ICS65.120 B20 DB21
辽宁省地方标准
DB21/T3278—2020
饲用微生物制剂中凝结芽孢杆菌的检测方法
Method for determination of Bacillus coagulans in feeds
2020-07-30发布
2020-08-30实施
辽宁省市场监督管理局发布

前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则编写。本标准由辽宁省农业农村厅提出并归口管理。本标准起草单位：大连三仪动物药品有限公司、江苏三仪生物工程有限公司、大连工业大学、开原市检验检测认证服务中心。本标准主要起草人包括：江国托、刘艳、单春乔、李娟、林洋、王效禹等。本标准发布实施后，如有问题和意见建议，可通过电话或来函反馈。归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），电话024-23447862；起草单位通讯地址：辽宁省大连市甘井子区营城子镇营旭路9号，电话0411-66886298。

1 范围
本标准规定了饲用微生物制剂中凝结芽孢杆菌的检测方法，适用于含有益微生物凝结芽孢杆菌的饲料添加剂中该菌的检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡注日期的引用文件，仅注日期版本适用。凡不注日期的引用文件，其最新版本适用。
GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T8170 数值修约规则与极限数值表示和判定
GB/T14699.1 饲料采样
GB/T20195 动物饲料试样的制备

3 培养基和材料
实验用水：按GB/T6682要求
0.85%灭菌生理盐水
改良营养琼脂培养基（NA，见附录A）
革兰氏染色液（见附录A）
细菌生化鉴定试剂盒
细菌基因组DNA提取试剂盒
标准菌株：凝结芽孢杆菌CICC21736

4 主要仪器设备和玻璃器皿
恒温培养箱（50℃±1℃）
恒温水浴锅（80℃±1℃）
普通冰箱
天平（0.1g、0.01g、0.0001g）
振荡器或涡旋混合器
显微镜（1000倍）
pH计（精度0.1）
无菌培养皿（Φ90mm）、锥形瓶、涂布棒、量筒（250mL）
PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统
移液器（10μL、100μL、1000μL、10000μL）

5 检验程序
取样25.0mL样品加入225mL无菌生理盐水，进行10倍系列稀释。选择2个连续适宜稀释度，每个稀释度设置3个平行样，取0.1mL涂布培养。对菌落进行计数，并挑选典型菌落进行形态学鉴定。进一步进行生化鉴定与PCR鉴定，最终出具检测报告。