中加入抗应激类药物如多维、维生素C以防止和减少应激；按照科学的免疫程序做好猪瘟、猪口蹄疫、猪圆环等其他病原的免疫；定期检测水质，饮水标准应达到NY5027无公害食品畜禽饮用水水质要求。
5.2 生物安全
出入猪舍严格消毒；定期对猪舍进行严格消毒，易感猪群及已感猪群可采用粉剂消毒剂消毒；全进全出，猪群转舍或出栏后对猪舍彻底消毒，定期消毒及彻底消毒程序参照NY/T3075的要求进行。