ICS 备案号：16721-2005 DB51/T470-2005 四川省地方标准 鸡蛋中磺胺二甲嘧啶残留检测方法 酶联免疫吸附测定法（ELISA） Determination of Sulfamethazine Residues in Eggs by Enzyme-linked Immunosorbent Assay 2005-03-03发布 2005-06-01实施 四川省质量技术监督局发布 前言 本标准为规范四川省无公害畜产品鸡蛋的生产和销售过程，保障人体健康，维护生产者、经营者和消费者的合法权益，在参考国内外相关标准的基础上制定。 本标准按照GB/T 1.1—2000《标准的结构和编写规则》及GB/T 1.2—2002《标准中规范性技术要求内容的确定方法》编制。 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口，由四川省质量技术监督局批准，由四川省兽药残留监控中心负责起草。 本标准起草人：谢青、彭莉、岳秀英、高岚、熊浩山。 1 范围 本标准规定了鸡蛋中磺胺二甲嘧啶残留量检测的制样方法及酶联免疫吸附测定法。 本标准适用于鸡蛋中磺胺二甲嘧啶残留量的快速筛选检测，检出限为1.2 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后修改单或修订版不适用，但鼓励使用最新版本。 GB/T 1.1-2000 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则 GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要或原理 鸡蛋中残留的磺胺二甲嘧啶用乙腈-水溶液提取，经乙酸乙酯萃取、异辛烷除脂后采用ELISA方法测定。 其基本原理为抗原-抗体反应：酶标板微孔预包被偶联抗原，样品中的磺胺二甲嘧啶与酶标抗原竞争特异性抗体结合位点，通过洗涤去除未结合物。 加入底物液后，结合在板上的酶标物催化底物显色，在450 nm处测定吸光度值，吸光度与样品中磺胺二甲嘧啶浓度呈反比。 4 仪器 4.1 酶标仪（配450 nm滤光片） 4.2 离心机 4.3 分析天平（感量0.0001 g） 4.4 天平（感量0.01 g） 4.5 微量移液器（单道20 μL、50 μL、100 μL、1000 μL；多道50–250 μL） 4.6 氮吹仪 5 试剂和材料 除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的二级水。 5.1 乙腈 5.2 乙酸乙酯 5.3 异辛烷 5.4 磺胺二甲嘧啶试剂盒（标准溶液0、1、3、9、27、81 μg/L） 5.4.1 酶标板（8条×12孔，包被偶联抗原） 5.4.2 酶标记物（过氧化物酶标记） 5.4.3 磺胺二甲嘧啶（SM2）抗体 5.4.4 底物液A 5.4.5 底物液B 5.4.6 浓缩洗涤液 5.4.7 浓缩复溶液 5.4.8 终止溶液 6 测定步骤 6.1 试样制备 取匀浆后的供试样品作为供试试样。 6.2 试样提取与纯化 称取（5±0.01）g样品于50 mL离心管中，加入乙腈-水溶液（84:16）15 mL，剧烈振荡10 min。 15℃、3000 r/min离心10 min，取3 mL上清液，加2 mL水及3 mL乙酸乙酯振荡10 min后静置分层。 取上层液转入离心管中氮气吹干，用1 mL复溶液溶解残留物，加入1 mL异辛烷振荡5 min。 15℃、3000 r/min离心5 min，去除上层液，取50 μL水相用于ELISA测定。 6.3 试样测定（20℃～24℃） 6.3.1 试剂盒室温平衡30 min以上，试剂使用前摇匀。 6.3.2 加入50 μL标准溶液或样品溶液至微孔中，再加入50 μL抗体工作液，37℃反应30 min。 6.3.3 倒出孔内液体，拍干，每孔加入洗涤液250 μL，静置30 s后倒出液体。