本标准规定了临床抗菌药物敏感试验标准(纸片法)，包括该方法原理和适用性、敏感度定义、常规检测药物的选择、试剂、操作步骤、结果解释、质量控制方法，一些细菌的药敏实验的补充说明。本标准适用于各医疗、教学、科研单位及各级有关管理部门。 WS/T 125-1999 纸片法抗菌药物敏感试验标准 WS/T125-1999 标准下载解压密码：www.bzxz.net

备案号：932-2000
中华人民共和国卫生行业标准
WS/T 125--1999
纸片法抗菌药物敏感试验标准
Standard of antibiotics
susceptibility test (Kirby---Bauer method)1999-12-09发布
中华人民共和国卫生部发布
2000-05-01实施
WS/T125—1999
对临床标本分离出细菌时，一般经过鉴定后还需做抗菌药物敏感试验，常用方法为纸片法。该方法结果准确、可靠，并对临床有一定参考价值。本标准是在卫生部颁发的“全国临床检验操作规程”（第二版)的基础上，参考国际常用标准，结合中国国情及卫生系统的实际情况和要求，特制定本标准。本标准从2000年5月1日起实施。本标准由中华人民共和国卫生部医政司提出。本标准起草单位：北京医科大学人民医院检验科、卫生部临床检验中心。本标准主要起草人：张正、高屹、叶应妩。本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。1范围
中华人民共和国卫生行业标准
纸片法抗菌药物敏感试验标准
Standard of antibiotics
susceptibility test (Kirby-Bauer method)WS/T125-1999
本标准规定了临床抗菌药物敏感试验标准（纸片法），包括该方法原理和适用性、敏感度定义、常规检测药物的选择、试剂、操作步骤、结果解释、质量控制方法，一些细菌的药敏实验的补充说明。本标准适用于各医疗、教学、科研单位及各级有关管理部门。2定义
本标准采用下列定义。
2.1敏感susceptible
表示由被测菌株所引起的感染可以用常用剂量该抗菌药物治愈。禁忌症除外。2.2中介intermediate
指最小抑菌浓度（MIC)接近药物的血液浓度或组织浓度，疗效低于敏感菌。还表示被测菌株可以通过提高剂量（如β-内酰胺类药物）被抑制，或在药物生理性浓集的部位（如尿液）被抑制。另外，中介还作为“缓冲域”，以防止由微小的技术因素失控，导致较大的错误结果。2.3耐药resistant
被测细菌不能被常用剂量抗菌药物抑制，或属于具有特定耐药机理（如β-内酰胺酶），临床治疗效果不佳。
3适用性
纸片法药敏试验由快速生长的致病菌标定，适合肠杆菌科、葡萄球菌、肠球菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌。经适当改动可用来测定嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌。对于使用培养基不同、孵育环境不同或生长率不同的菌类，不能用纸片法做药敏试验4常规测定药物选择指南和报告原则所有抗菌药物均采用公认的名称以避免混淆。4.1选择指南
为使常规药敏试验合理，应限制测定药物的数量。表1和表2按特定菌或菌群分A，B，C,U.0组，将各种抗生素按优先次序排列，供常规实验室选择。表中每格中的一组相似抗生素，疗效相似，不必重复选择。选择的药物应与医院常用药吻合。4.2常规报告原则
