本通则规定了圆二色谱法对仪器的要求、分析步骤及方法。本通则适用于对紫外、可见有吸收的手性分子的圆二色谱的测定和分析。 JY/T 026-1996 圆二色谱方法通则 JY/T026-1996 标准下载解压密码：www.bzxz.net

现代分析仪器分析方法通
圆二色谱方法通则
JY/T026-1996
General rules for circular dichroism spectrometer199701-23发布
1997-04-01实施
本标准的编驾格式和方法符合GB/T1.1一1993标准化工作导则第1单元：标准的点草与表述规则第 1 部分:标准编写的基本规定3,GB,T1.4. -1988&标准化工作导则化学
分析方法标准编写规定的要求
本标准主要起草单位：国家教育委员会本标准土要起草人：高松
引用标准
方法原理
试剂和材料
分析步骤
测定结果的分析
圆二色谱方法通
General rules for circular dlcbroism specirometer1范围
本通则规定了圆二色谱法对仪器的要求,分析步骤及方法。JY/T026---1996
本通则适用于对紫外，可现有吸收的手性分子的圆二色避的测定和分折。2引用标准
GB/T1.1-~[993标准化工作导则第1单元：标准的起草与表遂规州第1部分标准编写的基本规定
GB/T1.—一1988标准化工作导测化学分析方法编写规定3定义
3, 1 波长(nm)
(Wavelengrh)
光波在-个振动周期内位相传播的距离。单位nm。(ILincarly polarixed light)
3.2线偏振光
所有垂直于光传播方向的电矢盟均被约束在一个平面上振动的光。3. 3阅偏振光(Circular polarised light)两个平面偏振的，相差四分之一波长位相的，电矢盘相了垂直的光波重叠在一起时，电天量的加和滑光传播方间施进的光。3. 4光的折射与吸收
(Refractiunandabsorption of light)一束光通过物质府，其电场失量传播速度的减小称之为折射.可用折射率表示，其电场关量振幅的减小称之为吸收，可用摩尔吸光系数表示。3.5圆二色
(Circular dichroism)bzxz.net
当圆偏摄光通过手性物质时，不仅其组分（左和右谢偏振光）以不同的速度传播，而且对光有不同的吸收。在这种情况下，通过物质的光是椭尴偏振的，该物质被称为具有圆二色性（或C)、其定义为
：-物质对左圆偏振光的摩尔吸收系数Es-物质对右国偏握光的靡尔吸收系数圆二色还可用摩尔捕圆度[表示，的与的关系为[6]m - 3300△em -- 1000/C]
4一测得的摘避度(dew）
C—一试样浓度【mnl/1）
1 —液池长度(光醒长)(cm)
国家数育委员会1997-01-22批准1997-04-01 实施
3. 6 圆二色谱
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(Circular diehtoism spretrm)AeM或[]M随波长的变化称之为CD光谱，4方法原理
网二色谱（CD）方法是测量试样物质手性的分折方法：医二色（CD）信号只在光活性或手生分子中才存在，所谓光活性的分子，就是镜像不能完全重合的分子。这样的分子中无施转发映轴（无对称中心和对称面），分子具有光活性的条件等价于：个能级迁的对称性带求，该既迁在同一方向上具有电的和磁联迁偶极矩的组分，因此，只有当激发（电子态或振动态）同时与电荷的线性转移和旋转有关时CD才能在一个电的或振动的吸收带中观寒到。电荷的线性运动产生一个电偶极矩（），电荷的旋转产生一个垂直十旋转面的磁偶极矩（m）。设和m的夹角为8,旋光度定义为
R-μrncust
可从实验光谱中求得旋光强度
R --CJ(AE/nA
C为常数，对CD带求积分。
当一90°5<十90时，R为正信号，当90<180°时，R为负悔号。因此，m和的相对改向确定了CD的符号，从前可以在一-些情说下将其与绝对构型相关。娜巢菜一给定的光活性分于有正的CD信号，则其对映体必然会有同样强度的负CD宿号。引入一个波长依题的量，各向异性因子多—2Ae/≤=2(eL—)/(+μ)
或g-4R/D
