HJ/T 77-2001 多氯代二苯并二噁英和多氯代二苯并呋喃的测定 同位素稀释高分辨毛细管气相色谱/高分辨质谱法 HJ/T77-2001 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国环境保护行业标准HJ/T 772001
多氯代二苯并二英和多氯代二苯并呋喃的测定同位素稀释高分瓣毛细管气相色谱/高分辨质谱法
Determination of polychlorinated dibenzo- p-dioxins andpolychlorinated dibenzo-p-furans by isotope dilution HRGC/HRMS2001-10-19发布
2002-01-01实施
国家环境保护总局发布
HJ/T 77--2001
为贯彻《中华人民共和国环境保护法》《中华人民共和国大气污染防治法》《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》，配合《危险废物焚烧污染控制标准》和《生活垃圾焚烧污染控制标准》等有关国家环境标准的实施，保障人民群众身体健康，制定本标准。本标准应用同位素稀释、高分辨辩毛细管气相色谱(HRGC)/高分辨质谱(HRMS)联用技术测定液态、固态、气态和生物组织中的2、3、7、8-位氯取代及四至八氯代二苯并二嗯英及呋喃，本标准参考了当前国际上通用的美国EPA1613二英标准分析方法。本标准由国家环保总局科技标准司提出。本标推由中国科学院水生生物研究所负责起草。本标准由国家环境保护总局负责解释。802
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多氯代二苯并二英和多氯代二苯并喃的测定同位素稀释高分辨气相色谱/高分辨质谱法1主题内容与适用范围
1.1方法适用于用高分辨气相色谱/高分辨质谱（HRGC/HRMS)联用技术测定液态、固态、气态和生物样品中四至八氯代二苯并二嗯英（PCDDs）及二苯并呋喃（PCDFs）；本方法参考了美国EPA1613方法。
1.2本方法适用于表1中所列的17种2,3,78-位氯取代二苯并二嗯英及呋南的检测，对每个异构体的最低检测限（MI.）见表2。
2引用标准
当下列标准和规范在本标准中引用时，与本标准同效。GB16157一1996固定污染源排气中颗粒物测定和气态污染物采样方法HJ/T47--1999烟气采样器技术条件HJ/T48—1999烟尘采样器技术条件当上述标准和规范被修订时，应使用其最新版本。3分析过程中的干扰和干扰消除
3.1应使用高纯溶剂（一般以进口农残级试剂)以满足超痕量分析的要求，必要时溶剂应在全玻璃系统中重蒸。此外，柱填料也可通过提取或溶剂洗脱来纯化。3.2玻璃器血应正确清洗，防止通过玻璃表面吸附，造成目标化合物损失或污染样品。3.2.1玻璃器血在使用后应立即使用洗涤剂清洗，然后再用溶剂淋洗。洗涤时，在玻璃器血中放入洗涤剂并超声清洗30s。玻璃器Ⅲ上可拆卸的部分，特别是分液漏斗上的聚四氟活塞，在用洗涤剂清洗之前应将其拆开单独清洗。
3.2.2在用洗涤剂清洗之后，玻璃器血应立即用甲醇淋洗，再用水洗净，然后依次用甲醇、丙翻和二氟甲烷淋洗。
3.2.3切勿将用常规清洗方法清洗的玻璃器血放人烘箱中烘烤。按上述方法将玻璃器血皿彻底清洗干净后，方可放人烘箱中烘烤。切忌对玻璃器血进行反复烘烤，以防止在玻璃表面形成活性部位，导致对二嗯英的不可逆吸附。
3.2.4索氏抽提装置在使用前应先用甲苯预抽提3h。分液漏斗常用二氯甲烷/甲苯（体积比4：1)振荡2min、沥干，再用纯二氯甲烷振荡2min。3.3分析中使用的所有实验用品必须确保不含有任何干扰物，每分析20个样品后对参考物和空白对照考查一次。
3.4多次使用过的玻璃器皿应根据所处理样品的特殊性对其编号，以便跟踪实验室内造成个别样品污染的来源，有助于判断曾用于处理过高浓度样品的一些玻璃器血是否需要进一步清洗。803
