ICS 65.020.30
CCS B 40/49
DB51
四川省地方标准
DB51/T 3011—2023

山羊胚胎生产与冷冻保存技术规范

2023-02-07 发布
2023-04-08 实施
四川省市场监督管理局

前言

本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由四川省农业农村厅提出、归口和解释。本文件主要起草单位：四川省畜牧总站、四川农业大学。本文件主要起草人：杨舒慧、张明、张红平、李强、王小强、曹伟、周光斌、曾长军、程莲、洪宁、王莉娟、张勇。
本文件为首次发布。

1 范围
本文件规定了山羊胚胎生产与冷冻保存的术语和定义、胚胎生产、质量检测、冷冻及解冻的技术要求。
本文件适用于山羊胚胎生产与冷冻保存。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
NY/T 1571 羊胚胎移植技术规程
NY/T 1674 牛羊胚胎质量检测技术规程

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
超数排卵 Superovulation
利用外源性促性腺激素诱发母羊卵巢多个卵泡发育，并排出多个具有受精能力的卵子的方法。
3.2
体外受精 In vitro fertilization
山羊的精子和卵子在人工控制的体外环境中完成受精过程。
3.3
玻璃化冷冻 Vitrification
利用含有高浓度的渗透性抗冻保护剂溶液处理胚胎，然后将胚胎装入冷冻载体并直接投入液氮快速降温，使液体形成玻璃态，可有效减少冷冻过程中有害冰晶的形成，使胚胎所受物理性伤害大大降低的一种胚胎冷冻方法。
3.4
慢速降温冷冻 Slow-freezing
利用含有低浓度的渗透性抗冻保护剂溶液处理胚胎，然后将胚胎装入冷冻载体并按照一定程序于程序冷冻仪中植冰和降温，最后置于液氮中保存的一种冷冻方法。
3.5
体外受精胚 in vitro-fertilized embryo
通过体外受精获得的胚胎。

4 胚胎生产
4.1 超数排卵胚生产
4.1.1 药品与器械的准备
孕酮阴道栓（CIDR）、氯前列烯醇（PGF2a）、促卵泡素（FSH）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）（或促黄体素（LH），或促排3号）、青霉素、链霉素、复合麻醉剂、PBS液（附录A1）、冲胚液（附录A2）、胚胎操作液（附录A3）、生理盐水、75%酒精、碘配；手术台、植栓枪、羊用冲胚管、滞留针（18G）、手术剪、手术刀、止血钳、缝针（圆针、三棱针）、外科手术缝线、注射器、体视显微镜、恒温台、检胚皿、培养皿。
4.1.2 供体母羊选择
所选用供体母羊必须符合品种要求或标准（有国标或地标的品种，参照品种标准），连续三代内系谱清楚、健康无病，发育到性成熟后，繁殖机能正常的个体。
4.1.3 饲养管理
保持饲养环境适宜、卫生、温度稳定，避免应激；制定合理的供体羊日粮配方，保证蛋白质、能量、维生素和微量元素等营养平衡，保持中等膘情；供给清洁饮水，适当运动。
4.1.4 超数排卵
用植栓枪将CIDR（含孕酮300mg～500mg）放入供体母羊阴道内，放置CIDR之日为0d，第9d第二次补栓，第15d起早晚间隔12h肌肉注射FSH，注射总量100IU～200IU（或10mg～15mg），每天按照总量的5：3：2递减连续注射3d，第16d上午注射完FSH后立即撤CIDR，同时注射氯前列烯醇2ml。孕酮、FSH具体计量见表1。
表1 孕酮、FSH具体计量
体型品种 | 大型 | 中型 | 小型
CIDR中孕酮（地方品种） | 500mg | 450mg | 400mg
CIDR中孕酮（培育品种） | 400mg | 350mg | 300mg
FSH（地方品种） | 200IU/15mg | 175IU/13.5mg | 150IU/12mg
FSH（培育品种） | 150IU/13mg | 125IU/11.5mg | 100IU/10mg
4.1.5 发情鉴定与诱导排卵
注射完FSH后，观察母羊发情情况。对有发情征兆的母羊，采用公羊试情，以供体母羊愿意接受试情公羊爬跨，判断为发情。做好发情时间记录，同时静脉注射HCG 500IU～800IU，或肌注LH 50IU～100IU，或肌注促排3号 10ug～20ug。诱导排卵激素具体剂量见表2。
表2 诱导排卵激素具体剂量
体型品种 | 大型 | 中型 | 小型
HCG（地方品种） | 800IU | 700IU | 600IU
HCG（培育品种） | 700IU | 600IU | 500IU
LH（地方品种） | 100IU | 85IU | 70IU
LH（培育品种） | 80IU | 65IU | 50IU
促排3号（地方品种） | 20ug | 18ug | 16ug
促排3号（培育品种） | 16ug | 14ug | 10ug