本通则规定了用高效液相色谱仪测定有机化合物的一般方法，适用于具有紫外-可见光、荧光和示差折光率检测器的高效液相色谱仪器。 JY/T 024-1996 高效液相色谱方法通则 JY/T024-1996 标准下载解压密码：www.bzxz.net

现代分析仪器分析方法通则
高效液相色谱方法通则
JY/024—1996
General rules for high performance liguid chromatography1997-01-23发布
1997-04-01实施
本标准的编写格式和方法符合GB/T1.1一1993标准化工作导则第1单死，标准的起草与表述规则第一部分：标准编写的基本规定》，GBT1.4-B标准化T作导则化学分析方法标准编写规定的要求。
本标难主要起草单位：国象教育委员会本标准主要起草人：马卿云陈培榕1
引用标准
方法原理
5试剂和材料
？样品
8分析步骤
5分析结果的表述
10安全注意事项
附录A部分名词图解及计算公式
高效液相色谱方法通则
General rules for higb performance iquid chromategraphy1范围
JY/T 0241996
本通则规定了用高效液相色谱仪测定有挑化合物的一般方法,适用于具有紧外一可见光、荧光和示差折光率检测器的高效液相色谱似器。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。在标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被惨订，使用本标准的各方应操讨、使用下列标准最新版本的可能性。
G日9008—1588中华人民共和国国家标准液相色谱祛代语柱液相色谱法和平面色谱。
JJG 7D5~-1990中华人民共和国国家计量检定规程实验室液相色谱仪，3定义
本通则等同采用G9008一1988中有关液相色谱法术谱部分的定义。4方法原理
高效滤相色谱足一种以液体作流动相和面体微粒作固定相.待测组分在柱内的两相之间进行高速分配和高效分离的柱薇体色谱方祛，样品潜渡中的各组分，因其物理化学性质的惯小差异，当其随流动相进入色谱柱后，便在柱的两相之间产生不间的相互作用力，从而导致柱上迁移速率的微小差异。随著流动相的连续推，过这种微小的差异被不断扩大，直至出现明显不同的迁移速率，使最终达到组分完全分离。分离后的组分在柱的出口处依试通过色谱检测器、检测其选脱浓度随时间变化的输出电借号，这种电借号经放大后，可由记录仪盘接记录为组分的色谱峰，或再经模拟数字转换器将色谱峰数据变换成计算机语言，为色谱工作站所求集和存储，然后按色谱分析的婴求对各组分的色谱蜂进行任选处理、在一定的色谱莱件下，组分最大浓度点的洗脱时间（柱保留时间）楚一定的，可作为色谱法组分定性的依据，面组分的洗脱浓魔即正比于色谐峰的蜡高或峰面积，这最色谚法定量分析的依据。
5试剂和村料
5. 1色谱柱(固定相）
待测组分与相邻组分之间的色谱分离度(尺)应不小干1.0。国家教育委员会1997·01-22批准1997-04-01 实施
5.2流动柑(洗脱液）
JY/T024—1996
5.2.1有机落剂：高效液推色谱（HPLC)纯试剂，或在满足样品测定的条件下，川其它等级的试剂，使用前应通过0.5的滤膜过滤和脱除溶解的气体。5. 2. 2本：高效液柜色谱(HP1.C)纯水，或实验室自制并预先经过吸附法除去痕量有机杂质的脱离了高纯水，使用前应经过心.45um的滤膜过滤和脱除溶解的气体，5. 2. 3元机试剂：无机载、磁、盐为分析纯试剂;离-F对试剂灯 HPLC 纯专甲试剂，5.3标准样品
