GB/T 20749-2006
基本信息
标准号： GB/T 20749-2006
中文名称：牛尿中β-雌二醇残留量的测定 气相色谱-负化学电离质谱法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
发布日期：2007-03-26
实施日期：2007-03-01
出版语种：简体中文
下载格式：.rar.pdf
下载大小：113709
相关标签： 雌二醇 残留量 测定 相色谱 化学 电离 质谱法
标准分类号
标准ICS号：食品技术>>67.050食品试验和分析的一般方法
中标分类号：食品>>食品综合>>X04基础标准与通用方法
关联标准
出版信息
页数：12页
标准价格：10.0 元
计划单号：20051862-T-326
相关单位信息
首发日期：2006-12-31
起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、山东出入境检验检疫局
归口单位：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
发布部门：国家标准化管理委员会
主管部门：国家标准化管理委员会
标准简介
本标准规定了牛尿中β-雌二醇残留量气相色谱-负化学电离质谱测定方法。本标准适用于牛尿中β-雌二醇残留量的测定。 GB/T 20749-2006 牛尿中β-雌二醇残留量的测定 气相色谱-负化学电离质谱法 GB/T20749-2006 标准下载解压密码：www.bzxz.net
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标准内容
ICS 67. 050
中华人民共和国国家标准
GB/T20749—2006
牛尿中β-雌二醇残留量的测定wwW.bzxz.Net
气相色谱-负化学电离质谱法
Method for determination of β-estradiol residues in bovine urine-gas chromatography-negative-ion chemical ionizationmass spectrometry method
2006-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局数码防伪
中国国家标准化管理委员会
2007-03-01实施
本标准的附录 A 和附录 B 为资料性附录。本标准由中华人民其和国秦阜岛出人境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家压量监督检验检疫总局归口。CB/T 20749—2006
标雅起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局，中华人民共和国山东出人境检验检疫局
本标雄士要起草人：庞国芳、王建华，李杰、刘靖靖、发。本标准察首次发布的国家标准。范围
牛尿中β-雌二醇残留量的测定
气相色谱-负化学电离质谱法
本标挥观定了牛尿中3-雌一酵残留量气也谱-负化学电离质萨测定方法小标准适牛尿中3州一醇残南量的测楚。本标准的方法检山限：0.25μg12规范性引用文件
GB/T 20749--2006
下列文件中的系款逆过本标准的引用前成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括期误的内筹或修订版均不适用本标准·然前·鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否河使用这些文件的最新版本。凡不洋口期的引用文件，其最新版本适用于本标准，GBT6371测虽方法与结果的谁确度（正确度与精密度）第！部分：总则与定义((:13/r 637. 1-—2001.IS() 5723 1:1994,IT)G/T379.2测量方法与结渠的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测力法重复性与再现性的基本方法(GRT5370.2—2004,15057:5-2:1991.1DT）(13/T6682分折实验室用水规格到试验方法(GH/16682—1992.ncq1S0)3696：1987)3原理
牛尿中雌一萨经过酶水解和固相萃取柱净化后、经酰化衍生化后，用气相色谱-负化学电离质谱选择密子临测漠式测定·内标法是量。4试剂和材料
降另有规定外，试剂均为分析纯：水为（HT6582靓定的-级水，4.1β简称酸海和芳基硫酸凸酶：t[elixpnma1ia.含3箱糖立酸酶100)000单位/ml.，硫酸酯姆1 a00单信/mI..
4.2甲醇:色谱纯。
4.3四」基中隧(MTIBE):色谱纯
4.4乙胶乙酯：色谱纯。
4.5 正已烷:色谱纯:
4.6吡啶：色谱纯。
4.7另辛烷：色谱纯。
4.8衔牛化试剂：五氟求甲氯，车避光、防潮怀境冷冻鳍藏4.9碳酸氨珊，
水乙酸钠。
无水酸钠：
[醇+水浒液(1+1):10 ml. 归醇(-.2)利 10% ml.水充分混合4.13辟一西」基中醚落波（1+6）：取20mL的中醇（4.2)和18=1.四甲醛（4.3)充分混。4.14乙酸钠缓冲被（pI[-.2):称取43g水乙酸钠(1. 10)水济解.加人25.2冰乙酸用水定穿B/T 20749—2006
至 1 000 mL,有效期 6 个月
4.15f-燥乙酸乙酯：在密封试管中加人500mg无水硫酸钠和20ml.乙酸乙酯，振荡混合约30min后,2 000 r/min 离心 10 min.
