ICS 65.120 B46 河东北省地 DB13 方 标准 DB13/T1384.5-2011 饲料中庆大霉素的测定 Determination of Gentamycin in Feed 2011-05-10 发布 河北省质量技术监督局 2011-05-20 实施 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。DB13/T1384.5—2011 本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、河北省医科大学、北京出入境检验检疫局技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。本标准主要起草人：张岩、杨立学、李挥、丛斌、卢晓宇、吕品、张宏、贾茜、米振杰、沈磊、范斌、李志平、高振同、武英利。 1 范围 饲料中庆大霉素的测定 本标准规定了饲料中庆大霉素的液相色谱-串联质谱测定方法。适用于饲料中庆大霉素的测定。本标准的方法检出限为20 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-1992，neq ISO 3696:1987） 3 原理 试样经提取，高速离心后再用CBX固相萃取小柱净化，液相色谱串联质谱测定，子离子丰度比定性，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 七氟丁酸酐（HFBA）：优级纯。 4.3 三氯乙酸。 4.4 磷酸二氢钾（KH2PO4）。 4.5 盐酸。 4.6 二水合乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA·2H2O）。 4.7 样品提取液（10 mmol/L KH2PO4溶液，含0.4 mmol/L EDTA和2%三氯乙酸）：准确称量1.36 g KH2PO4于1000 mL容量瓶中，加入少量水，用盐酸调pH至4.0，再加入1.5 g Na2EDTA·2H2O和20 g 三氯乙酸，用水定容至刻度，混匀即得。 4.8 氢氧化钠。 4.9 庆大霉素标准品：纯度≥99%。 4.10 庆大霉素标准储备溶液：分别称取经折算相当于0.0100g新霉素的标准品，用水溶解定容至100 mL，溶液浓度为100 μg/mL。1℃～4℃冷藏保存，保存期1个月。 4.11 空白样品提取液：用不含链霉素的样品，按照6.1和6.2制备空白样品溶液。 4.12 庆大霉素标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成15 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、250 ng/mL、300 ng/mL的混合标准工作溶液，相当于样品中含有6 g/kg、10 g/kg、20 g/kg、100 g/kg、120 g/kg新霉素，现配。 4.13 CBX阳离子交换柱，或相当者：500 mg，6 mL。 4.14 乙酸。 4.15 10%乙酸甲醇溶液：准确量取10 mL乙酸于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀即可。 4.16 100 mmol/L HFBA水溶液：准确量取6.5 mL七氟丁酸酐，用水稀释至500 mL（4℃避光保存6个月）。 4.17 20 mmol/L HFBA水溶液：准确量取100 mmol/L HFBA溶液50 mL，用水稀释至250 mL（4℃避光保存6个月）。 4.18 5 mmol/L HFBA水溶液：准确量取20 mmol/L HFBA溶液25 mL，用水稀释至100 mL（4℃避光保存6个月）。 4.19 20 mmol/L HFBA乙腈溶液：准确量取1.3 mL七氟丁酸酐，用乙腈稀释至500 mL（4℃避光保存6个月）。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2 微孔滤膜。 5.3 pH计。 5.4 高速离心机。 5.5 旋涡混匀器。 5.6 固相萃取装置。 6 测定步骤 6.1 提取 准确称取样品1g（精确到0.01g）至10mL离心管中，加样品提取液10 mL，旋涡混匀10min，12000 r/min 离心10min，移出上清液。重复提取一次，合并上清液，调pH至8.0，12000 r/min 离心10min，取上清液备用。 6.2 净化 将上清液移入CBX柱（使用前分别用5mL甲醇、5mL水预处理，保持柱体湿润）。溶液以2.0 mL/min的流速过柱，然后依次用水淋洗，减压抽干20 min。用10%乙酸甲醇溶液5 mL洗脱，收集洗脱液于40℃下氮气吹干。用5 mmol/L HFBA水溶液0.5 mL溶解残渣，15000 r/min 离心10 min，经0.22 μm滤膜过滤后，待测。 6.3 测定 6.3.1 液相色谱-串联质谱条件 色谱柱：C18，5μm