65.020.99 B19 四川省地方标准 DB51/T 868—2009 马铃薯卷叶病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯A病毒检验鉴定技术规程 Inspection and Identification Rules of Potato Leafroll Virus, Potato Virus Y and Potato Virus A 2009-03-05发布 2009-03-10实施 四川省质量技术监督局发布 前言 本标准附录A、附录B、附录C、附录D、附录E和附录F为规范性附录，附录G为资料性附录。 本标准由四川省农业厅提出并归口。 起草单位：四川省农业厅植物检疫站、四川出入境检验检疫局。 主要起草人：宁红、郭迪金、张洪峰、孟兴、谢成伦、黄玲、熊玉兰。 1 范围 本标准规定了马铃薯卷叶病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯A病毒的实验室检验、检测和鉴定技术要求。 本标准适用于马铃薯块茎、种苗及其他茄科植物感染上述三种病毒的检验、检测和鉴定。 2 规范性引用文件 GB 7331—2003 马铃薯种薯产地检疫规程。 3 术语和定义 3.1 马铃薯卷叶病毒（PLRV） 属黄症病毒科，马铃薯卷叶病毒属。病毒粒体呈球状，直径约25nm，为等轴对称病毒，致死温度70℃，稀释限点约10^-4，引起马铃薯卷叶病。 3.2 马铃薯Y病毒（PVY） 属马铃薯Y病毒科，马铃薯Y病毒属。病毒粒体呈弯曲长杆状，为单链RNA病毒，长度约730nm，致死温度52℃～62℃，稀释限点10^-3～10^-2，引起马铃薯重花叶病，是马铃薯退化的重要病毒之一。 3.3 马铃薯A病毒（PVA） 属马铃薯Y病毒科，马铃薯Y病毒属。病毒粒体呈弯曲长杆状，为单链RNA病毒，长度约730nm，致死温度44℃～52℃，稀释限点约2.5×10^-2～10，引起马铃薯轻花叶病。 3.4 目标条带（target band） 通过RT-PCR扩增后获得的与引物设计长度一致的特异性扩增条带。目标条带的存在是判断病毒存在的重要依据。 4 原理 马铃薯卷叶病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯A病毒主要通过蚜虫和农事操作传播，远距离传播主要依赖人为引种及商品流通。带毒块茎和种苗是主要传播载体。本标准采用免疫学和分子生物学方法对病毒进行检测，并依据判定标准进行鉴定。 5 试剂与材料 除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水、去离子水或同等纯度水。 5.1 ELISA检验试剂 5.1.1 捕捉抗体（Capture antibody） PLRV、PVY、PVA捕捉抗体均为对应免疫球蛋白，按市售产品说明稀释后于4℃保存备用。 5.1.2 酶标抗体（Enzyme conjugate） PLRV酶标抗体为碱性磷酸酶标记的免疫球蛋白抗体；PVY酶标抗体为鼠抗PVY探针抗体与碱性磷酸酶标记抗体等组成（后续内容缺失）。