4.16乙酸乙酯一吡啶（90+J0）：将10ml.吡啶和00mL千燥的乙酸乙酯混含，室温保存：-周内使用。
4. 17碳酸氢钾(KHC();)溶液;0. 5 ml/L.。称 5 g KHCO于 100 ml.容量瓶中,用水定穿至刻度。一周内有效
4.18()asisHIL.l 固相萃取托:60 mg.3 mL或相当者，使用前分别依饮用3 ml,四」基中醚(1.3），3mL甲醇(4.2).3 m「.纯水活化·保持柱体湿润。4.19标准物质：3-雌二醇，纯度299%。4.20内标标准物质：8-雌二醇2.4,16,16-D4.纯度299%。4.213-姚二醇标准溶液;准确称鼠10 mg标推物分别于100 ml.容量瓶中,用甲醇(4,2)定容至刻度，浓度10(μg/mL,储备液些存于-20,有效期-·年。再以中醇稀释成适用浓度的溶液,保存于4冰箱中，
4.22内标标准溶液:准确称量 10 mg标推物分别于 100 ml.容量瓶巾,用中醇(4. 2)定容至刻度，浓度100g/mL，储备液贮存于一20℃，有效期一年。再以甲醇稀释成适用浓度率液，保存于4:冰箱中，可使用一个月，
4.23标准L作溶液：将9-摊二醇标准溶液（1,21)和3雌二醇14(1.22)混合，按照7.3步骤衍牛化后备用，
5夜器
5.1气相色谱-质谱仪：配有负化学源5. 2离心管:5 ml 和 10 ml.,具寒。5.3移液器:20 .--100 μ1.,200 μ.1 000 μ1.-5.4分析天平：感量0.1mg和0.01R5.5离心机
5.6涡旋混勾器。
5.7氮气液缔仪，
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
取有代表性样品，制战实验室样品。试样分为两份，置于样品瓶中，密封，并做上标记6.2试样保存
将试样置于2℃～8℃下保存。
7测定步
7.1提取
准确移取 2. 0 mJ. 牛尿,置于 5 mL 具塞离心管4.加人 2 rmL 乙酸钠缓冲液(4,14),20 μI. 3-葡糖苷酸酶利芳基硫酸苷酶(4.1)、100μI内标溶液(4.22)于每个样品中，混勾，于37℃过夜。7.2净化
将提坡液(7.1)移人下接(asisHLH柱（4、18)的忙液器中，溶液以:1rmnl./min的流速通过（asisHL.B柱,待溶波完全流出后,用中醇水(4.12)洗柱,邦去全部淋出液。最后用 6 mI. 甲醇+四丁基甲醛(4.13)洗脱，收集洗脱液于10 ml,具案离心管(5.2).用氧气浓缩仪(5.6)恢至约剩余500μI.溶2
GH/T 20749—2006
液：加人2义2ml异辛烧于[述Im离心管中捉两次，以2r/min离心min，取上层液体于3ml具塞离心管（5.2).于49℃下氛气吹17.3衍生化
在上述5ml.具案试管中侬次加人83ul.干燥乙酸乙醋（4.15），500μl.乙酸乙酯+吡吡（4.1i)，20μl.五氟米甲既氯（4.8）.混，60r改置20min后，用氮气浓缩仪收F，加入592μl.0.5molLKHC().济液（4.17)，涡旋振菌，待溶液沿清后，准确加人0.4l异辛烷.混合提取，静置，收工清液逃行测定.
