本标准适用于橄榄油中蜡含量的测定。本标准可用于鉴别机榨橄榄油与油橄榄果渣油。 GB/T 22501-2008 动植物油脂 橄榄油中蜡含量的测定 气相色谱法 GB/T22501-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67. 200. 10
中华人民共和国国家标准
GB/T 22501—2008
动植物油脂
橄榄油中蜡含量的测定
气相色谱法
Animal and yegetable fats and oils-Determination of wax content of olive oils by gas chromatography2008-11-04发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-01-20 实施
中华人民共和
国家标准
动植物油脂橄榄油中蜡含氧的测定气相色谱法
GB/T225012008
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GB/T22501—2008
本标准等同采用国际橄榄油现事会的CO1/T.20/Doc，nu.18/Rcv.2/2003《分析方法利用毛细管柱气相色谱测定蜡含最\(英文版）。本标准的内窄和结构与COI/T.20/Doc，no.18/Rcv.2/2003-致，做了下列编辑性修改：为了便于使用，对条款编排顺序进行厂调整。将原一级条标题4.5.1改为4.6，其后原一级条标题4.6.4.7顺延为4.7、4.8。间时为新一级条标题4.8下增加二级条标题4.8.1、4.8.2；“本方法”一词改为“本标准”；增加第3章仪器导语“常用实验仪器及以下仪器”；增加第4章试剂导语“除另有说明,水为蒸馏水或当纯度的水”；增加第7章精密度；
将“典型橄榄油蜡馏分气相色谱图”编排为附录A，将“原附录”编排为附录B,将“方法的精密度\编排为附录C。
本标准的附录A、附录B附录 C均为资料性附录。木标准出国家粮食局提出。
本标准由全国粮油标推化技术委员会归口。本标准起草单位：国家粮食局科学研究院。本标准主要起草人：张蕊、薛雅琳.赵会义。1范围
动植物油脂
橄榄油中蜡含量的测定
气相色谱法
GB/T 22501—2008
本标推适用于橄榄油中蜡含量的测定。本标准可用于鉴别机榨橄榄油与油橄榄果油2原理
将适当的内标物添加至油巾，然后用水合硅胶柱色谱进行分离。实验条件下回收洗脱馏分(其比甘三醋极性略低），然后使用毛细管柱气相色谱进行分析。3仪器
常用实验仪器及以下仪器。
3.1锥形瓶:25mL。
3.2玻璃柱:内径15.0 mm，长 30 cm~40 cm，配有合适的旋塞。3.3气相色谱仪：可装毛细管柱，具可进行柱头进样的进样系统。3.3.1可程序升温的柱箱。
3.3.2用于柱头进样的冷柱头进样器。3.3.3火焰离子化检测器和变流放大器。3.3.4记录积分仪：与变流放大器一起使用(3.3.3），响应时间小于1s，纸速可变。注 1: 也可使用计算机处理系统,气相色谱数据通过计算机输人到该系统中。3.3.5毛细管柱：玻璃或融熔不英，长8m~12m，内径0.25mm~0.32mm，固定液涂层厚0.10μm0.30μm.
注 2：可选用符合本标准色谱分离要求的市售固定被,如 SF52,SE54 等。3.4微量注射器;10μl.,硬化针头。3.5电动振荡器。
3.6旋转蒸发器。
3.7马福炉。
3.8分析天平分度值0.0001g。
3.9带规实验室玻璃器具。
4试剂
除另有说明,水为蒸馏水或相当纯度的水。4. 1 硅胶:粒径 60 μm-~200 μm。将硅胶放人 500 C的马辐炉中,灼烧至少 4 h。冷却,加入相当硅胶量2%的水。摇动混勾。使用前于暗处放置至少12h。4.2正凸烷：色谱纯，
查告:燕气可燃。应远离热頭、火星,明火。确保盘装的趣盖严。使用过程中要做好通风，防止蒸气积彝,移走可燃物品，例如,不是用防火材料制成的加热器或电器设备。正己烷有毒，吸入可能危害神经系统细胞。应避免吸入挥发气体。如必要，使用适当的呼吸设备。避免接触眼瞻和皮肤。4.3乙醚：色谱纯。
替告:离度易燃,中等毒性。刺激皮肤,吸入有害。可损伤眼膦。危害效应有可能滞后。它能形成爆炸性的过氧化1
GB/T22501—-2008
物。兼气可燃。应远离热源、火虽、明火。确保感装的瓶盖严。使用过程中要做好通风．防止蒸气积，移走可燃物品，例如，不是用防火材料制成的加热器或电器设备。不要彻底蒸干或接近蒸干。加水或适当的还原剂可以减少过氧化物的形成。获止饮用。避免吸入挥发气体。避免长时间或反复接触皮肤。4.4正庚烧：色谱纯。
