ICS65.020 CCSB46 四川 DB51 省地方标准 DB51/T3012—2023 饲料添加剂中甘露寡糖的测定 Determination of mannanoligosaccharides in feeds additive 地方标准信息服务平台 2023-02-07发布 四川省市场监督管理局发布 2023-04-08实施 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意，本文件的某些内容可能涉及专利，发布机构不承担识别专利的责任。本标准由四川省农业农村厅提出、归口并解释。起草单位包括四川省饲料工作总站、四川省中安检测有限公司、四川省农产品质量安全中心、广安市饲料管理工作站。主要起草人：程传民、李云、林涛、张静、魏晓星、蒋福霖、黄建轶、吴亚姗、程大顺、王宇萍、冯波、宋彦琪、沙麟、蒲秋菊、赵立军、樊淑娜、邝婷婷、徐定慧、陈飞、何利梅、夏子晴。本次为首次发布。 1 范围 本文件描述了饲料添加剂中甘露寡糖的高效液相色谱测定方法，适用于饲料添加剂中甘露寡糖（以甘露糖计）的测定。检出限为1 g/kg，定量限为2 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件通过文中规范性引用构成本标准必不可少的条款：GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法，GB/T 20195 动物饲料试样的制备。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中的甘露寡糖在酸性高温高压条件下水解为甘露糖，用高效液相色谱仪测定，外标法定量。 5 试剂或材料 5.1 水：GB/T 6682，一级。 5.2 盐酸。 5.3 氢氧化钠溶液（5 mol/L）：称取氢氧化钠20 g，加水溶解，稀释至100 mL。 5.4 标准储备溶液（2 mg/mL）：称取甘露糖200 mg，用水溶解并定容至100 mL，混匀后2～8℃保存，有效期1个月。 5.5 标准系列溶液：从储备溶液稀释配制成10、50、200、500、1000 μg/mL，临用现配。 5.6 微孔滤膜：0.45 μm，水系。 6 仪器设备 6.1 高效液相色谱仪：配差折光检测器。 6.2 分析天平：精度0.1 mg。 6.3 涡旋混合器。 6.4 分析筛：0.425 mm。 6.5 恒温水浴锅。 6.6 高压灭菌器。 7 样品 按照GB/T 20195制备试样，取样品至少200 g，粉碎通过0.425 mm分析筛，充分混匀，装入密闭容器备用。 8 测定步骤 8.1 试样溶液制备 平行做两份试验。称取试样1 g于10 mL具塞离心管中，加入6.0 mL盐酸，30℃水浴水解45 min，期间涡旋振荡2次。转入100 mL带刻度试剂瓶，用60 mL水洗涤离心管三次并加入试剂瓶，盖上瓶盖。高压灭菌器121℃水解60 min，冷却至室温，用氢氧化钠调节pH至6～7，转入100 mL容量瓶，加水定容，混匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤备用。 8.2 液相色谱参考条件 色谱柱：糖分析柱，基质为磺化聚苯乙烯二乙烯苯，柱长300 mm，内径6.5 mm，或性能相当者。柱温：60℃。流动相：水。流速：0.5 mL/min。进样量：20 μL。 8.3 测定 8.3.1 标准系列溶液和试样溶液测定，甘露糖标准溶液色谱图参见附录A。 8.3.2 定性：以保留时间判定，试样中甘露糖保留时间应与标准系列相符，相对偏差±2.5%以内。 8.3.3 定量：以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，进行定量分析。