7.4测定
7. 4. 1 气相色谱-质谱测定条件色谱：11P-5Ms（30mx0.2=mmX0.25m）石英毛细曾柱或机当者：a）
载气：氢气纯度99,999片，
流速：初始流速1.0mL/min，保持5min.然后以1.0mL/min速度升至3ml/min；柱温：120℃保持2min，然后以15℃/min程序升温至250r:，再以5℃/min升温至300%保持d)
8 mitn:
进样量：1μL;
进样方式：无分流进样；
进样口温度：302℃：
接湿度：280℃*
负化学源：150，V：
离子源温度：150℃：
四极杆温度：196℃；
反应气，甲烷，纯度299.29%；
反应汽流量：2 nil./min;
选择离子监测，沈衣1。
表 1 选择离子监测表
临测离子(m/2
7.4.2定性测定
定性测定的依据为：
离子比六）
被诞样品色谱峰的保留时间与标准工作溶没柑一致：a
允许相对偏差（死）
h）所选择的离子均出既，被测样品的监测离子的相对牛度与标准上作溶液的相对丰度两之案不大于允许相对偏差(7. 4. 1) .7.4.3定量测定
配制系划标准工作溶液(4.23)分别进样，仪端测定3-解二醇以奶/：660)为定量离了.内标3雌二醇以6为宗卑离子，以瑾面积比刘浓度制标准工作曲载，标准作出线内杯法对样品进定量群品溶液中待测物质的响值均应在仪器测定的线性范内，在上述色消条件下，邮二衍牛物李考保留时间约为 25 min，谁一醇和内标衔生物总离了流图和质谱图参见图A。图A.2.图 A. 3。7.5平行试验
以工步骤，对间试样进行乎行试验测定。3
GB/T 20749—2006
7. 6空白试验
除不称取试样外，均按工述步骤近行。8结果计算
结果按式(1)计算
武中：
试样中被测组分残留量，单位为微克每升(μg/.)：从标准工作曲绒上得到的被测组分游波浓度，单位为纳克每毫升（ng/mI）：样品溶液定穿体积,单位为毫升(mI.);Y
样品溶液所代表试样的质量.单位为克（）。注：计算结果应扣除空色伯。
9精密度
本标准的精密度数据足按照GB/T6379.1和（:R/T6.8S79.2的现定确定的，其重复性和再现性的俏以95光的间度来计算
9.1画套性
在重复性条件下，牛尿中雌二醇的含量在0.25g/1.~-2.0g/1.范固内，获得的两次独立测试结果的绝对差信不超过重复性限（r），本标推的重复性限按式（2)计算：r=0.155m0.(191
式中：
雌二醇测定值的浓度，单位为微克海升（g/I)：如果差值超过重复性限，应舍弃试愉结果并重新完成次单个试验的测定。9.2再现性
在冉现性条件下,牛尿雌醇的含最在0药I~2.0范围内,获得的纳次独文测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，本标准的再现性限按式(3)计算：IgR —1.1a2lgm0.885
式中：
…雌一醇测定值的涨度，单位为克每。（3
附录A
（资料性附录）
雌二醇和内标衍生物总离子流图和质谱图A. 1 雌二醇和内标衍生物总离了流图,见图 A.1。Azuncance
bo0Loo
5GG000
150000
400000
Hiaty 0U
250000
280000
100000
25.01 25. 5th 26.< 26.50 27.00 27.50 28.00 28. 50 T/min图A.1
雌二醇和内标衍生物总离子流图A,2性二醇标准物质衍牛物质谱图,见 A.2。Abmmdance
2B0000
240005
120000
13414100
can 2740 (26. 044 ITum) 4. [0 (-278H)(-)660
GB/T 20749--2006
19624030036
416490548599
702740796
50 u1 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800图A.2
雌二醇标准物质衍生物质谱图
A,3[二醇 1)4 标难物质衍生物质谱率，见图 A. 3。Atundame
scan 2732 (25. 977 miz) - 5, 1) (-2653) (-)664
01 71 413 111 24'273 . 343 489 21.495 354 690 11701742 781240.