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4安全问题
4.1本方法中所用的溶剂和试剂都具有一定的毒性，对健康具有潜在的危害，因此，应尽量减少与这些化学品的直接接触。
4.1.1动物暴露实验已发现2,3,7,8-TCDD具有很强的致畸、致癌和致突变性。它在水中的溶解度约为200ng/kg，在有机溶剂中可溶解0.14%。从2,3,7,8-TCDD的毒理学数据和物理性质来看，操作二英化合物的人员一定要经过安全知识培训。4.1.2本方法极力推荐购买稀释过的标准溶液。制备储备液，应该在通风橱中进行，并且应戴上防毒面罩。
4.2实验室应备有专门用于化学品安全操作的防毒面具；同时操作人员应具有个人安全数据表。4.3含二嗯英样品的处理与放射性物质或传染性物质同样重要。实验室必须具备良好的通风条件，同时应严格控制出人实验室的人员。4.3.1防护设备：实验室应备有塑料手套、实验服、安全眼镜或口罩以及通风橱。在可能产生烟雾或尘埃的分析操作中，操作人员应戴上装有活性炭的呼吸器。在操作暴露样品或标样时应当佩戴眼镜等保护设备。在处理高浓度二嗯英样品时，应当在乳胶手套内再加一双耐溶剂手套。4.3.2个人卫生：在每次实验后，应彻底将手和前臂洗净。4.3.3防护措施，隔离工作区应贴上标记；玻璃器血应与工具隔离，并在通风橱的顶端安放塑料吸附纸以便监测污染状况。
4.3.4废气的排放：气相色谱仪分流出的废气和质谱仪泵中抽出的废气应该用装有活性炭的柱子吸附，也可通人油脂或高沸点的醇中吸收处理。4.3.5废物的处理：首先应尽量减少废弃的污染物。其次，废物缸中必须放人衬垫的塑料袋；勤杂工和其他工作人员必须经过废物处理安全操作的培训。4.3.6污染去除
4.3.6.1个人的污染：用大量肥皂水或洗涤剂进行清洗。4.3.6.2玻璃器血、工具和表面：分别用溶剂、洗涤剂和超纯水清洗。4.3.7实验服污染：集中收集到塑料袋中作废物处理。4.3.8表面污染检查：用-片滤纸在工具和工作台的表面擦拭，然后经抽提后浓缩进行GC-ECD分析。如果在擦拭检测中擦拭片增重超过10g，就必须对设备和工作台进行彻底清洗。5设备和材料
5.1制备样品的装置
5.1.1通风橱。
5.1.2组织勾浆器；勾浆器应带有不锈钢转轴和快速切削的刀片。5.1.3肉类粉碎机：内部的盘片上应有直径为3～5mm的筛孔。5.1.4含水量测定装置。
5.1.5天平
称量精度：至少能精确称到0.1mg。最小量程：至少能称量到10mg。5.1.6250、500和2000mL带有聚四氟活塞并关的玻璃分液漏斗。5.1.7带90或140mm沙芯的过滤装置。5.1.8索氏抽提器抽提容量为200ml..外径为50mm。5.1.9机械振荡器和带聚四氟瓶盖的盐酸消化瓶（500~600ml）。5.1.10玻璃吸管。
5.1.11玻璃色谱柱
5.1.11.1150mm长×8mm内径玻璃色谱柱。5.1.11.2200mm长×15mm内径贮液器。5.1.11.3300mm长×25mm内径玻璃色谱柱。5.1.12旋转蒸发器，带有调温水浴加热器。5.1.12.1旋转蒸发器的真空源来自于蒸发器上的可调阀门和真空泵。HJ/T 77--2001
5.1.12.2最好装备个循环水泵和冷凝水装置，它能节约大量的水并保持恒定的水温和压力。5.1.13氮气吹干装置：安装在通风橱内并能将温度控制在0~~60℃范围内。5.2气相色谱仪
5.2.1须有无分流或柱上进样器，并能程序升温。5.2.2毛细管气相色谱柱：RTX-2330(60m长，0.25mmID,0.1μmdf)或DB-5ms(60m长,0.32±0.02mmID；0.25μmdf)或其他固定相相当的毛细管色谱柱。5.3质谱仪：应能在1s内分辨率达到10000时，至少重复选择检测到12个精确的质量数。5.4数据处理系统：收集、记录和存储质谱数据。6试剂和标准
6.1试剂