表1和表2中，A组的药物是常规首选药物，对每一特定的菌类应做出相应的报告。B组包括了临床上重要的药物，特别是对医院感染，可作为首选药。报告的条件是：只有当A组中中华人民共和国卫生部1999-12-09批准2000-05-01实施
同类药物不敏感时才报告。
WS/T125—1999
C组包括替代或后备药物，适用情况包括：治疗某些地方性或流行性疾病，或对首选药（特别是同类药，如β内酰胺类或氨基糖武类药物）多重耐药的菌株；治疗对首选药过敏的病人；治疗不常见的菌种(如氯霉素治疗沙门菌，或某些假单胞菌)等。U组包括仅限于泌尿系统使用的药物（如呋喃妥因和有机酸类），这些药不应测定除泌尿系统外其他部位感染的细菌。
O组包括治疗有效，但一般不作为常规测定的药物。表1对非苛养菌的抗微生物药分组主要测试抗
微生物药
（首选药）
（首选药）
（补充）
肠杆菌科
氨芋西林
头孢唑啉
头孢噻盼
庆大素
阿米卡星
阿莫西林/克拉维酸或
氮芋西林/舒巴坦
哌拉西林/三唑巴坦
替卡西林/克拉维酸
头孢孟多或
头孢呋辛
头孢美唑
头孢哌酮
头孢西丁
头孢噻或
头孢唑或
头孢曲松
环丙沙星或
左氧氟沙星
亚胺培南
哌拉西林
替卡西林
甲氧苄啶/磺胺甲恶唑
氮曲南
头孢他啶
卡那素
奈替米星
四环素
妥布霉素
铜绿假单胞菌和
不动杆菌属
头孢他啶
庆大霉素
替卡西林
哌拉西林
阿米卡星
头孢眼酮
环丙沙星
亚胺培南
妥布霉素
头孢唑或
头孢曲松
氨霉素
奈替米星
甲氧芋啶/磺胺甲恶唑
葡萄球菌属
苯唑西林
青霉紫
阿奇素或
克拉霉素或
红霉紫
克林霉素
甲氧苄啶/磺胺甲恶唑
万古霉素
氯霉素
环丙沙星或
左氧氟沙星或
氧氟沙星
庆大霉素
利福平
四环素
肠球菌展
青霉素或
氨芋西林
万古霉素
庆大霍素（只用于筛
选高水平耐药菌）
链霉素（只用于筛选
高水平耐药菌）
主要测试抗
微生物药
(尿）
肠杆菌科
羧苄西林
洛美沙星或
诺氟沙星或
氧氟沙星
呋腩妥因
磺胺异恶唑
甲氧芋啶
WS/T125-1999
表1(完）
铜绿假单胞菌和
不动杆菌属
羧茅西林
头孢唑
左氧氟沙星或
洛美沙星或
诺氟沙星或
氧氟沙星
磺胺异恶唑
四环素
葡萄球菌属
洛美沙星或
诺氟沙星
呋辅妥因
磺胺异恶唑
甲氧羊啶
肠球菌属
环丙沙星
左氧氟沙星
诺氟沙星
呋哺妥因
四环素
1）A为首选药，B为首选药有选择地报告.C为备用药有选择地报告，U为仅适用于尿标本的抗微生物药。横线间药有共同交叉耐药或交叉敏感，一般药敏试验选一种即可表2对苛养菌的抗微生物药分组
主要测试抗
微生物药
嗜血杆菌属
氨苯西林
甲氧芋啶/磺胺甲恶唑
头孢噻或
头孢他啶或
头孢唑或
头孢曲松
头孢呋辛钠（针剂）
阿奇霉素或
克拉霉素
氮曲南
头孢克洛或
头孢克
头孢呋辛酯（口服）
环丙沙星或
左氧氟沙星或
洛美沙星或
氧氟沙星
亚胺培南
利福平
四环素
1)A，B、C各组意义同表1。
淋病奈瑟氏菌
头抱克或
头孢噻或
头孢唑或
头孢曲松
头孢美唑
头孢西丁
头孢呋辛
环丙沙星或
氧氮沙星
青霉素
大观霉素
四环素
肺炎链球菌
红霉素
青霉素
甲氧芒啶/磺胺甲恶唑
左氧氟沙星或
氧氟沙星
四环素
万古舞素
氨霖素
利福平
其他链球菌
（除肺炎链球菌）
红霖素
青霉素或
氮芋西林
氧霉素
克林素
万古弹素
头孢噻或
头孢曲松
氧氟沙星