50 100 150 200 250 301 50 400 450 500 550 600 650 700 750图 A,3雌二醇 D4标准物质衍生物质谱图5
GB/T20749-—2006
（瓷料性附录）
回收率
本力法中雌二醇淤加浓度及其平均回收率的试验数据：在0.25/1.时，回收率为100，0%：在0.5#g/1.时，向收率为71.7%！在1.0/时，间收率为190.7；
2.0时，收率86.0
GB/T 20749-2006
中华人民共和
回家标推
牛尿中雌二醇残留量的测定
气相色谱-负化学电商质谱法
GH/T 20745: 2006
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外三甲河北街16号
邮政编码：100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版杜泰皇岛印刷厂印刷各新华书站经销
率 88×1234
2007年3月第一版
印张 0.73
字数 12 千字
2007 年 3 月第--次印刷
书号:1550661 28928
如有印装差错
定价10.00元
由本社发行中心调换
侵权必究
版权专有
举报电话：（010)68533533
90026020
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中华人民共和国国家标准
GB/T20749—2006
牛尿中β-雌二醇残留量的测定wwW.bzxz.Net
气相色谱-负化学电离质谱法
Method for determination of β-estradiol residues in bovine urine-gas chromatography-negative-ion chemical ionizationmass spectrometry method
2006-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局数码防伪
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2007-03-01实施
本标准的附录 A 和附录 B 为资料性附录。本标准由中华人民其和国秦阜岛出人境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家压量监督检验检疫总局归口。CB/T 20749—2006
标雅起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局，中华人民共和国山东出人境检验检疫局
本标雄士要起草人：庞国芳、王建华，李杰、刘靖靖、发。本标准察首次发布的国家标准。范围
牛尿中β-雌二醇残留量的测定
气相色谱-负化学电离质谱法
本标挥观定了牛尿中3-雌一酵残留量气也谱-负化学电离质萨测定方法小标准适牛尿中3州一醇残南量的测楚。本标准的方法检山限：0.25μg12规范性引用文件
GB/T 20749--2006
下列文件中的系款逆过本标准的引用前成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括期误的内筹或修订版均不适用本标准·然前·鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否河使用这些文件的最新版本。凡不洋口期的引用文件，其最新版本适用于本标准，GBT6371测虽方法与结果的谁确度（正确度与精密度）第！部分：总则与定义((:13/r 637. 1-—2001.IS() 5723 1:1994,IT)G/T379.2测量方法与结渠的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测力法重复性与再现性的基本方法(GRT5370.2—2004,15057:5-2:1991.1DT）(13/T6682分折实验室用水规格到试验方法(GH/16682—1992.ncq1S0)3696：1987)3原理
牛尿中雌一萨经过酶水解和固相萃取柱净化后、经酰化衍生化后，用气相色谱-负化学电离质谱选择密子临测漠式测定·内标法是量。4试剂和材料
降另有规定外，试剂均为分析纯：水为（HT6582靓定的-级水，4.1β简称酸海和芳基硫酸凸酶：t[elixpnma1ia.含3箱糖立酸酶100)000单位/ml.，硫酸酯姆1 a00单信/mI..
4.2甲醇:色谱纯。
4.3四」基中隧(MTIBE):色谱纯
4.4乙胶乙酯：色谱纯。
4.5 正已烷:色谱纯:
4.6吡啶：色谱纯。
4.7另辛烷：色谱纯。
4.8衔牛化试剂：五氟求甲氯，车避光、防潮怀境冷冻鳍藏4.9碳酸氨珊，
水乙酸钠。
无水酸钠：
[醇+水浒液(1+1):10 ml. 归醇(-.2)利 10% ml.水充分混合4.13辟一西」基中醚落波（1+6）：取20mL的中醇（4.2)和18=1.四甲醛（4.3)充分混。4.14乙酸钠缓冲被（pI[-.2):称取43g水乙酸钠(1. 10)水济解.加人25.2冰乙酸用水定穿B/T 20749—2006
至 1 000 mL,有效期 6 个月
4.15f-燥乙酸乙酯：在密封试管中加人500mg无水硫酸钠和20ml.乙酸乙酯，振荡混合约30min后,2 000 r/min 离心 10 min.