5.3.1标准物质经国家或部门许而生产的标准物质鼓标准窄液。5.3.2标准溶液：可以直接使用标准物质部门摄供的标准度的溶液，或接释成适距校正浓度的标准储备液，
6仪器
6.1仅器组成
仪器主要组成见图1。
输液系统
储液器
进样系统
色清林系统
析印给图机
围仪器组成应图
龄诞器
色谱工作站
（或记录设）
储液器：储存流动相的容器应谢流动相的化学窗蚀，方传脱除溶解于液体的气体，6.1.1
6.1.2输液系统：输液泵及其控制系统应包括流动相组成及流量梯度的程序控谢部分。接触液体的录体材料应耐化学腐蚀、系流量秘定无脉冲，且有足的精度和重复性。（.1.3进样系统：样品引人到色谱柱系统的装實，样品管应为可更换的定体积。色谱柱系统：包括保护（顾）柱免谱柱和柱恒温箱，并有足链的但温糖度。6.1. 43
6.1.5检测器：通用的有紫外-可见光、荧光及折射率检测器色谱工作站（或记录仅）：控制色诺仪的整机操作、采集和处理色谱数据的微型计算机6. 1. 6
系统，或为积分仪或简单的记录仪。6.1.7打绘图机：打印分析数据和绘制色谱图的打印机和绘图机。6.2仪器性能bzxz.net
仪器的主要性能及技术指标应衬合JJG（教委）024一1996高效液相色谱仪计量检定规程的技术要求。见表1。
7样品
样品应能溶解于适当的溶剂中，试料溶液应能保持待测组分的稳定性。8分析步骤
8.1升机
JY/T024-1996
按仪器操作规程开机。根据详品的测定方法或特性选宠色谱茶件，我使仪器系统退到评表主要性能及技术指标
基线剂
段小检满浓穿
线姓范围
泵疏量稳定性
定性重登性
定量重复性
8.2测定前推备
紫外-可见光检测器
≤±6X13-1AU
$15X: AL/h
≤5X1-g/ml
技术标
步光抢测器
$+5X10 *4U
折射率检测器
≤±5X10RIU
≤±5×10-AU/h
≤±5X10-°RIU/h
s-5×10 g/ml
RSD≤±20X10t！
RSDs.1. 6u × I?
RSDs 3X: 102
≤±5×1-\g/mi
8.2.1试料的制备：用流动相将试样稀释到适合色谱进样的浓度，试料落液应不含有任何小窃解的物质，必要时，可进行适当的过滤或超高速离心法除去其不溶物，8.2.2整机检查
仪器稳定后，检查仪器的基线噪声和基线漂移.以及色谱生的土要性优，即柱的理论板数（），两相邻谱睡的分离度（R）和色谱峰拖尾因了（工)即谱蜂的不对称性（见附录A），均应达到分析方法规定的要求。
8.2. 3溶剂空户
在样品测定的相圆色谱条件下，测定溶剂色诺峰溶剂蜂对待测组分的分离不应产生干扰，并应在样品的测定过程中将其别除。8.2.4进样
进样量应适宜检测器的线性范围，并能满足待测组分两相邻谱峰的分离疫及H性定醛重复性的要求。
8.3定性分析
在相同的色谱条件下，分别测定标准物质（或对照物)和样品中待测组分谱蜂的保留时间，若样品的全部组分已经确定且达到了完全的分离，组分的保留时间可作为定性的依据。8.4准量分析
对同--组分，在相同的色谱条件下和线性范围内，可用外标法内标法或叠加法进行定量渊定，
外标法，在相同的色谱条件下，分别测定和比较标准物质和样品持测组分的蜂值，计算8.4.1
试料中待测组分的食量。采用外标法，必须满足下列条件：a)用称量法（准确至0.01mg)配制外标溶液，其组分浓度应接近试料中待测组分的含量：b》进样量应相同，且在检测器的线性落内重复测定，8.4.2内标法：在L知量的样品中加入定量的标准物质谢定和比教试料中待测组分和内标物的峰值。用相对校正因子求出样品中待测组分的百分数，采用内标法定量，必须满足下列条385
0241996