以下试剂均应达到农残级。
6.1.1硫酸：优级纯。此内容来自标准下载网
6.1.2盐酸：浓度220g/L。
6.1.3氯化钠：用纯水按5%（m/V）比例配制。6.1.4无水硫酸钠。
6.1.5高纯氮气。
6.1.6溶剂：丙酮、甲苯、正已烷、甲醇、二氯甲烷和壬烷，均在玻璃器血中重蒸，并用GC分析来确认对分析无干扰。
6.1.7石英砂（60/70目）：用索氏抽提器抽提后，在450℃至少烘烤4h。6.2提取
6.3吸附剂
6.3.1硅胶
6.3.1.1活化硅胶：100～200目，用二氯甲烷清洗，在180℃至少烘烤1h，在干燥器中冷却，然后储存在带有螺帽的玻璃瓶中。
6.3.1.2酸化硅胶（44%，质量分数）：将44.0g浓硫酸和56.0g活性硅胶放在一个干净的容器内混合，搅拌均匀，用带聚四氟螺帽的瓶子封装。6.3.1.3碱化硅胶：用30mL1mol/L氢氧化钠和100g活性硅胶在一个于净的容器内混合，搅拌均匀，用带聚四氟螺帽的瓶子封装。6.3.2氧化铝：酸性或碱性氧化铝都可用于样品纯化。6.3.2.1酸性氧化铝，在130C加热活化至少12h。6.3.2.2碱性氧化铝，保存在130C的密封的烧瓶中，必须在烘烤后的五天之内使用。6.3.3活性炭
6.3.3.1将9.0gCarhopakC和41.0gCelite545按18%（质量分数）比例混合，在130C下活化6h后，储存在干燥器中备用。
6.3.4弗罗里土柱
6.3.4.1弗罗里土：分析纯，60~~100月。805
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6.3.4.21%水（质量分数）的弗罗里土：用1.0mL的超纯水和99.0g的弗罗里土在一个干净的容器内混合，搅拌均匀，用带聚四氟螺帽的瓶子封装。6.4二嗯英标准溶液：购买的标推溶液或混合物应标明它们的纯度、浓度和认证机构，或者从已知纯度和组成的物质中制备（表3）。如果化学品的纯度为98%或更高，可以用重量来计算而无需重新计算标准的浓度。
6.5用王烷配制标准溶液
6.5.1校正标准（CS1-CS5）：制备出表4中所示的五种校正溶液（溶剂为王烷）；响应因子可以用这些溶液浓度来测定。
6.6保留时间确定标准：用来确定二曬英异构体的起始至结束保留时间，以及确证GC柱对异构体的分离效果。标准中至少应含有表5中所列的化合物。6.7标准参考物：该考察样品中应含有已知浓度二英并且与分析基质相近的、已被认可的参考物质。7样品采集、保存、储存和有效期7.1采集的样品应放人棕色玻璃瓶中。水样（至少20I.以上）收集后经固相萃取（SPE）后放人冰箱中保存，固体样品用大口径采样器采集。7.2水样在到达实验室前需保存在0~4C的黑暗处。如果样品的pH大于9,应用硫酸调至pH7～9。固体、半固体、油和混合相样品在到达实验室之前应在4C以下避光保存。样品到达实验室后，液体样品应储存在0～4C黑暗处。固体、半固体、油和生物组织样品均应储存在温度低于一10℃的暗处。7.3生物组织样品
7.3.1野外采集的生物组织用铝箔纸包裹，运输过程中应在低于4C的温度下保存。\。7.3.2到达实验室后，样品应该保存在一10C的暗处。7.4焚烧装置尾气和空气采样
7.4.1楚烧装置尾气采样
7.4.1.1采样内标
为了检验采样过程的有效性和采样效率，在采样操作之前添加采样内标。供选用的内标物质为13C或37Cl标记的二曬英（见表10）。7.4.1.2过滤和吸附材料
7.4.1.2.1滤简：玻璃纤维滤筒，要求对0.3um颗粒物的阻留效率大于99.95%（穿透率小于0.05%）。使用之前分别用丙酮和甲苯进行超声波洗涤30min，然后真空干燥。处理后的滤简保存在干净的玻璃容器中，从每批处理滤简中抽样进行二曬英空白检验。7.4.1.2.2吸附材料：使用市售XAD-2树脂或性能更好的吸附材料。使用之前，吸附材料用丙酮洗净后，再用甲苯进行索氏提取16h以上，然后用丙酮和甲苯（2次）超声清洗30min，最后在真空干燥器中50C以下加热8h，保存在密闭容器中。处理好的吸附材料要经过与采样分析同样的操作进行空白实验，以确保其不含有任何影响二嗯英分析的干扰成分。7.4.1.3采样装置
