DB45/T2804—2023 猕猴桃细菌性溃疡病PCR诊断技术规程 (Technical code on diagnosis of bacterial canker disease of kiwifruit by PCR)

前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出、归口并宣贯。
起草单位：广西特色作物研究院。
主要起草人：王明召、娄兵海、阳廷密、杨炎昌、唐明丽、门友均、何建军、宋雅琴、韩旸、班世面。

1 范围
本文件确立了猕猴桃细菌性溃疡病PCR诊断技术的程序，给出了缩略语、诊断原理，规定了样品采集、诊断方法、诊断后样品处理的操作指示，描述了技术档案作为追溯方法。本文件适用于广西壮族自治区行政区域内猕猴桃属植物感染猕猴桃细菌性溃疡病的诊断。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
本文件没有规范性引用文件。

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 猕猴桃细菌性溃疡病
由丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种（Pseudomonas syringae pv. actinidiae）引起的猕猴桃病害。

4 缩略语
下列缩略语适用本文件。
bp：碱基对
DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid）
dNTPs：四种脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxyribonucleoside triphosphate）的等摩尔混合物，包括dATP、dGTP、dCTP和dTTP
PCR：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）
Taq酶：Taq DNA聚合酶（Taq enzyme）
pH：氢离子浓度指数（Hydrogen ion concentration）

5 诊断原理
利用猕猴桃细菌性溃疡病菌DNA特异性扩增引物，在热稳定DNA聚合酶的作用下合成大量目标DNA片段，最终通过凝胶电泳分离检测出特定大小的猕猴桃细菌性溃疡病菌特异性DNA谱带，根据该谱带的有无确定样品是否带有猕猴桃细菌性溃疡病菌。

6 样品采集