a)内标物在样品的全处理过差中应能保持化学稳定性。其浓度应接近待测组分的含量。b)内标物和样品中的所有组分应能完全分离。进样量应在检测器的线性范圈内8. 4.3叠加法:在相同的色谱紊件下,测定试料中待测组分及其相邻组分的峰值，然后加入定量的待测组分于该试料中，再次测定上述两组分的峰值，外标法计算试料中待测组分的百分数。采用叠加法，必须满足下列条件，a)不道宜用外标法或内标法测定微量的组分。b)进样量应在检测器的线性范内重复测定。8. 5测定后的检查
样品测定后，应再次测定溶剂空自，以确证色谱柱在每次进样前均达到平衡。香则，应再次测定标准样品的峰值，其偏差应在分析误差的允许范围内。9分析结果的表述
9.1数据她理
利用色谱工作站或数据处理机处理色谱数据时，应根据其峰处理功能设定处理方法，对间一样品的测定，处理方法应相同。9.2定量值的表示方法
根据测定方法的要求，可以用百分数（质量，体积克分子数)或体积质量数表示。9.3计算公式
9.3.1外标法
式中X,—试料中待测组分的含量E试料中标准组分i的含量
A·试料中待测组分：的峰值
A—试料中标准组分；的蜂值
9.3.2内标法
式中又，—样品中待测组分：的百分数M.一一样品中内标物的加人质量A：一样品中待测组分的峰值
产.——样品中待测组分，与内标物的相对校正因子M—样品的量
A，·内标物的峰值
9.3.3叠加法
M,XAXA
X--M(AA,-AAT)
式中X；-试料中待测组分的百分数386
JY/T 024-1996
M一一试料中加入（或第二次加入）待谢组分的质耻A：试料中未加（或第次加入)待测组分的蜂值A'一试料中加入(或第二院加入)待测组分主的M, 质后,其相邻组分的峰值M试料的质量
A试样中加入（或第二次加入）待测组分的M，质量后，组分1的峰值A,—试样中未加（或第--次加入>待测纽分前，相邻组分1的蜂值9.4方法差
9.4.1重复性(定性或定量)
同一样品应连续测定8次，计算其相对标准偏差（RSD)。计算公式：
RAS--2(X,-X)/(-1)×+
×100%
式中X，一第：次测得的保留时间或峰值又次测得的保留时问或蜂值的算术平均值测量序列号
一测量欧数
9. 4. 2准碘度
准确度以回收率表示，回收率应在90一110(×10\)范图内。计算公式：
回收率一
式中W组分检出量
W——组分原含盟
W.—组分i加入量
11安全注意享项
10.1室内电源应良好接地，仪器应有单独接地线。10.2应在通风拒内使用有毒，易燃多爆的有机试剂。10.3度弃的流动相液体应经过专门处理后排放室外。10.4使用高压瓶应遵守（79)劳总钢字第18号气体安全监察规程》(4)
分离度resolution(R）
JY/T 024--1996
部分名询图解及计算公
两个相邻色谱峰的分离程度，以其两个组分保留值之差对其平均蜂宽的比值表示（现图A1），计算公式为
分离度
对中-
1x—·-组分2的识留值
组分1的保留值
~组分1 的峰宽
a, —-· 组分 2 的峰宽值
理论板数
nlatn(a)
aumber of theorcrical
谱柱在色谱分离过程中,其分离效能土要山色谱动力学因素决定，可用柱理论板数(n)表示其分离效能的物理量，计算公式为
n=5. 54( *m )s=16(
中—厘论被数
x*—蜂保留值
半高峰宽
w-峰宽
A3拖尾因于tailing fartor(f\)描述色谱峰不对弥程度的参数，常用峰高5%处的蜂宽与峰极大点到前仲沿之闻二倍距离之比表示（见图A3）。计算公式为
蜂拖尾因子
-峰高5%处的峰宽
d-峰极大点到前伸沿之间的此离388
图A：
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。