5试剂
5.1Mueller-Hinton琼脂
5.1.1制备Mueller-Hinton琼脂
WS/T125-1999
按产品说明用干粉培养基制备。高压灭菌后立即放40～50℃水浴。平Ⅲ置水平台上，倾倒平板，琼脂厚度为4mm。内径14cm的平Ⅲ需培养基约60~70mL，内径9cm平血约需25~30mL。玻璃或塑料平血均可使用，但血底应平坦。待平板冷至室温，留下当日使用的，其他放入冰箱（2～8℃）保存。平板须在7日内用完。每批制备的平板，应抽样放30～35℃24h以上，检查是否无菌.抽样的平板不可再用。5.1.2pH
每批Mueller-Hinton琼脂，制备时应检查pH。将pH电极浸入融化的琼脂培养基中。或将琼脂放烧杯中融化，然后使其凝固在pH电极上。或使用平面电极。培养基的pH室温下应为7.2～7.4。测pH应在琼脂凝固后进行。
5.1.3水分
使用时，琼脂表面应潮湿，但不应有水珠。培养时，平血盖上也不应有水珠。5.2药敏纸片的保存
药敏纸片应保存在干燥环境。在8℃以下冷藏，或一14℃以下冷冻保存。β-内酰胺类药的纸片应密封冷冻保存，仅取出少量作为日常使用，在冰箱里保存约一周。有些不稳定的抗生素（如依米配能、头孢克拉、棒酸合剂)须冷冻保存，用时取出。纸片在使用前1～2h从冰箱取出，暖至室温再打开，以避免出现冷凝水。纸片启封后应放入可密封的有干燥剂的容器中。纸片只能在有效期内使用，过期应弃去。5.3标准比浊管
用硫酸钡比浊管（0.5麦氏单位标准比浊管），标定接种菌液浓度。比浊管制备方法：取0.048mol/L氯化锁（BaClz）(1.175%（W/V）BaClz2H,OJ0.5mL，加到99.5mL的0.18mol/L硫酸（1%，V/V）溶液中，制成比浊管。用光径为1cm的分光光度计测定吸光度来标定比浊管。0.5麦氏单位标准比浊管在625nm波长的吸光度应为0.08~0.1。选管径与制备菌液试管相同的螺口试管，每管分装4～6mL。将试管帽拧紧，放室温暗处保存。比浊管用前在旋转振荡器上混匀。如出现大颗粒，应更换。每个月更换比浊管或复验比浊管的浊度。6操作步骤
6.1制备接种菌液
6.1.1增菌法
选琼脂平板上形态相同的菌落至少45个，用接种环挑其顶部，移至4～5mL肉汤或大豆酪蛋白消化液中。放置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度（一般需2～6h），浓度约1～2×10°cfu/mL。用生理盐水或肉汤校正菌液浓度至与麦氏单位标准比浊管相同。可用光电比浊。6.1.2直接菌悬液法
可直接用过夜培养的菌落（必须用无选择性培养基，如血平板）在盐水或肉汤中制备接种菌液。菌液浓度调至0.5麦氏单位标准比浊管。此法亦适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病瑟菌及葡萄球菌的甲氧西林或苯唑西林的药敏试验。6.2接种平板
校正的菌液须在15min内使用。用一无菌棉拭子蘸取菌液，并在上端管壁旋转挤压几次，去掉过多的菌液。用拭子涂布整个琼脂平板表面。Mueller-Hinton琼脂平板用前应烘干。反复涂布几次，每次将平Ⅲ旋转60度，保证涂布均匀。6.3贴纸片
接种平板后，贴上药敏纸片。用镊子或针尖压一下纸片使其与培养基表面贴牢。纸片要贴得均匀，4
WS/T125—1999
