ICS 65.020.01 CCS B20 DB15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 3298—2024 首镰刀菌根腐病室内抗性鉴定技术规程 Code of practice for identification of alfalfa resistance to Fusarium Root Rot in room 2024-01-25 发布 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 2024-02-25 实施 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由内蒙古自治区林业和草原局提出并归口。本文件起草单位：中国农业科学院草原研究所、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、内蒙古草业技术创新中心有限公司、巴彦淖尔市现代农牧事业发展中心、内蒙古自治区林业和草原监测规划院。本文件主要起草人：张园园、林克剑、贾瑞芳、陈正强、张晓萝、王乐、王圣泽、吴杰、肖皓文、韩兆敏、张枫青、杨文。 1 范围 本文件规定了首宿抗镰刀菌根腐病的接种体制备、抗病性鉴定、病情调查和抗病性评价。本文件适用于室内评价首不同品种对镰刀菌根腐病的抗性水平。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 6141 豆科草种子质量分级 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 首宿镰刀菌根腐病 Alfalfa Fusarium Root Rot 由镰刀菌（Fusarium spp.）引起的土传性真菌病害，造成根和根颈部出现褐色病斑至腐烂凹陷、开裂或剥脱，中柱呈红褐色至暗褐色，植株萎蔫直至死亡。 3.2 接种体 Inoculum 在实验室条件下培养的用于人工接种的病原菌繁殖体或营养体。 4 接种体制备 4.1 供试菌种 选取内蒙古首种植区发病株上分离获得的具有中等致病力的根腐病优势菌株——锐顶镰刀菌（Fusarium acuminatum）。 4.2 培养基制备 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）：马铃薯200 g，洗净去皮切成1 cm～2 cm的小块，加水煮沸20 min，纱布过滤，加入葡萄糖20 g和琼脂15 g，待完全熔化后，用水定容至1000 mL，搅拌均匀，高压灭菌（121 ℃，20 min）。麦麸培养基：将40 mL蒸馏水加入60 g麦麸中拌匀，装入三角瓶中，高压灭菌（121 ℃，30 min）。 4.3 接种体繁殖 在无菌条件下将接种菌株转接于PDA平板培养基上，25 ℃恒温培养3 d～5 d，自菌落边缘打取直径6 mm菌饼3～5块，接种于灭菌的麦麸培养基上，摇匀后置于恒温培养箱25 ℃培养7 d。 4.4 接种悬浮液制备 用200 mL～300 mL无菌水将麦麸进行淘洗，用四层纱布过滤，获得孢子悬浮母液，配制成孢子量为5×10⁶个/mL的悬浮液用于接种。 5 抗病性鉴定 5.1 种子质量 鉴定品种的种子质量应符合GB 6141中首一级种标准。 5.2 育苗 将种子在3%次氯酸钠溶液中浸泡2 min，转至75%乙醇溶液中消毒30 s，无菌水冲洗5遍，播种于装有灭菌营养土的穴盘中。置于温度24 ℃～26 ℃、空气相对湿度30%～40%的温室条件下，待幼苗生长至3～4片复叶时接种。 5.3 接种 5.3.1 接种方法 采用蘸根接种法进行接种（详见参考文献1）。将幼苗从穴盘中取出，根系冲洗干净后完全浸泡于接种悬浮液中30 min后，将幼苗重新移植于装有灭菌营养土的营养钵（高10 cm，直径10 cm）中，每钵5株，每个处理30株，重复三次。 5.3.2 接种后管理 将营养钵置于温度24 ℃～26 ℃、光照10 h～12 h的温室条件下生长，保持基质湿润。 5.3.3 对照品种 选择高感首镰刀菌根腐病品种作为对照材料。 6 病情调查 6.1 病情级别划分 病情级别划分见表1（引自参考文献2）。首镰刀菌根腐病抗性室内鉴定病情级别划分如下： 表1 病情级别划分 病情级别：1、2、3 代表值：0、1、2 症状描述： 1级：健康无症状； 2级：根颈部出现少量黑褐色、较小斑点； 3级：根颈被黑褐病斑包围。