焚烧装置尾气二英采样装置（图4)包括采样管、滤簡托架、冲击瓶、树脂柱、冷凝水装置、微电脑烟尘平行采样仪等部分。本装置参考了国家环保总局HJ/T48--1999《烟尘采样器技术条件》及中华人民共和国国家标准GB/T16157--1996《固定污染源排气中额粒物测定与气态污染物采样方法》等。~7.4.1.3.1采样管：采样管材料为硼硅酸盐玻璃或石英玻璃，采样嘴的内径应不小于4mm，精度为0.1mm。采样管内表面应光滑流畅。7.4.1.3.2滤筒托架：滤筒托架用硼硅酸盐玻璃或石英玻璃制成，尺寸与滤筒相匹配，滤筒取放应方便。部件整体应密封良好。
7.4.1.3.3冲击瓶：四只0.5～1L的冲击瓶串联，第一只为空瓶，第二只盛放100~~300mL甘二醇，806
第三只为空瓶，第四只盛放2/3瓶容量的硅胶。HJ/T 77~2001
7.4.1.3.4树脂柱：内径30~50mm、长70~~200mm、容量100~150ml的玻璃管。可装填20~40g吸附材料。
7.4.1.3.5微电脑平行采样系统：该系统集测定烟气流速、自动选择采样点等多种功能于-一体。尾气采样过程中，在装有滤简时应能达到10～40L/min的流量，可连续运行7h以上，具有恒定流量调节功能。采样完成后，能自动计算等速采样烟气流量、含氧量、含水量等参数。7.4.1.4．采样步骤
7.4.1.4.1采样之前对现场进行调查并测定废气参数，确定干排气分子量和采样嘴的大小，并估算采样量。采样量取决于废气中二嗯英的浓度水平和仪器检出限。一般不应少于3m2干烟气的采样量。7.4.1.4.2实验室准备工作包括玻璃部件的清洗、药品和试剂的准备等。干净的玻璃部件和树脂柱用铝箔封好待用。
7.4.1.4.3现场利用微电脑平行采样系统测量排气温度、流速、压力、水分含量、等速采样流量等参数，等速采样流量计算公式如下：
B+PslrMa(273 +t)
Q, 0.000 47d2V.
1273+ t/
式中：
Q.—等速采样流量，L/min；
采样嘴直径，mm；
V。测点气体流速,m/s;
B——大气压力,Pa；
P.排气静压,Pa;
P.流量计前气体压力.Pa；
t排气温度，C，
流量计前气体温度，C；
Msd—于排气的分子量，kg/kmol；一一排气中的水分含量（体积分数），%。Xw-
(1- xw）
7.4.1.4.4连接采样装置。堵住采样嘴，启动采样泵，检查系统的气密性。7.4.1.4.5根据实际情况决定是否添加采样内标，添加内标的种类参见表10°若采样系统已经得到实验验证并且操作人员已熟练掌握采样技术，则不必每次都添加采样内标。内标物质的添加量一般为1～20ng。要求采样内标物质的回收率为70%～130%，超过此范围要重新采样。7.4.1.4.6将采样管插人烟道，封闭采样孔，使采样嘴对推气流方向（其与气流方向偏差不得大于10°），然后开动采样泵，并迅速谢整流量至等速采样流量。采样期间流量与测点流速的相对误差应在5%~10%范围内，每隔60min对等速采样流量作必要的调整。若滤简阻力增大到无法保持等速采样，则应更换滤简后继续采样。采样过程中，冲击瓶浸在冰水浴中，温度保持在6℃C以下，树脂吸附柱保持在30℃以下。树脂吸附柱应注意避光。7.4.1.4.7达到所需的采样量后，迅速抽出采样管，同时停止采样泵，记录起止时间或采样体积等参数。
7.4.1.4.8在避光处拆卸采样装置，尽量避免外界空气的混入。取出滤简保存在专用容器中，用丙酮、甲苯冲洗采样管和连接管，冲洗液与冲击瓶中的吸收液一并保存在棕色试剂瓶中。树脂柱两端密封后避光保存。样品应尽快送至实验室分析。7.4.2空气采样
7.4.2.1采样原理
