ICS 65.020.20 CCS B22 DB32 江苏省地方标准 DB32/T 4139—2021 小麦赤霉病菌抗药性监测技术规程 Technical regulation for monitoring of fungicide resistance in Fusarium spp. causing wheat head blight 2021-11-04发布 江苏省市场监督管理局 发布 2021-12-04实施 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由南京农业大学提出。 本文件由江苏省农作物标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：南京农业大学、江苏省植物保护植物检疫站。 本文件主要起草人：周明国、侯毅平、段亚冰、王建新、张绍明、朱阿秀。 1 范围 本文件规定了小麦赤霉病菌抗药性监测对象、敏感性基线确定、采样与分离、敏感性测定等技术要求。 本文件适用于小麦赤霉病菌对常用杀菌剂抗性监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用。 NY/T 1156.1—2006 农药室内生物测定试验准则 杀菌剂 第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验 凹玻片法 NY/T 1156.2—2006 农药室内生物测定试验准则 杀菌剂 第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验 平皿法 NY/T 1859.1 农药抗性风险评估 第1部分：总则 NY/T 1859.6 农药抗性风险评估 第6部分：灰霉病菌抗药性风险评估 3 术语和定义 NY/T 1859.1和NY/T 1859.6界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 区分剂量（critical concentration） 能够鉴别抗药性菌株和敏感菌株的药剂浓度。 4 监测对象 监测对象包括： a）苯并咪唑类杀菌剂：多菌灵、甲基硫菌灵； b）麦角留醇生物合成抑制剂：戊唑醇、丙硫菌唑、叶菌唑、丙环唑、三唑酮、咪鲜胺、已唑醇、氟环唑、苯醚甲环唑； c）甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂：嘧菌酯、吡唑醚菌酯、醚菌酯、烯菌酯等； d）琥珀酸脱氢酶抑制剂：氟唑菌酰羟胺、萎锈灵； e）肌球蛋白抑制剂：氰烯菌酯； f）多作用位点杀菌剂：福美双、百菌清。 5 敏感性基线确定 按照NY/T 1859.6执行。 6 采样与分离 6.1 采样 小麦收获前在多个代表性监测点采集赤霉病发病麦穗，或在抽穗前20～25天采集含病残体的稻桩。样本分别装入纸质信封，记录采样人、联系方式、小麦品种、用药情况及采样地点等信息，并晾干防止霉变。 6.2 分离 挑取病残体或病麦粒，置于含50 μg/mL五氯硝基苯和100 μg/mL硫酸链霉素的马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）平板上分离小麦赤霉病菌。 7 敏感性测定 7.1 药剂配制 将有效含量90%以上的杀菌剂原药溶解制成10 mg/mL母液，现配现用。 7.2 测定方法 7.2.1 菌丝生长速率测定法 将菌株接种至含区分剂量药剂培养基上，在25℃黑暗培养3天，观察菌株生长情况。能生长为抗性菌株，不生长为敏感菌株。具体方法按NY/T 1156.2—2006执行。 7.2.2 孢子萌发测定法 制备分生孢子或子囊孢子液，稀释至约10^5个/mL，涂布于含不同药剂浓度水琼脂平板，在25℃培养6～8小时，显微镜下观察萌发率并计算EC50值和抗药性指数。具体方法按NY/T 1156.1—2006执行。 7.2.3 LAMP高通量测定法 用于检测β2-Tubulin F167Y基因型突变引起的多菌灵抗性，通过扩增产物颜色判断抗性情况，具体方法见附录A。 8 抗药性评价 8.1 抗药性频率及风险评价 抗药性频率（%）=抗药性菌株数/测定菌株数×100。 抗药性频率＜5%为低风险；5%～10%为中风险；＞10%为高风险。 8.2 影响抗药性风险的其他因素 8.2.1 抗药性指数