JY/T 019-1996
基本信息
标准号： JY/T 019-1996
中文名称：氨基酸分析方法通则
标准类别：教育行业标准(JY)
标准状态：现行
发布日期：1997-01-23
实施日期：1997-04-01
出版语种：简体中文
下载格式：.rar.pdf
下载大小：122507
标准分类号
中标分类号：仪器、仪表>>物质成分分析仪器与环境监测仪器>>N50物质成分分析仪器与环境检测仪器综合
关联标准
出版信息
页数：8页
标准价格：14.0 元
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标准简介
JY/T 019-1996 氨基酸分析方法通则 JY/T019-1996 标准下载解压密码：www.bzxz.net
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标准内容
现代分析仪器分析方法通则
氨基酸分析方法通则
0191996
General rudes for amino tcid analysis1997-01-23发布
1997-04-01实施
本标群的编写格式耐方法符合GH[1. 1--1993标难化.1作导则第1单元：标准的起
节与表述规则，第部分，标准端写的基本规定,GB/T1.488标准化工作导则化学分
析方法标准缩写规定的要求，
本标准土要起草单位：国家敦育委员会本标准主要起草人：李聪刘子列0
1范围
2定义
方法原理
试剂和材料
7分析步滕
分析结果的表述
9安全注意事项
氧基酸分析方法通则
General rules for amino acid anatysis0191996
本力法适再于异硫氰酸革酯柱前衍生法定性、定墨测定栏品中水解题基酸、游离氨基酸以受不常沈的氨基酸。
.氨基酸bZxz.net
Amino aeid
分子内含氨基（亚氨基)和羧基的有机物化合物的总软。根据氨基（业氨基）与羧基机对位置的不，分为α-，了-,α-w-氨基酸。α-氮基酸是组成白质的基本单位。带规的氨基酸分析正要指蛋白质水解氮基酸，游离筑基酸的分离测定。2.2挂前衍牛
Pre-culuinrderivatization
为了携高氮基酸分析的检测灵敏度和分离选择特性，避需采用使氧基酸衍生化的方法。柱前行生法，即样品在用分析柱分离前进行衍生化反应，然后经色谱柱对衔生物进行分高2.3梯度洗脱
Gradiert elurion
间断地或连续地改变流动相组成或其它操作条件，从雨政变色谱洗脱能力的过程。Baseline
2.4基线
在正常操作条件下，仅有流动相通过检测器系统时所产生的响应信号曲线，基线成映仪器内喉音随过问的变化
2.5$谱峰
Chromatographic peak
色谐杜流出组分通过检测系统时，所产生的响成信号对时间作图所得的曲线，曲线的窦起部分称为色谱峰。
2. 6峰面积
Penkarea
色诺峰所包括的面积，
2.7 保留时间
Rctention tirnc.
从进样开始到某个组分的色谱睡出现，最大值的时间间隔称为该组分的保留时间，用地表亲。
2. 8 标准样品
Standard sample
作为定性及定量鉴定用的纯物质。PICO-TAGTM氨基酸分析使用的是美国PIERCE生户的按定比例混合配制而成的17种水解氨基酸标准波和38种游离氨基酸标准液。Standard sample calibration curve2.9标准校正典线
用标准样品配制的一系列不同浓度的标准液上机测试后，经计算绘制的作定量分析的标国家教育秀员会1997-01-22批准1997-84-01 实施
准曲线。
3方法原理
JY/T 019 - 1996
采用异硫酸苯醋 (PITC)作为柱前衍生剂。PITC 与氨基酸分子中的氨基(亚氨基)发生定量的衔生化反应.产生苯基硫代甲酰-愈基酸PTC-AA，反应如图1所示。过盘的PITC通过真空于燥除害：
-CI NH, CHR
pH-9~10
N CHR.C-.OH
PTC-AA
离 2 PITC 与氨基酸的衍生化反应衍生产物苯基硫代氨甲酰氨基酸[PTC-AA)的混食物在色谱杜中随流动相作相对移动，合氢基酸衍生物在两相间进行反复多次的分配。因两相间分配系数不尚，使漏合组分达到分离，