空气中的二曬英分布于颗粒物上或以气态形式存在，所以要同时使用过滤和吸附材料对空气中的807
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二英进行大流量采样。过滤材料支架和吸附材料容器采用不锈钢或玻璃制作，尺寸应与采样材料匹配，部件之间连接紧凑（见图5）。7.4.2.2过滤及吸附材料
7.4.2.2.1滤膜：玻璃纤维滤膜，使用之前分别用丙酮和甲苯进行超声波洗涤30min，然后真空干燥。处理后的滤膜称重后用铝箔包严，密封在塑料袋中。7.4.2.2.2聚氨酯泡沫（PUF）：市售PUF有$90mm×50mm或60mm×70mm等规格，密度0.016g/cm。使用之前用蒸馏水和丙酮洗净，然后用丙酮索氏提取16 h以上，最后减压干燥，封装保存。7.4.2.3采样仪器
7.4.2.3.1采样泵：采样泵应满足大流量空气采样的要求，负载流量应大于800L/min，并具有恒定流量调节功能。
7.4.2.3.2流量计：流量指示范围应能覆盖300~1300L/min。有条件时附加使用累积流量计。定期对流量计进行校准。
7.4.2.4采样步骤
7.4.2.4.1清洗采样器：用玻璃棉蘸丙酮擦洗采样器的滤膜支架和PUF容器。干燥后用铝箔包装待用。
7.4.2.4.2安放采样器：原则上应安装在距离地面1.5m以上的位置。为防止地面扬尘，可在设备附近铺设塑料布或其他隔离物。将2～3块聚氨酯泡沫装人PUF容器中，并将容器安装到采样器上。然后将滤膜装入支架。安装后应尽快开始采样。7.4.2.4.3采样量：空气采集量大约为1000m。采样流量为500~~1000L/min，累计采样24h左右。采样时间应避免大风或下雨天气。7.4.2.4.4采样纪录：纪录采样点的环境情况，如采样时段的气压、温度、天气，采样日期、起止时间、采样流量等参数。
7.4.2.4.5样品保管：采样结束后，取下滤膜，用铝箱包严，密封在塑料袋中。聚氨酯泡沫连同其容器起用铝箔包严，密封在塑料袋中。样品应尽快送至实验室分析。8样品的制备
8.1对所有样品都必须有按相同步骤处理的空白对照。8.1.1对于含有颗粒的样品，固体百分比和颗粒度大小应该分别予以测定。8.1.2液体样品：因为二嗯英可能吸附于悬浮颗粒上，液体样品的制备方法需考虑样品中固体的含量（图1）。
8.1.2.1没有肉眼可见颗粒的液体样品，用分液漏斗直接提取或者固相萃取法(SPE)提取。8.1.2.2含肉眼可见颗粒物或悬浮固体少于百分之一的液体样品，先用SPE直接提取或过滤，再用索式抽提器提取颗粒和滤膜，滤液也可用分液漏斗提取。8.1.2.3对于固体含量超过1%的液体样品，需要提供含10g固体的样品量。8.1.3固体样品制备，通过索氏抽提器提取（图1）。8.1.4多相样品：含有二曬英的相需要过滤和离心，让其与不含二嗯英的相分开。含有机相的多相样品中，二嗯英主要存在于有机相中（图2）。8.1.5多相样品需经研磨、匀浆和混合（图2）。8.1.6组织样品：鱼及其他组织的制备按后面章节中的规定步骤处理（图3）。8.2悬浮固体百分比的测定：用来测定固体含量的样品就不能再用作二嗯英的测定8.2.1液体和多相样品
8.2.1.1干燥并称取片滤膜，结果保留三位有效数字。8.2.1.2充分混勾样品，过滤样品10.0mL。808
8.2.1.3滤膜应在110±5C下至少干燥12h，然后置于干燥器中保存。8.2.1.4固体质量分数计算：
固体的质量分数 =干爆后的样品重量(8)一滤膜重量(g)× 10010g
