ICS 65.020.20 B04 天津市地方标准 DB12/T 883—2019 食用菌中甲醛的测定高效液相色谱法 发布日期：2019-03-25 实施日期：2019-05-01 天津市市场监督管理委员会 前言 本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草，由天津市农业科学院提出并归口，起草单位为天津市农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人包括刘征辉、魏静娜、赵琳琳、张强、薛天凯、赵云平、徐石勇、郑贵忠。 1. 范围 本标准规定了采用高效液相色谱法测定食用菌中甲醛的原理、试剂和材料、仪器和设备、操作步骤及结果表示。适用于食用菌中甲醛的含量测定。 2. 规范性引用文件 以下文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3. 原理 采用衍生液提取样品中的甲醛，反应生成甲醛衍生物。液液萃取净化后，在365nm波长处，液相色谱法测定，外标法定量。 4. 试剂和材料 4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH₃CN） 4.1.2 硫酸铵（(NH₄)₂SO₄） 4.1.3 冰乙酸（CH₃COOH） 4.1.4 乙酸钠（CH₃COONa） 4.1.5 2，4-二硝基苯肼：纯度≥99%（C₆H₄(NO₂)₂C₆H₄NHNH₂） 4.1.6 水（H₂O）：GB/T 6682规定的一级水。注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。 4.2 试剂配制 4.2.1 缓冲溶液（pH5）：称取2.64g乙酸钠，溶于适量水中，加入1.0mL冰乙酸，用水定容至500mL。 4.2.2 2，4-二硝基苯肼溶液（0.6g/L）：称取300mg 2，4-二硝基苯肼，用乙腈溶解，定容至500mL。 4.2.3 衍生液：取100mL缓冲溶液和100mL 2，4-二硝基苯肼溶液，混合均匀。 4.3 标准溶液 甲醛标准溶液：100μg/mL，安培瓶封装，置于10℃以上保存，使用前于室温下平衡，摇匀，推荐打开后一次性使用，或将标准溶液转移至棕色瓶密封。 5. 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 5.2 天平：感量0.001g。 5.3 粉碎机。 5.4 涡旋混合仪。 5.5 离心机：转速≥4000r/min。 5.6 恒温振荡器。 5.7 具塞塑料离心管：聚丙烯，50mL。 5.8 具塞比色管或刻度试管：20mL。 6. 试样制备与保存 从所取的全部样品中，取出样品约500g，取可食部分经粉碎机充分粉碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样，密封并注明标记。鲜样于-18℃下冷冻保存；干样于0～4℃下冷藏保存。 7. 分析步骤 7.1 提取 称取已混匀的鲜样5.0g（干品1.0g），精确至0.001g，置于50mL塑料离心管中，准确加入10.0mL衍生液。旋紧塞子，涡旋混匀后置于60℃恒温振荡器中，150r/min振摇，间隔20min取出混匀一次，振摇1h后取出冷却至室温。 7.2 净化 将样品提取液以不低于4000r/min离心5min。离心后溶液澄清，过0.22μm微孔滤膜后，滤液直接供HPLC测定。如溶液浑浊或分层，在提取液中加入8g硫酸铵，混匀，离心后移取上清液。溶液用乙腈定容至10.0mL，混匀后过0.22μm微孔滤膜，滤液供HPLC测定。 7.3 甲醛衍生物标准溶液的制备 移取0μL、20μL、50μL、100μL、200μL、500μL甲醇标准溶液，加入缓冲溶液至5.0mL，再用2，4-二硝基苯肼溶液定容至10.0mL，60℃水浴加热1h，取出冷却至室温后，过0.22μm微孔滤膜，滤液供HPLC测定。 7.4 测定条件 色谱柱：C18，5μm，4.6×250mm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；流动相：甲醇-水（70-30）；检测波长：365nm。 7.5 色谱测定 标准溶液和样液中甲醛衍生物的响应值应在仪器检测的线性范围内，以峰面积为纵坐标，甲醛衍生物标准溶液对应的甲醛浓度为横坐标，绘制标准曲线。通过保留时间和峰面积进行定量测定。