由于PITC试剂与氨基酸发生衔生化反应生成PTC-AA，在氨基酸的结构上引入了苯环、使氨基酸的极性降低而有利于反相色谱分离。基环的引入间时也使紫外检测器能够高灵敏皮地定检测PTC-AA。PTC-AA结构稳定可在室温下放置数小时或冰箱内放置一周不变质：以标准混合氨基酸的PITC积生物PTC-AA绘制标准.I作曲线.即可对待测试样中的PTC-AA进行定量分析，
4试剂和材料
所用试剂除已注明外，均需色谱纯或优级纯(相对比例按质比)。4. 1 水解氨基醛(HAA)测定试剂4.1.1 流动相
A液19.gNaAc·3H0,0.5ml2胺和200l0.0%EDTA溶于1000ml超纯水中，用冰醋水溶液调pH至6.40后用0.45μ的滤膜过滤。分别取940ml此液与60ml乙混合，在真空下超声波脱气20s后，充氮备用。B液：分别量取600ml乙晴，400rml超纯水和200l0.0%EDTA混合后在真空下超声波脱气 20起后备用。
4.1.2样品水解液：1g苯酚溶解于6mol/1.HCl100ml中或直接加200μl6mol/LHCl及0.5mg苯酚（结晶状)于空样品管中备用4.1.3再干燥试剂：乙酵+水*兰z胺=2：2t14.1.4衍生试剂：异硫氰酸萍酯！乙醇·三乙蔽水=17！：14.1.5样品稀释液：取?10mgNazHPO，加超净水溶至1000nilr用10%爵酸*乙睛（955）磷酸乙腈液调pH=7.40备用]。
4.2游离氨基酸(FAA)测定试剂
4. 2. 1流动相
JY/T 19--1996
A 液称取 9.54g NaAc·3H,O(或 5.75g NaAc)加 1000ml 超纯水,境拌至完全罐解(用10%z.酸调H值至6.50±0.02，用0.45m的滤膜过滤。分别取25ml乙满，250ml10mmol/L.EDTA和975ml上述配制的溶液充分混合后在真空下超声波脱气20g。B液：分别取450ml乙脑，150m甲酵和400ml翅纯水，滤合均匀，并在真空下超声波脱气30%后备用，
4.2.2再平燥试剂：甲醇:1.Dmol/L酷钠1三乙胺-212 14.2.3衍生试剂：异硫氰酸苯酯：中醇：三乙胺：水=17：1，14.3不常见氮基酸的测定应根据其结构特点配制不同流动相及试剂进行分析。s仪器
5.1仪器性能必须满足检定规醒的要求5.2.1装實结构连接图，如图2所示。A条
进样器
色谱柱
温度控制器
色谱工作站
图2氨基酸分析仪连接图
水解衍生工作台
检测器
5.2.2仪器装置系统管路连接是确保系统间蛋现性的关链因案。5. 3主要装置
5.3.1温度控制器
控制氨基酸分析柱温糖的温度。5.3. 2 泵
根据仪器需要，须配置两台泵。5. 3. 3进样器
于动进样器、自动进样器均可
5.3.4色谱柱
蛋白质水解试样选用氨基酸分析柱(HAA),生理体液试样选用游离氮基酸柱(FAA)。5.3.惠检测器
选用紫外检测器。
5.3.6色谱工作站
JI7T#19—1996
选WATFRS810或820及其他色谱T作站。5.3.7水解行生工作台
用于样品的水解、恒温、于碟,拍真空、充氮下作。6样品
6.1样品处理
6.1.1准备
注 : 133. 3Pa=1 torr = 1 mmHg确称取一定量的样品（蛋白质为0.5ug～10ug），溶液样品（蛋白、肽）20xl～30刚l最100ml.人洗净的样品小管中。6.1.2干燥
把样品管放入到水解反应瓶中并盖紧瓶盖，将反应瓶安放在水解工作台土并连接真空和纯摄，打开真空旋钮，60mT~-100m（8Pa--13Pa）真空干燥2Umin~3umin启，取下反应瓶在瓶底部加人200μl样品水解液。
6.1.3置换空气
把反应瓶装到水解工作台1.1T~2T（133Pa～266P）抽气20g~30s，氧气控制作0.15kg/cm充氮5s左右，反复置换三次，取下反应瓶。6.2水解与衍生
将反应瓶放人水解T作台恒温加热器中水解（150C2h或105℃24h），水解完成后.从恒温加热器中取出反应瓶，将样品管取山放入新反应瓶中，重盘t.2十烘接作，6. 2. 1 再十燥
在样品管中注人10ml再干燥被，涡旋搅拌器搅拌均句，放入反应瓶中，在水解工作台60mt~i00nr(8Pa～13Ps）真空十爆（20min~3Gmin）后取出品管。6. 2. 2绗生反应
