ICS 11.220
B41
备案号：58540-2018
DB21
辽宁省地方标准
DB21/T2827.5-2017
畜禽疫病防治与净化技术规范
第5部分：鸡白痢平板凝集试验操作技术规范
Technical Specifications of Prevention and Eradication of Animal Epidemic Disease Part 5: Technical Specifications of the Operation in Plate Agglutination Test on Pullorum Disease

发布日期：2017-10-27
实施日期：2017-11-27
发布单位：辽宁省质量技术监督局

目次
前言
1 范围
2 规范性引用文件
3 实验准备
3.1 实验材料
3.2 实验样品
3.2.1 全血制备
3.2.2 血清制备
3.2.3 卵黄制备
3.3 实验操作
3.4 结果判定

前言
标准《畜禽疫病防治与净化技术规范》按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草，分为七个部分，其中本部分为第5部分《鸡白痢平板凝集试验操作技术规范》。本部分由辽宁省动物疫病预防控制中心提出，由辽宁省畜牧兽医局归口。主要起草人：孙世宇、郑共玲、王竹、关淼。

1 范围
畜禽疫病防治与净化技术规范 第5部分：鸡白痢平板凝集试验操作技术规范。
本标准规定了鸡白痢检测的全血平板凝集试验、血清平板凝集试验和种蛋蛋黄平板凝集试验的技术要求。
本标准适用于鸡白痢的现场检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。
NY/T 536-2002 鸡伤寒和鸡白痢诊断技术。

3 实验准备

3.1 实验材料
3.1.1 鸡白痢、鸡伤寒多价染色抗原，阴性血清。
3.1.2 透明塑料薄膜、A4纸。
3.1.3 衬板：在A4纸上分割出96个方形区域，每个方形区域内设置一个直径为2 cm的圆形区域，该圆形区域为凝集试验反应区。凝集试验时，样品应均匀涂布至该圆形区域大小。
3.1.4 移液器、吸头、酒精棉球、注射器、15 mL离心管、1.5 mL离心管、手电筒。

3.2 实验样品

3.2.1 全血制备
用酒精棉球对鸡的翅静脉或鸡冠进行消毒后，用针头刺破翅静脉或鸡冠，用移液器吸取0.05 mL血液备用。

3.2.2 血清制备
将鸡侧卧保定后，用酒精棉球消毒翅静脉窝区。在距离翅静脉窝约0.3 cm处，以约45°角进针，轻拉活塞采集血液。达到所需采血量后，用棉球压迫伤口约30 s止血。将采集的血液缓慢注入15 mL离心管中，避免产生气泡和振荡，逐一编号并核对。夏季在常温下、冬季在25℃～37℃条件下静置约1 h，待血清析出后吸入1.5 mL离心管备用。

3.2.3 卵黄制备
用碘酒和酒精棉球对种蛋表面进行消毒，在种蛋小端打孔并排尽蛋清。用移液器吸取0.5 mL蛋黄置于1.5 mL离心管中，再加入等量生理盐水充分混匀，吸取0.05 mL卵黄稀释液备用。

3.3 实验操作
3.3.1 将透明塑料薄膜覆盖于衬板上，使其与衬板完全重合，衬板上的圆形凝集反应区域可透过塑料薄膜清晰显示。
3.3.2 用移液器吸取0.05 mL抗原滴加于圆形反应区域中央。
3.3.3 用移液器吸取0.05 mL血液、血清或卵黄样品滴加于抗原上，用吸头充分混匀，并均匀涂布于圆形反应区域。
3.3.4 在20℃～25℃条件下反应2 min，使用手电筒反照塑料薄膜观察并判定结果。
3.3.5 应同时设置阴性血清、强阳性血清和弱阳性血清对照。

3.4 结果判定

3.4.1 凝集反应判定标准
3.4.1.1 100%凝集：++++。
3.4.1.2 75%凝集：+++。