8\是一个完全吸收带的数催表征,R和D分别为旋光和佩极强度。R可以从CD谱,D可从吸收谱中测定。因此，
g'-- 4jμmens8/mpem/μ
该各向导性四子是磁偶极与电偶极嵌迁之比的度量。对于电子嵌迁的CD，g\在10到101间，雨对于振动的CD，则在10\\到10*4间。CD）不但可以用来确定手性分子的绝对构型，而且巴广泛地用于生物离分子（蛋白，核酸、糖等)的构像研究。
5试剂和材料
6仪器
6.1仪器组成通带使用的圆二色光谱仪主要由光源部分，单色抓光的产生、试祥部分和测光部分构成。如下图示
[光源部分单色圆偏振光产生部分试样部分——检测和记录6.2仪器性能
按中华人民共和国国家教育委员会圈二色仪计量检定规程JJG（教委）026一1996进行检定校推质·仪器应有以下性能。406
7样品
7.1液体样品
「基线平直度
波长准确度
滑确度
3 ;谢二色 CD 值
重斑性
灵敏度显示
FY/T026-1996
180~700nm范期内 多±6m
180nm~300mm300mm~500mmF00mm~700mm≤=0. 3nm ≤±0. 5nm ≤±1. 0nm在 290mm 处摘厘度 192. 4m
重复扫描相瓦偷差小于1m
炎敏度换档射,CD 峰慎相差小于 2m样品必领透明，如有悉择或沉淀，则带过惑或离心以除上沉诚。在测定的光谱范谢内，吸光度值不应超过2.0。最代信噪比的哦光度使为0.86。需据此来选择合适的样品液，光程长和研究范围内溶剂的遗明度。
7.2固体样品
单晶样品，翁足够大且需合适的样品架，薄膜样品，可以是透明的无机固体薄膜，也可以是有机高分子薄膜；由液体样品快速冷却形成明的玻璃态样品，所有阎体样品的暖光度值也不大于2.0,
8分析步璧
8.1开机.预热30min后逆行测定：8.2检测前的准备
按JJG（敏>626-199进行格查和校准，8.3工作兼件的选择在机上或手动选择以下条件(1)设定波长范围和波长扩展
(2)选择灵敏度
(3)选择时问谢数
(4)选择扫描速度
(5)狭缝
(6)零位选择
8.4带规测定
高灵敏度时.按8.5方法进行测定。（1)试样装入样品池并救进样品架【2)按8.3选择测定录件。
（3)调好笔和纸位置。
(4)在选择的波长范围内进行扫描（手动或自动）。（5）取出样品，换上空白试摔，重复（4），空白的测定条件源与样品完全一样。8.5高灵敏度测量
（1)进行高灵嫩度测量时，需选较大的时问常数，较慢的扫描速度,因此测量时间长。407
JY/T026—1996
(2)仪器的预热时间频足够长，确认并调卡基线在允许范留，以确保稳效的零点。(3)测量过程同8.4。
8.6测定后仪器的检食
测定完成后，取出样品池。韧断电源，关闭冷却水和熟气。87数据的整理
下事项记人测定结果中：
（1)使用仪器的名称和型号。
(2)测定波长范围、狭缝港，
(3)测定灵敏度、时间带数、扫描速度、扫描次数，（4)测定的磁场强度(对MCI)。
(5)试样液的成分和溶剂，
（6)液池的长凌。
(7)案内的溢变、湿度，
(8)其它需要事项。
9测定结果的分析（定性与半定量分析方法）9.1确认分子是否有手性及手性大小可以以有无CD信号及其强弱（R或值的大小），来判断所测试样展否有手性及手性大小。
9.2手性分子的构型研究
对于手性样品，用圆二色著分析以得到其对映体的纯度的信息。比如氨基酸、手性药物9.3生物高分子的构像分析
尽臂CD很少给出绝对的结构信息，它总还甚需要与其它方法相比较，如X射线衍射NMR谱等，但是对于生物高分子（蛋白、核酸、糖等）构像的变化特别灵敏。如果一个CD谱以任何方式改变，一定存构像上的变化。因此，即使结构完全不知道.CD图真的难以解释，但1）分析对于任何作用引起的构像变化，仍是荧敏的树定。而具，可通过寻找CD光谐的特征变化做到半定量，例如，可从对190nm～240nm间CD谱的解析来求蛋白的二级结构。此外，(I）滴定可用来计量地测定与大分子不对称结合的金属离子、辅酶或抑制剂的摩尔数。相似地，CIPH滴定可被用来测定色闭的表观结合常数。用CD方法还可对核酸和糖的构像避行分析。408
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