再T燥后的样品管中注入2(%1衍生试剂（要求现配，并在2h内使用）.涡旋搅拌器搅拌均句后放入反应瓶中，并在室温下放置15min，然后在水解工作台上60mz～100mt真穿干燃，等完全下燥后放置冰箱中待测。
6.2.3生样品溶解
将样品管取出，放入100ml样品稀释液，用涡靠搅拌器滤均后待测。6.3游离氨基酸不须水解，样品经超滤处理后·直接进行干爆、再下燥，衍生等工作。7分析步骤
7.1打开计算机，按操作程序编饵方法文件、梯度程序，积分参数以及组分表等工作参数。7.2开机设定紫外检测器检测入254nm，柱凝38，7.3用梯度平衡仪器，待基线平稳后，即可进样分析。7.4直接用微量进样器吸取已释好的试样或将试样装入自或进样器样品瓶内进行分析。7.5用水解氨基酸（HAA）或游离氮基酸（FAA）混合标样配制一→系列不同浓度的标准波，与待测试样同时衍生化后进样分析，计算机按所设定的分析参数收集并处数据，318
8分析结果的囊述
019-1996
8.1据分析工作图谱，判渐所测17种或38种氨基酸的分离是否正常（具体标准详见注
B.2根据所测标准偿品中各翘基酸的保留时间，对所测未知试样进行定性分析8.3根据所测标准样品中各氨氢基酸的峰面积的工作曲线与校正因子，对所测未知试样进行定量分析。
8.4将断得结果换算为质量浓度或质量分数。9安全注意事项
9.1环境要求
仪器工作室温10℃～30（相对湿度30%～85%，室内不得存放腐蚀性气体，液体和易燃易爆物，防止掘动和强光直射，应避风良好。9.2安全事项
9..1电源应良好接地，仪器应有单独接地线，9.2：2应在通风相内使用有毒、数燃易爆的有机试剂，9.2.3废弃的流动相波体应专门处理9.2.4仪器高压泵设有报警灯，正常工作时应注意，一且报红灯亮时，应采取相应的处理措，
附注：
水解氮基酸色谱图的分析：(15cm柱）一、色谱保留时间应基本与下列指标相符：ASP=1. 75~1.95
PRO-5.75.~6.20
ARG -- 5. 2~- 5. 7
LYS-1G. 8~-11.5
二、色谐峰的分辩率应基本与下列指标相符ILEVEU和THRALA之间的分辩率BO收2.其它所有蜂的分辨率应>85%
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氨基酸分析方法通则
0191996
General rudes for amino tcid analysis1997-01-23发布
1997-04-01实施
本标群的编写格式耐方法符合GH[1. 1--1993标难化.1作导则第1单元：标准的起
节与表述规则，第部分，标准端写的基本规定,GB/T1.488标准化工作导则化学分
析方法标准缩写规定的要求，
本标准土要起草单位：国家敦育委员会本标准主要起草人：李聪刘子列0
1范围
2定义
方法原理
试剂和材料
7分析步滕
分析结果的表述
9安全注意事项
氧基酸分析方法通则
General rules for amino acid anatysis0191996
本力法适再于异硫氰酸革酯柱前衍生法定性、定墨测定栏品中水解题基酸、游离氨基酸以受不常沈的氨基酸。
.氨基酸bZxz.net
Amino aeid
分子内含氨基（亚氨基)和羧基的有机物化合物的总软。根据氨基（业氨基）与羧基机对位置的不，分为α-，了-,α-w-氨基酸。α-氮基酸是组成白质的基本单位。带规的氨基酸分析正要指蛋白质水解氮基酸，游离筑基酸的分离测定。2.2挂前衍牛
Pre-culuinrderivatization
为了携高氮基酸分析的检测灵敏度和分离选择特性，避需采用使氧基酸衍生化的方法。柱前行生法，即样品在用分析柱分离前进行衍生化反应，然后经色谱柱对衔生物进行分高2.3梯度洗脱
Gradiert elurion
间断地或连续地改变流动相组成或其它操作条件，从雨政变色谱洗脱能力的过程。Baseline
2.4基线
在正常操作条件下，仅有流动相通过检测器系统时所产生的响应信号曲线，基线成映仪器内喉音随过问的变化
2.5$谱峰
Chromatographic peak
色谐杜流出组分通过检测系统时，所产生的响成信号对时间作图所得的曲线，曲线的窦起部分称为色谱峰。
2. 6峰面积
Penkarea
色诺峰所包括的面积，
2.7 保留时间
Rctention tirnc.