警告：品燃，酸入有害。应远离热源火型，明火。确保盛装的瓶盖严。在使用过程中要做好通风。避免长时间吸入挥发气体。避免长时间或反复接触皮肤。4.5十二烷醇花生酸酯标准溶液：0.1%（质量浓度）已烧溶液（内标物）。注3：也可选用软脂酸十穴烷醇酯或硬脂酸「四烷醇酶。4.6苏丹1（1-苯基偶氮苯-2-萘酚）。4.7载气：氢气或氮气,纯净，用于气相色谱。蓄告：氢气。高压下高度易燃，远离热源、火显，明火或不是用防火材料的成的电器设备。确保不使用时，气瓶阔关闭，。使用时，一定要用减压闻。打开气瓶阀前，释放减压阔的压力，当打开气阀时不得站在气瓶出口前。在使用过程中要做好通风。不得特氢气从一个气瓶导入另一个气瓶。不得在气瓶重混合气体。确保气瓶不被打翻。气瓶要远离阳光和热源，放置在无瘤性的环境。不得使用已损坏或未贴标签的气瓶，氧气。高压气体。它减少可供呼假氧气的数量。确保气糖关闭。使用过程中要做好通风。没有良好的通风,不得进入放置区域、要使用减压间。打开气瓶阀前,释放减压的压力。不得将氛气以·个气瓶导入另一个气瓶。不得在气瓶里氓合气体。确保气瓶不被打翻。当打开气瓶阀时，不得站在气瓶出口前。气瓶要远离阳光和热题。放置在无扇蚀的环境。禁止吸入，只用于工业用途。4. 8辅助气,
4.8.1氢气；纯净，用丁气相色谱。4.8.2窄气：纯净，用于气相色谱。警告：空气高压气体。由于空气中大部分有机化合物的自燃温度在高压下相当的低,鼻燃物存在时使用要小心。不使用时确保气瓶关闭。要使用减压阀。打开气瓶阀前，释故减压阀的压力。当打开气瓶阀时，不得站在气瓶出口前。不得将气体从一个气瓶导入另一个气瓶，不得在气瓶里混合气体。确保气瓶不被打翻。瓶要远离阳光和热源。放在无腐蚀的环境里。不得使用已损坏或未贴标签的气短，空气只用于工业用途，不得用于呼吸或用作呼吸设备。5操作步骤
5.1试样液制备
闻正已烷（1.2)中加入15硅胶(4.1)制成悬浮液，然后转移玻璃柱中(3.2)自然沉降。倍助电动振荡器（3.5）使其彻底证降，使色谱柱更加均匀。用30ml.正已烷淋洗除去杂质。准确称量500mg样品，加到25mL锥形瓶（3.1)中，加入适量的必标物（4.5）。加人内标物的量依据预计蜡的含量，如：橄榄油样品中加人0.1mg于一烷醇花生酸酯，油橄榄果渣油样品中加人0.25mg~-0, 50 mg十一烷醇花生酸酯。
用2mL正已烷(4.2)溶解制备好的样品并转移至层析杜中，再用2tnL正已烷（1.2)洗涤锥彤瓶洗涤液并人层析柱中：
效掉溶剂至吸收剂面上1 mm处，再用70 ml.正己烷除去所有无然存在的正构烷烃。用180 mL正已烷/乙避混合液（9￥1)开始进行色谱洗脱，流速人药为每10515滴，收集馏出液，释品洗脱时环境温度应保持在22 ℃士1℃。
注4：正已烷/醚(99：1)混合液应每天现配。注5：可将100tL的1%苏丹I染料的洗脱剂济液加到样品被中，有观观察蜡质是古完全洗脱。染料的保留值处于蜡和三酯之间，当染料到达色谱柱的底部时，应停止洗脱，此时所有的蜡已经洗脱出来。用旋转蒸发器（3.6)浓缩上述分离得到的馏出羧，直至落剂儿乎除去。在弱的氮气流中除去最后剩余的2ml.溶剂，再加人2mL~4mL正庆烧。5.2测定
5.2.1仪器准备
将毛细管柱装到色谱仪（3.3)上，杜逃口连接到柱头进样系统，柱出口连接到检测器。检查气相色2
谱仪（检查气路、检测器，记录仪等的性能）GB/T 22501—2008
如果色谱杜是第次使用，建议老化色谱柱。让小的气流通过色谱柱，开启气相色谱仪，大约用4 h慢慢升温至350℃
在此温度至少保持2h，然后调节仪器至操作条件［调节气流，点燃氢火熔，连接电子记录仪（3.3.1），调节柱箱温度，调节检测器等二。记录高于两倍分析灵敏度以上的信号。基线应是直线，没有任何蜂，不应有任何漂移。
负的基线漂移表明柱了连接有误；正的基线源移表明柱了没有老化完全。5.2.2色谱参考条件
5,2.2. 1色谱柱：见3.3.5。
5.2.2,2 温度
柱温：采用程序升温方式。
i*240 ℃ 3C/m*325 C(6 min)
20 C/min-340 C(10 min)
20C/in
80 'C(l min)-
-检测器温度：350%。
5.2.2.3载气：氧气或氢气，选择气休最佳的线性速度（参见附录B)。5.2.2.4检测器：见3.3.3，
5.2.2.5进样鼠：1正庚烷溶液
5.2.2.6可依据毛细管柱和气相色谱仪的特性对上述条件避行适当调整，使所有的蜡得到分离，获得满意的峰分离,参见图 A. 1。内标物的保留时间应在 18 min士3 min,最典型蜡的峰应超过满量程的60%。
确定色谱峰的积分参数，以获得正确的峰面积。注6：由于终温商，充许正漂移，但不能超过满量程的10%。5.2.3色谱分析
用10μI.微量进样器吸取1μL的溶液；向后抽动针芯至针头抽空。将针插入进样系统，1s～2s后快速注人：大约5s,轻轻地抽出注射针头。蜡完全出峰后，停止记录，
基线应满足上述条件。
5.2、4色谱峰鉴定
将各个峰的保留时间与同等分析条件下已知蜡混合物的保留时问进行比较鉴定图A.1给出了初榨橄概油中蜡的色谱图：6结果计算
通过积分仪，测相应的内标物及 C ~C4r脂肪族酯的峰面积。蜡的含量接式(1)计算：
X- 4 m, 1 000
式中：
X蜡的含量，单位为毫克短千克（mg/kg)；A
蜡的峰面积，单位为平方毫米（mm\）；m.