纸片与纸片中心距离不得小于24mm。原则上，直径150mm的平板贴12张纸片，直径100mm平板贴6张纸片。贴上纸片15min内，须把平板倒放在35℃孵箱中。6.4测量抑菌环
经16～18h培养后，观察结果。菌液浓度合适且涂得好，抑菌环规则，细菌呈融合生长。手持平Ⅲ从背面国测检查每块平板，借反射光（需色无反光背景），用卡尺，普通尺或特制的模板量取抑菌环直径，测量抑菌环直径须包含纸片直径，单位为毫米。培养基中如果加了血液，须打开平血盖，借反射光，从正面量抑菌环。萄葡球菌和肠球菌，须培养24h后，经透射光检查苯唑西林和万古霉素的抑菌环内有无耐药菌株的生长。抑菌环内有任何牛长都判断为耐药。肉眼见不到细菌明显生长的区域为抑菌环边缘，有很难辨认的细小菌落者不算。如抑菌环内有大菌落长出，须再移种出来，重新鉴定，重新做敏感试验。变形菌在某些抗菌药物纸片周围可弥漫生长到抑菌的区域内，但抑菌环边缘清楚，弥漫生长不算。甲氧芋胺嘧啶和磺胺药的抗剂会支持细菌生长，因而测这类药时可忽路轻微生长（80%以上受抑制），以浓密生长的区域作为抑菌环的界限。7结果解释
参照表3～表10的标准对抑菌环的大小作出解释，以敏感、中介或耐药的形式报告结果。表3肠杆菌科用的抑菌圈直径解释标准和相对应的最小抑菌浓度（MIC)折点试验/报告
青霉素类
抗生素
氮西林
哌拉西林
替卡西林
羧芋西林
β内酰胺/3-内酰胺抑制剂复合物B
阿莫西林/克拉维酸或
氨芋西林/舒巴坦
暖拉西林/他唑巴坦
替卡西林/克拉维酸
100/10
抑菌圈直径，mm
头孢类（包括头孢菌素类、头霉类、卡巴头孢类、苯唑头孢类）S
相对应MIC
折点，pg/mL
≥128
≥128
≥16/8
>32/16
≥128/4
≥128/2
≤8/4
≤16/4
≤16/2
（1）该类包括氨卡西林和阿莫
（2）对于沙门氏菌属和志贺氏
菌属一，二代头孢，无论体外结果如何，均报耐药
（3）克雷伯菌和大肠埃希氏菌
以下药折点可提示ESBLs
林，氨氮曲南（≤27mm）、头孢他啶（≤22mm）。头孢噻（≤27
mm）、头孢曲松（≤22mm）两
药有参考价值。ESBLs抹不论
在体外药致中对头孢霉素和氨
曲南是否敏感，临床均报耐药
（4）用三代头孢治疗时.肠杆
茵、枸酸菌和沙雷菌可发展
耐药性，故临床需反复测试
试验/报告
抗生素
头孢噬啉
头孢壁盼
头孢孟多或
头孢呋辛酯(口服)或
头孢辛钠(针剂)
头孢美唑
头孢哌酮
头孢西丁
头孢唑
头孢唑
头孢曲松
头孢他啶
头孢克洛
头孢克
拉氧头孢
碳青霉烯类
亚胺培南
单酰按菌素类
胺曲南
氨基糖试类
四环素类
庆大群素
阿来卡星
卡那舞素
奈替米星
妥布舞素
链霉素
四环素
米诺环素
WS/T125—1999
表3(续）
抑菌圈直径，mm
15~17≥18
15~22≥23
15~17≥18
16~18≥19
15~22≥23
14~15≥16
16~21≥22
13~14≥15
≥>17
12~14≥15
15~18≥9
相对应MIC
折点，μg/mL
（5）头孢壁盼可用来预测下列
药的活性：头孢噻吩、头孢吡
啉、头孢拉啶。至于头孢唑啉、头孢呋辛应个个都测试，因为
有些分离株当对头孢噻盼耐药
时仍可以对这些药敏感
（6）CSF中分离菌应报告头孢
噻或头孢曲松的敏感性
见评论（3)
见评论（3）
（7）不能测试摩根菌属
见评论(3)
（8）因临床沙门菌属和志贺菌
属使用氮基糖试无效，故不做
此项工作