从进样开始到某个组分的色谱睡出现，最大值的时间间隔称为该组分的保留时间，用地表亲。
2. 8 标准样品
Standard sample
作为定性及定量鉴定用的纯物质。PICO-TAGTM氨基酸分析使用的是美国PIERCE生户的按定比例混合配制而成的17种水解氨基酸标准波和38种游离氨基酸标准液。Standard sample calibration curve2.9标准校正典线
用标准样品配制的一系列不同浓度的标准液上机测试后，经计算绘制的作定量分析的标国家教育秀员会1997-01-22批准1997-84-01 实施
准曲线。
3方法原理
JY/T 019 - 1996
采用异硫酸苯醋 (PITC)作为柱前衍生剂。PITC 与氨基酸分子中的氨基(亚氨基)发生定量的衔生化反应.产生苯基硫代甲酰-愈基酸PTC-AA，反应如图1所示。过盘的PITC通过真空于燥除害：
-CI NH, CHR
pH-9~10
N CHR.C-.OH
PTC-AA
离 2 PITC 与氨基酸的衍生化反应衍生产物苯基硫代氨甲酰氨基酸[PTC-AA)的混食物在色谱杜中随流动相作相对移动，合氢基酸衍生物在两相间进行反复多次的分配。因两相间分配系数不尚，使漏合组分达到分离，
由于PITC试剂与氨基酸发生衔生化反应生成PTC-AA，在氨基酸的结构上引入了苯环、使氨基酸的极性降低而有利于反相色谱分离。基环的引入间时也使紫外检测器能够高灵敏皮地定检测PTC-AA。PTC-AA结构稳定可在室温下放置数小时或冰箱内放置一周不变质：以标准混合氨基酸的PITC积生物PTC-AA绘制标准.I作曲线.即可对待测试样中的PTC-AA进行定量分析，
4试剂和材料
所用试剂除已注明外，均需色谱纯或优级纯(相对比例按质比)。4. 1 水解氨基醛(HAA)测定试剂4.1.1 流动相
A液19.gNaAc·3H0,0.5ml2胺和200l0.0%EDTA溶于1000ml超纯水中，用冰醋水溶液调pH至6.40后用0.45μ的滤膜过滤。分别取940ml此液与60ml乙混合，在真空下超声波脱气20s后，充氮备用。B液：分别量取600ml乙晴，400rml超纯水和200l0.0%EDTA混合后在真空下超声波脱气 20起后备用。
4.1.2样品水解液：1g苯酚溶解于6mol/1.HCl100ml中或直接加200μl6mol/LHCl及0.5mg苯酚（结晶状)于空样品管中备用4.1.3再干燥试剂：乙酵+水*兰z胺=2：2t14.1.4衍生试剂：异硫氰酸萍酯！乙醇·三乙蔽水=17！：14.1.5样品稀释液：取?10mgNazHPO，加超净水溶至1000nilr用10%爵酸*乙睛（955）磷酸乙腈液调pH=7.40备用]。
4.2游离氨基酸(FAA)测定试剂
4. 2. 1流动相
JY/T 19--1996
A 液称取 9.54g NaAc·3H,O(或 5.75g NaAc)加 1000ml 超纯水,境拌至完全罐解(用10%z.酸调H值至6.50±0.02，用0.45m的滤膜过滤。分别取25ml乙满，250ml10mmol/L.EDTA和975ml上述配制的溶液充分混合后在真空下超声波脱气20g。B液：分别取450ml乙脑，150m甲酵和400ml翅纯水，滤合均匀，并在真空下超声波脱气30%后备用，
4.2.2再平燥试剂：甲醇:1.Dmol/L酷钠1三乙胺-212 14.2.3衍生试剂：异硫氰酸苯酯：中醇：三乙胺：水=17：1，14.3不常见氮基酸的测定应根据其结构特点配制不同流动相及试剂进行分析。s仪器
5.1仪器性能必须满足检定规醒的要求5.2.1装實结构连接图，如图2所示。A条
进样器
色谱柱
温度控制器
色谱工作站
图2氨基酸分析仪连接图
水解衍生工作台
检测器
5.2.2仪器装置系统管路连接是确保系统间蛋现性的关链因案。5. 3主要装置
5.3.1温度控制器
控制氨基酸分析柱温糖的温度。5.3. 2 泵
根据仪器需要，须配置两台泵。5. 3. 3进样器