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8.2.2无水液体、固体、半固体样品及主要成分是水的多相样品，但不包括生物组织样品。8.2.2.1称取5～10g样品置于称量杯中，结果保留三位有效数字。8.2.2.2在（110士5)℃下至少干燥12h，并在干燥器中保存。8.3悬浮固体含量小于1%的液体样品的制备8.3.1无肉眼可见颗粒的水样通过以下程序制备：分别利用分液漏斗或SPE直接提取。含肉眼可见颗粒及含悬浮颗粒少于1%的水样，采用下述程序制备：SPE提取或经过滤后进一步制备。过滤后滤膜和颗粒用索氏抽提器提取，滤液用分液漏斗提取。SPE的固相和滤膜用索氏抽提器提取。8.3.2样品制备和质量控制（QC）8.3.2.1分别称量样品瓶的毛重与净重并精确至士1g。8.3.2.2在样品中加人稀释的标记标准添加工作液，让样品平衡1～2h。8.3.2.3在使用SPE提取时，应在样品中加人5mI，甲醇，封好摇匀后再进行提取。8.3.3颗粒过滤
8.3.3.1在干净的过滤烧瓶顶上安装布氏漏斗。抽真空的情况下，将样品瓶中的样品全部通过布氏漏斗中的玻璃纤维膜。
8.3.3.2用5mL蒸馏水洗涤样品瓶两次，将全部颗粒都转移到滤膜上。8.3.3.3
称取空样品瓶并精确至士1g，以差量法测出样品重量。8.3.3.4用分液漏斗提取滤液，用索氏抽提器提取含有颗粒的滤膜。8.4制备含量大于1%固体的样品
在干净的烧杯或玻璃器中，称取充分混合的样品，固体含量至少为10g。8.4.1
往样品中加人稀释的标记标准添加工作溶液。搅拌或振荡平衡1～2h。
弃去多余的水。
8.4.5对于粒径大于1mm的颗粒样品，应在通风柜中将样品平铺在干净的铝箔上，待样品干燥后。8.4.6用索氏抽提器提取样品。
8.5多相样品
8.5.1测定固体百分比，确定可提供含有10g固体的样品量。8.5.2用玻璃纤维滤纸过滤样品。8.5.3弃去所有水相。
8.5.4如果样品颗粒粒径大于1mm，在通风橱中将样品铺在干净的铝箔上，待样品于燥后研细并用索氏抽提器提取。如果样品颗粒粒径小于1mm，则干燥后用索氏抽提器直接提取。8.6样品研磨、勾浆或混合：颗粒粒径大于1mm的样品，应将颗粒粒径研至1mm以下。8.6.1样品的研磨、匀浆或混合操作应在通风橱进行，避免实验室污染。8.6.2研磨：纸和纸浆、污泥和不定形的固体可以使用研磨机。某些情况下，可借助干冰或液氮使样品温度降低至冰冻状态有助于研磨，样品的研磨要在于净的研钵中进行，注意样品温度不能超过50C。8.6.3匀浆或混合：如果未充分研磨的颗粒或者研磨后粒径仍大于1mm的颗粒，可用高速匀浆处理。8.6.4研细后的样品用索氏抽提器提取。8.7生物组织：生物组织样品需经匀浆处理。8.7.1样品在冰冻条件下匀浆更为有效。8.7.2每次分析需要10g生物组织样品（湿重）。实验室应勾浆处理至少20g生物组织样品以备相同809
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样品的再提取分析。
8.7.3将组织切成小碎片在组织匀浆器中匀浆或在搅肉器中研碎样品。为了保证勾浆度，应至少研磨3次。
8.7.4将大约10g（湿重）匀浆组织转人干净、已称重的400～500mL烧杯中。在使用HCl消解时，则应将组织转入干净、已称重的500~600mL大口瓶中，记录重量（10mg精度）。8.7.5将剩余的勾浆组织转人干净瓶中，用四氟膜密封于一10℃以下储存。9提取和浓缩
9.1用分液漏斗提取滤液和不可见颗粒的液体9.1.1将添加了内标的样品或滤液置于2L分液漏斗中，用5mL蒸馏水淋洗样品瓶或烧瓶两次并将洗涤液加人分液漏斗中。
9.1.2在样品中加人60mL二氟甲烷，摇荡分液漏斗2min。静置10min以上以便有机相和水相分离。如果形成乳状而且大于有机相体积，则用下述方法来完成相分离：将二氣甲烷提取物通过一个装有约一半粉状无水硫酸钠的小柱中，并用溶剂洗涤玻璃漏斗，提取物最后转人用溶剂洗涤过的浓缩瓶中。如果形成乳状液，必须采用一些物理的方法以完成分离。使用的方法依样品而定，包括搅拌、玻璃毛过滤、相分离纸、离心、冰浴中超声、添如NaCI或其他的物理方法。另外，固相或其他提取技术可以阻止乳状液的形成。经验表明可溶有机物含量高的水样（如造纸废水），利用酸化可以减少乳状液的形成。在11造纸工业废水样品中加入400ml乙醇也可以减少乳状液的形成。9.1.3水样用60mL二氯甲烷再提取两次，合并的提取液通过无水硫酸钠柱并转人浓缩瓶中。在第3次提取后，用至少20mL二氯甲烷洗涤分液漏斗，洗涤液通过无水硫酸钠柱并转人浓缩瓶。重复洗涤至少两次。