加人的内标物的质量，单位为毫克（mg)；A. F
内标物的峰面积,单位为乎方毫米（mm）；m
测试样品的质量，单位为克（g)。1)
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结果为[a-~r的蜡(注 7)含量的总和,单位为躯克每了克（mg/kg)。结果保留位小数
注\：依据附录A提供的橄榄泊中蜡的特征色荫图，对C~C偶碳数醋的组分进行定望。如C：酯色讲峰起分裂的,推样分析箔橄榄果渣油的蜡馏分,对其进行定性。油橄果渣油中（。峰非常明显，可以被鉴别出来，7精密度
7.1实验室间比对试验
本方法实验室间测试精密度的详情参见附录C。该实验室间比对测定结果间能不适用于附录（以外的其他含量范用和品种。
7. 2要复性
在同一实验室，由同一操作者，使用相同的仪器设备，按相同的测定方法，在狼短的时间间隔内，对间一被测样品进行两次测定,获得两个独立的测定结果。这两个结果的绝对差值超过重复性限值？的情沉不应大丁5%。
7.3再现性
在不同的实验室中，由不同的操作人员，使用不同的仪器设备，使用间一方法对同一被测样品，获得的两个独立定结果之间的绝对差值超过再现性限值尺的情说不应大于坏。I. S. -
30. 00- 0
十二烷醇花生酸酯：
粘酯：
-Co酯：
Caz南;
Ca酯;
5-C酶;
葡醇酯和三鳍醇。
附录A
(资料性附录）
典型橄榄油蜡馏分气相色谱图免费标准bzxz.net
往：在角醇酯出峰后，气相色谱图应不再有明显的其他峰（甘二酯)山现。图A.1橄榄油蜡馏分气相色谱图范例30
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附录B
(资料性附录）
测定气体线性速度
调节气相色谱仪至正常操作条件下，进1L-~3μL中烷（或丙烧）。测定气体从进样至出峰通过色谱柱的时间（）。
线速度由公式I./m算出，单位为埋米每秒（cm/s）。I.为柱长度，单位为厘米（cm）.tm为测定的时间，单位为秒(s)。
附录C
（资料性附录）
联合试验结果
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1999年由执行秘阝安排国际橄概油事会(100C)认可的19 家实验室参与协同实验。实验室来自八个国家。
测试五个样品：
A：特级初榨橄榄油；
B：初榨橄榄油十精炼葵花籽油！C：初粹橄榄油十精炼橄榄果渣油;D：初榨橄榄油+精炼大豆油+精炼葵花籽油；E：精炼橄榄油-精炼橄榄果渣油十精炼大豆油-初榨油橄榄灯油。由 100OX,执行秘书组织协同试验结果,按 JS0 5725 测定方法和结果的准确度小给定的原则进行统计，应用科克伦检验和格拉布斯检验对实验室每个测定结果(双实验a和b)和每个样品的实验结果进行离散值检验。统计结果见表C.1。表 C,1联合试验结果
参加的实验室数量
超差大的实验室数
蜡含蛋平均值/（mg/kg）
重复性限 / (mg/kg)
重复性标准偏差 S,/ (mg/kg)
重复性变异系数 RSD./ %
再现性限 R / (rng/kg)
再现性标推偏差S/（mg/kg）
再现性变异系激 RSD,/ %
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参考文献
[1Is0 5725-1:1994Accuracy (trueness and precision) of mcasurcmentmethods and rcsultsPart l: Gencral principles and definitions[2] 1SO 5725-2: 1994Ar:curacy (truc:ncss anid prccision) of mcasuremcnt mcthods and results-Part 2: Basic method for the deterinination of repeatability and reproducibilily of a standardmcasuremcnt mcthod
[31 1S(0 5725-5: 1998 Accuracy (trueness and precision) ol measurement methods and resultsPart 5: Alternative methods fnr the deteimination cof the Piecisicn of a standard ncasurementtrir:ihod
.4J 1S0 5725 6: 1994 Accuracy (trueness and precisiun) of measuremenl inethods and resulis-Part 6: Use in practice of accuracy values版权专有侵权必究
书：155065·1-35496
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