于动进样器、自动进样器均可
5.3.4色谱柱
蛋白质水解试样选用氨基酸分析柱(HAA),生理体液试样选用游离氮基酸柱(FAA)。5.3.惠检测器
选用紫外检测器。
5.3.6色谱工作站
JI7T#19—1996
选WATFRS810或820及其他色谱T作站。5.3.7水解行生工作台
用于样品的水解、恒温、于碟,拍真空、充氮下作。6样品
6.1样品处理
6.1.1准备
注 : 133. 3Pa=1 torr = 1 mmHg确称取一定量的样品（蛋白质为0.5ug～10ug），溶液样品（蛋白、肽）20xl～30刚l最100ml.人洗净的样品小管中。6.1.2干燥
把样品管放入到水解反应瓶中并盖紧瓶盖，将反应瓶安放在水解工作台土并连接真空和纯摄，打开真空旋钮，60mT~-100m（8Pa--13Pa）真空干燥2Umin~3umin启，取下反应瓶在瓶底部加人200μl样品水解液。
6.1.3置换空气
把反应瓶装到水解工作台1.1T~2T（133Pa～266P）抽气20g~30s，氧气控制作0.15kg/cm充氮5s左右，反复置换三次，取下反应瓶。6.2水解与衍生
将反应瓶放人水解T作台恒温加热器中水解（150C2h或105℃24h），水解完成后.从恒温加热器中取出反应瓶，将样品管取山放入新反应瓶中，重盘t.2十烘接作，6. 2. 1 再十燥
在样品管中注人10ml再干燥被，涡旋搅拌器搅拌均句，放入反应瓶中，在水解工作台60mt~i00nr(8Pa～13Ps）真空十爆（20min~3Gmin）后取出品管。6. 2. 2绗生反应
再T燥后的样品管中注入2(%1衍生试剂（要求现配，并在2h内使用）.涡旋搅拌器搅拌均句后放入反应瓶中，并在室温下放置15min，然后在水解工作台上60mz～100mt真穿干燃，等完全下燥后放置冰箱中待测。
6.2.3生样品溶解
将样品管取出，放入100ml样品稀释液，用涡靠搅拌器滤均后待测。6.3游离氨基酸不须水解，样品经超滤处理后·直接进行干爆、再下燥，衍生等工作。7分析步骤
7.1打开计算机，按操作程序编饵方法文件、梯度程序，积分参数以及组分表等工作参数。7.2开机设定紫外检测器检测入254nm，柱凝38，7.3用梯度平衡仪器，待基线平稳后，即可进样分析。7.4直接用微量进样器吸取已释好的试样或将试样装入自或进样器样品瓶内进行分析。7.5用水解氨基酸（HAA）或游离氮基酸（FAA）混合标样配制一→系列不同浓度的标准波，与待测试样同时衍生化后进样分析，计算机按所设定的分析参数收集并处数据，318
8分析结果的囊述
019-1996
8.1据分析工作图谱，判渐所测17种或38种氨基酸的分离是否正常（具体标准详见注
B.2根据所测标准偿品中各翘基酸的保留时间，对所测未知试样进行定性分析8.3根据所测标准样品中各氨氢基酸的峰面积的工作曲线与校正因子，对所测未知试样进行定量分析。
8.4将断得结果换算为质量浓度或质量分数。9安全注意事项
9.1环境要求
仪器工作室温10℃～30（相对湿度30%～85%，室内不得存放腐蚀性气体，液体和易燃易爆物，防止掘动和强光直射，应避风良好。9.2安全事项
9..1电源应良好接地，仪器应有单独接地线，9.2：2应在通风相内使用有毒、数燃易爆的有机试剂，9.2.3废弃的流动相波体应专门处理9.2.4仪器高压泵设有报警灯，正常工作时应注意，一且报红灯亮时，应采取相应的处理措，
附注：
水解氮基酸色谱图的分析：(15cm柱）一、色谱保留时间应基本与下列指标相符：ASP=1. 75~1.95
PRO-5.75.~6.20
ARG -- 5. 2~- 5. 7
LYS-1G. 8~-11.5
二、色谐峰的分辩率应基本与下列指标相符ILEVEU和THRALA之间的分辩率BO收2.其它所有蜂的分辨率应>85%
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。