9.1.4进行大体积浓缩。
9.2固体含量少于1%的样品处理方法9.2.1固相萃取的准备
9.2.1.1过滤前在过滤器上加上固相萃取片。9.2.1.2用15mL甲苯洗涤过滤器的边缘。抽真空直到出现几个液滴。降低真空度以使滤片浸湿约1min，加大真空度抽去全部的甲苯。再用15mL丙酮重复洗一次，滤片置空气中晾干。9.2.1.3以15ml.甲醇再润湿滤片，润湿约1min，减压抽去大部分甲醇，保留约1mm高度甲醇，以保持滤片的湿润。
9.2.1.4加人约50mL蒸馏水洗涤滤片，让大部分通过滤片，滤膜上最后要留一层水。9.2.2提取
9.2.2.1将样品加人布氏漏斗中，抽真空开始提取。调整真空度使整个提取不少于10min。对于颗粒物含量高的样品，过滤时间应为8h以上。9.2.2.2在样品快抽完时，加人约50mL蒸馏水洗下样品瓶中所有的固体，通过滤片抽滤。9.2.2.3抽滤完全部样品和洗涤液后，用少量蒸馏水洗涤盛水槽的内壁。9.2.2.4将晾干的滤片置于玻璃平避中。9.3索氏抽提器提取固体样品
9.3.1将约10g干燥样品装人提取滤纸简中，上层用50g石英砂盖住。9.3.2加人200250mL甲苯，加热开始回流并调节回流速度。9.3.3回流16~~24h，冷却后拆开装置，记录收集的体积。9.3.4移去蒸馏烧瓶，并将收集管中的甲苯.与烧瓶里的提取物合并。9.3.5浓缩提取物
9.4生物组织提取：组织提取的两种方法。810
9.4.1索氏抽提
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9.4.1.1将20～30mg无水硫酸钠加入烧杯中，并与约5g样品充分混和。用铝箔盖住平衡12~24h，提取前再搅匀以防止结块。
9.4.1.2加人200～250mL二氮甲烷/正已烷（1：1)于回流瓶中。9.4.1.3将样品和无水硫酸钠混合物转入样品提取滤纸筒，并装入索式抽提器中。9.4.1.4用溶剂清洗烧杯后并转入收集管中。加热回流抽提18~24h。9.4.1.5抽提完毕，待冷却后再拆开装置。9.4.1.6定量转移提取物于大体积浓缩瓶中，旋转浓缩提取物使其体积至1～2ml.。9.4.1.7类脂含量测定
按上述方法用二氯甲烷/正已烷（1：1)提取生物组织，旋转浓缩后，在60C并于氮气流下吹至恒重，然后计算类脂含量，计算时需保留三位有效数字，计算公式如下：类脂的质量分数
9.4.2HC1消解和浓缩
残留物的重量（g）
2×100
组织的重量（g）
9.4.2.1加人200ml.220g/LHCl和200ml.二氯甲烷/正已烷（1：1)于样品中。9.4.2.2密封摇荡1～3次。每隔10～30s时间在通风橱中打开活塞放出多余的压力。9.4.2.3密封后再置于摇床上，调整摇床及摇速使酸、溶剂和生物组织稳定摇动，摇荡时间为12～24h。
9.4.2.4消解完毕，移走瓶子。静置，使溶剂和酸分层。9.4.2.5将溶剂通过玻璃漏斗倒入大体积瓶中，用25mL正已烷清洗样品瓶。萃取液再用无水硫酸钠于燥后转入浓缩器中。
9.4.2.6用大体积浓缩法浓缩溶剂至1～2mL。9.5碱和酸再提取
9.5.1将样品提取物置于分液漏斗中。9.5.2往提取物中加人50mL20%（m/V)KOH溶液并置于通风橱中播荡2min，不时放气，分离水层。重复进行碱洗2～4次，直至水层无色。尽量减少提取物与碱的接触时间，以防止二嗯英的降解。9.5.3向提取物中加人50mL1%（m/V)NaCl溶液，反复洗涤2~4次，弃去水相。9.5.4向提取物中加人50mLH.SO4，反复酸洗24次至水相无色。9.5.5再次加入1%(m/V)NaCI溶液洗涤2~4次并弃去水相。9.5.6将提取物经过含有7～10cm柱床高度的无水硫酸钠小柱。用30～50mL正已烷清洗分液漏斗并通过该小柱。将提取物收集于圆底烧瓶中浓缩。9.6大体积浓缩