（9）四环索是四环素类的代表
试验/报告
喹诺酮类
抗生素
环丙沙星或
左氧氟沙星
洛美沙星或
诺舞沙星或
氧氮沙星
奈啶酸
氮罗沙垦
其他抗生素
甲氧苯啶/磺胺甲恶唑1.25/
氣薇素
呋嘴要因
磺胺药
甲氧芋啶
试验条件一
250或
WS/T125-—1999
表3（完）
抑菌哟直径，mm
16~20≥21
16~18≥19
1115≥16
13~17≥18
15~16≥17
13~16≥17
11~15≥16
相对应MIC
折点μg/mL
-≥32
≥8/152
≥128
（10）仅适用于尿液分离菌
（11）从尿道分离荫常规不报
（12）磺胺异恶唑纸片能代替
当前使用的磺胺制剂
-培养基：Mueller-Hinton琼脂：接种液：液体生长法或直接菌落悬液法，培育：35C，空气：16~推荐的质控用菌抹为大肠艾希菌ATCC25922(质控允许范围见表11)。2
3建议：对于沙门菌属和志贺菌属，常规试验和报告需包括一噬诺酮类和TMP/SMZ。对于胃肠外分离的沙门菌属，还一定要测试并报告氮舞素及某一三代头孢菌素结果。表中A，B.C,U意义见表1说明。“O\为临床非常规用药，可根据我国情况选用。铜绿假单胞菌和不动杆菌属用的抑菌环直径解释标准和相对应的最小抑菌浓度（MIC)折点表4
试验/报告
背霖素类
抗生素
替卡西林
瞬拉西林
羧茅西林
β-内酰胶/β-内酰殿凝抑制剂复合物0
紅芋西林/舒巴坦
拉西林/他唑巴坦
100/10
100/10
抑菌图直径，mm
12~14≥15
[18~20|≥21
相对应MIC
折点pg/mL
≥128
≥128
≥128
≥512
≥32/16
≥128/4
≥128/4
≤8/4
用于钥绿假单胞菌
用于不动杆荫屏
用于铜绿假单胞菌
用于不动杆菌属
用于铜绿假单胞菌
用于不动杆菌
（1)不动杆菌属耐药可报告对
其他加酶抑制剂抗生素耐药
≤64/4用于铜绿假单胞菌
≤16/4用于不动杆菌
试验/报告
抗生素
替卡西林/克拉维酸
头孢类（包括，头孢菌素类，头露菌素类）A
头孢他定
头孢哌酮
头孢嚏或
头孢曲松
头孢唑
拉氧头孢
碳青霉烯类
亚胺培南
单环B内酰胺类
氮曲南
氨基糖武类
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喹诺酮类
庆大素
阿米卡星
妥布素
奈替米星
四环素
米诺霉素
环丙沙垦
左氧氟沙星或
洛美沙星或
诺氟沙星或
氧氨沙
其他抗生素
氧霉素
甲氧芳啶/磺胺甲恶唑1.25/
250或
磺胺药
WS/T125-1999
表4（完）
抑菌阳直径，mm
15~19/≥20
15~19≥20
15~22≥23
14~15≥16
16~21/≥22
15~16≥17
15~18≥19
15~18≥19
16~20≥21
14~16≥17
13~17≥18
13~1617
相对应MIC
折点，μg/mL
≥128/2
≥128/2
≥8/152
≤64/2用于钢绿假单胞菌
≤16/2用于不动杆菌
≤2/38
（2）四环素系四环素类的代表
（3）从尿道分离菌常规不报告
（4）磺胺异恶唑纸片能代替当
前使用的磺胺制剂
-培养基：Mueller-Hinton琼脂+接种液：液体生长法或直接菌落悬液法，培育：35℃，空气，16～18h。试验条件
