DB36/T1904—2023 实验动物支原体荧光定量PCR检测方法
Laboratory animal real-time quantitative PCR method for examination of mycoplasma
江西省地方标准
发布日期：2023-12-11
实施日期：2024-06-01

前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由江西省卫生健康委员会提出并归口。
本文件起草单位：江西省职业病防治研究院。
本文件主要起草人：肖芳平、张陆兵、周银平、熊莉娟、万筱荣、贾菠、刘欢、罗勇兵、谢金明、周剑、李银才。

1 范围
本文件规定了实验动物支原体荧光定量PCR检测的术语和定义、缩略语、设备和材料、试剂、检测流程和结果判定等内容。
本文件适用于小鼠、大鼠中支原体的检测，饲养环境中支原体的检测参照执行。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 14922 实验动物微生物、寄生虫学等级及监测
GB 19489 实验室生物安全通用要求
GB/T 19495.2 转基因产品检测实验室技术要求
GB/T 39760 实验动物安乐死指南

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 支原体 mycoplasma
支原体属于柔膜体纲，支原体科，大小介于病毒和细菌之间，约 0.1μm~0.6μm，没有细胞壁，仅有三层结构且富含胆固醇的细胞膜。大多数的支原体都具有种属特异性。
3.2 荧光定量聚合酶链式反应 real-time quantitative polymerase chain reaction; real-time PCR
在常规 PCR 的基础上，在反应体系中加入一对特异性引物和一条特注探针，探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR 扩增时，Taq 酶的 5'→3' 外切酶活性将探针降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，淬灭作用消失，荧光信号产生并被检测仪器接受。随着 PCR 反应的循环进行，PCR 产物与荧光信号的增长呈对应关系，通过检测荧光信号对核酸模板进行检测。
3.3 Ct值 cycle threshold value