9.6.1旋转蒸发
9.6.2K-D浓缩器：K-D浓缩器用于浓缩二氯甲烷和正己烷溶剂。9.7溶剂交换
9.7.1用硅胶，氧化铝、活性炭或弗罗里土色谱柱纯化的提取物要换成正已烷为溶剂。9.7.2将装有提取物的小管移到氮气吹干装置上，调节氮气流使溶剂表面仅轻微晃动。9.7.3将小管移人45℃C水浴继续浓缩。9.7.4当液体体积剩约1mL时，加人所需溶剂2~3mL并继续浓缩至约1mL。重复再加溶剂浓缩一次。
10提取物的纯化
10.1二嗯英的纯化主要由三根色谱柱组成，即：多层酸化硅胶柱、氧化铝柱和弗罗里土柱。811
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10.1.1氧化铝和弗罗里土用于除去非极性干扰物，还可用来去除氯代二苯醚。10.1.2多层酸化硅胶柱主要用于除去组织样品中的类脂和非持久性污染物，若类脂多于500mg，应再用一根多层酸化硅胶柱重复纯化一次。10.2多层酸化硅胶柱纯化
10.2.1按下列步骤填充色谱柱：从柱的底部向顶部装柱顺序依次为：2g无水硫酸钠，4g硅胶，10g酸化硅胶，2g硅胶和5g无水硫酸钠。正已烷湿法装柱，轻敲色谱柱使这些吸附剂分布均匀。10.2.2用80ml正已烷预淋洗柱。当正已烷流至离无水硫酸钠层只有2~~3mm时，关闭柱阀，弃去洗脱液。检查色谱柱的沟流情况。如果出现沟流，重新装柱。10.2.3将已浓缩的提取物上柱。打开柱阀，直到提取物在无水硫酸钠上部只剩下2~3mm，装提取物的瓶用正已烷荡洗三次，并分别加入色谱柱。10.2.4用245mL正已烷洗脱二嗯英，并收集洗脱液。10.2.5浓缩洗脱液以便进一步纯化。10.3氧化铝柱纯化步骤
10.3.1从柱的底部向顶部装柱顺序依次为：2g无水硫酸钠，25g碱性氧化铝，20g无水硫酸钠，正己烷湿法装柱。
10.3.2轻敲色谱柱使吸附剂分布均匀。10.3.3依次用100mL的正已烷，预淋洗填充柱，当氧化铝的液面仍有2～3mm时，关上活塞。10.3.4弃去淋洗液，检查色谱柱是否有沟流，如果有，则弃去此柱，重新装柱。10.3.5加人浓缩后的抽提液，打开活塞直至液面仅剩1mm。10.3.6用200mL正已烷/二氯甲烷（体积比为98：2)淋洗干扰组分，弃去淋洗液。用200mL正已烷/二氯甲烷（体积比为1：1)洗脱，收集洗脱液。10.3.7.
10.4弗罗里土柱纯化
用200mL正己烷预淋洗活化的弗罗里土柱。10.4.1
当柱内剩余溶剂离填料高度为2～3mm左右时，将正已烷提取液加入柱中。10.4.3
用200mL正已烷淋洗干扰物并弃去洗脱液。10.4.4用300mL二氯甲烷洗脱二嗯英并收集洗脱液，浓缩洗脱液供进一步纯化。10.4.5将提取物转移至0.3mL的锥形小管中进行最后的浓缩。浓缩提取物至约100μL后再加人10μL含13C12-1，2，3,4-TCDD回收率内标，继续浓缩至恒重。室温下暗处保存以备GC/MS分析。11 HRGC/HRMS 分析
11.1建立的操作条件要符合规定内标所允许的最小保留时间及表2中二嗯英的相对保留时间。11.1.1GC操作条件：
进样口温度：280℃；
传输线温度：260C；
初始温度：90C（1.5min）；
升温程序：90～180℃，25℃/min，180~260C,2℃/min
260C停留30min。
11.2离子丰度比和信噪比
11.2.1所有的二嗯英异构体和CS1标准中标记化合物的离子丰度比应该在表8中的质量控制(QC)范围内。
11.2.2二英及CS1中标记化合物峰的信噪比必须大于10：1。11.2.3质谱分辨率达到10000。
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