推荐的质控用菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853（质控允许范围见表11)。（1）除铜绿假单胞菌和不动杆菌属外非肠杆菌科应该用稀释法试验：（2）在长期用各种抗生素治疗过建议
程中铜绿假单胞菌可能发生耐药，故在治疗中或重复分离菌株时应重新测试。试验/报告
青郁素类
WS/T125-1999
表5葡萄球菌属的抑菌圈直径解释标准和相对应的最小抑菌浓度（MIC）折点纸片
抗微生物药
青得素
甲氧西林或
苯唑西林
10单位
抑菌四直径，mm
11~12≥13
相对应MIC
折点，μg/mL
（1）a.臂舞素敏感的萄球菌
对其他青每素，β内酰胺酶抑
制剂复合物，头孢类和碳青烯
类也敏感。b.青素耐药，苯
唑西林敏感的菌株对β-内酰胺
不稳定的青素耐药，但对
其他β-内酰胺酶稳定的青霉
紫，β-内酰胺酶抑制剂复合药，相关的头孢类和碳青藓烯类敏
感。c.耐苯唑西林的葡葬球菌
对前所有的β-内酰胺酶类抗
生素耐药。因此，对很多其他的3-内酰胺抗生素敏感或耐药结
果可以通过只检测青霖素和苯
唑西林而得到
β内酰胺≤0.1
（2）金黄色葡葡球菌中青鹤素
耐药，苯唑西林敏感的蘭抹产
3-内酰胺酶，最好用10单位的
青霉素纸片代替氨苯西林纸
片。青舞素应该用来检测所有
对β内酰胺酶不稳定的背霉素
的敏感性，如氨苯西林，阿莫西林，阿洛西林，羧卡西林，美洛西林，哌拉西林和替卡西林.同
样的，β-内酰胺酶试验阳性表
明对这些药耐药
（3）在抗葡药球菌的药物中，
酰β-内酰胺酶的青霉素类，苯
唑西林，甲氧西林的检测结果
适用于其他耐青群素酶的青霉
素类。苯唑西林不易降解，因此它更易于检测出葡葡球菌异源
性耐药株
（4）用透光检在苯唑西林纸片
抑菌内轻微生长的菌落（将
平血举起对着光线）
（5）绝大多数的MRS通带对
多种抗生素耐药，包括β-内酰
胺类，氨基糖类，大环内酯
类，克林霖素和四环素，观察到多重耐药性应该是对甲氧西林
可能耐药的线索。这可以通过
用含苯唑西林-盐的琼脂筛选
试验进行证实
（6）凝固酶阴性术萄球菌中对
苯唑西林/甲氧西林耐药用含
苯唑西林-盐琼脂筛选试验能
最可靠地检出
试验/报告
抗微生物药
氨苯西林
3内酰胺/3-内酰胺酶抑制剂复合药o
头孢类
阿莫西林/克拉维酸
氨芋西林/舒巴坦
哌拉西林/他唑巴坦
替卡西林/克拉维酸
头孢克洛
头孢孟多
头孢唑啉
头孢美唑
头孢哌酮
头孢碘舫
头孢西丁
头孢他啶
头孢唑聘
头孢曲松
20/10g
10/10μg
WS/T125-1999
表5（续）
抑菌图直径mm
75/10g
75 μg
30 μg
头孢峡辛酯（口服）
头孢呋辛钠（不经肠30μg
头孢噬噻吩
拉氢头孢
碳青雄婚类
亚胺培南
万古帮素
氨基糖试类
庆大群素
阿米卡星
卡那醇素
奈替米璧
妥布旅素
30 μg
10 μg
30 μg
10 μg
10 μg
4≥15
15~17≥18
13~15≥16
14~20≥21
15~17≥18
15~22≥23
14~15/≥16
15~16≥17
13~14≥15
相对应MIC
折点·μg/mL
β-内酰胺
≥8/4
≥32/16
≥16/4
≤4/2
≤8/4
（7）氨芋西林和阿莫西林的代
见评论(1)
见评论(1)
见评论(1)
（8）所有抑菌圈≤11mm的葡
药球菌分离应该进行MIC
方法的测试，临检中心核实
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