4.16乙酸乙酯一吡啶（90+J0）：将10ml.吡啶和00mL千燥的乙酸乙酯混含，室温保存：-周内使用。
4. 17碳酸氢钾(KHC();)溶液;0. 5 ml/L.。称 5 g KHCO于 100 ml.容量瓶中,用水定穿至刻度。一周内有效
4.18()asisHIL.l 固相萃取托:60 mg.3 mL或相当者，使用前分别依饮用3 ml,四」基中醚(1.3），3mL甲醇(4.2).3 m「.纯水活化·保持柱体湿润。4.19标准物质：3-雌二醇，纯度299%。4.20内标标准物质：8-雌二醇2.4,16,16-D4.纯度299%。4.213-姚二醇标准溶液;准确称鼠10 mg标推物分别于100 ml.容量瓶中,用甲醇(4,2)定容至刻度，浓度10(μg/mL,储备液些存于-20,有效期-·年。再以中醇稀释成适用浓度的溶液,保存于4冰箱中，
4.22内标标准溶液:准确称量 10 mg标推物分别于 100 ml.容量瓶巾,用中醇(4. 2)定容至刻度，浓度100g/mL，储备液贮存于一20℃，有效期一年。再以甲醇稀释成适用浓度率液，保存于4:冰箱中，可使用一个月，
4.23标准L作溶液：将9-摊二醇标准溶液（1,21)和3雌二醇14(1.22)混合，按照7.3步骤衍牛化后备用，
5夜器
5.1气相色谱-质谱仪：配有负化学源5. 2离心管:5 ml 和 10 ml.,具寒。5.3移液器:20 .--100 μ1.,200 μ.1 000 μ1.-5.4分析天平：感量0.1mg和0.01R5.5离心机
5.6涡旋混勾器。
5.7氮气液缔仪，
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
取有代表性样品，制战实验室样品。试样分为两份，置于样品瓶中，密封，并做上标记6.2试样保存
将试样置于2℃～8℃下保存。
7测定步
7.1提取
准确移取 2. 0 mJ. 牛尿,置于 5 mL 具塞离心管4.加人 2 rmL 乙酸钠缓冲液(4,14),20 μI. 3-葡糖苷酸酶利芳基硫酸苷酶(4.1)、100μI内标溶液(4.22)于每个样品中，混勾，于37℃过夜。7.2净化
将提坡液(7.1)移人下接(asisHLH柱（4、18)的忙液器中，溶液以:1rmnl./min的流速通过（asisHL.B柱,待溶波完全流出后,用中醇水(4.12)洗柱,邦去全部淋出液。最后用 6 mI. 甲醇+四丁基甲醛(4.13)洗脱，收集洗脱液于10 ml,具案离心管(5.2).用氧气浓缩仪(5.6)恢至约剩余500μI.溶2
GH/T 20749—2006
液：加人2义2ml异辛烧于[述Im离心管中捉两次，以2r/min离心min，取上层液体于3ml具塞离心管（5.2).于49℃下氛气吹17.3衍生化
在上述5ml.具案试管中侬次加人83ul.干燥乙酸乙醋（4.15），500μl.乙酸乙酯+吡吡（4.1i)，20μl.五氟米甲既氯（4.8）.混，60r改置20min后，用氮气浓缩仪收F，加入592μl.0.5molLKHC().济液（4.17)，涡旋振菌，待溶液沿清后，准确加人0.4l异辛烷.混合提取，静置，收工清液逃行测定.
7.4测定
7. 4. 1 气相色谱-质谱测定条件色谱：11P-5Ms（30mx0.2=mmX0.25m）石英毛细曾柱或机当者：a）
载气：氢气纯度99,999片，
流速：初始流速1.0mL/min，保持5min.然后以1.0mL/min速度升至3ml/min；柱温：120℃保持2min，然后以15℃/min程序升温至250r:，再以5℃/min升温至300%保持d)
8 mitn:
进样量：1μL;
进样方式：无分流进样；
进样口温度：302℃：
接湿度：280℃*
负化学源：150，V：
离子源温度：150℃：
四极杆温度：196℃；
反应气，甲烷，纯度299.29%；
反应汽流量：2 nil./min;
选择离子监测，沈衣1。
表 1 选择离子监测表
临测离子(m/2
7.4.2定性测定
定性测定的依据为：
离子比六）
被诞样品色谱峰的保留时间与标准工作溶没柑一致：a
允许相对偏差（死）
h）所选择的离子均出既，被测样品的监测离子的相对牛度与标准上作溶液的相对丰度两之案不大于允许相对偏差(7. 4. 1) .7.4.3定量测定
配制系划标准工作溶液(4.23)分别进样，仪端测定3-解二醇以奶/：660)为定量离了.内标3雌二醇以6为宗卑离子，以瑾面积比刘浓度制标准工作曲载，标准作出线内杯法对样品进定量群品溶液中待测物质的响值均应在仪器测定的线性范内，在上述色消条件下，邮二衍牛物李考保留时间约为 25 min，谁一醇和内标衔生物总离了流图和质谱图参见图A。图A.2.图 A. 3。7.5平行试验
以工步骤，对间试样进行乎行试验测定。3
GB/T 20749—2006
7. 6空白试验
除不称取试样外，均按工述步骤近行。8结果计算
结果按式(1)计算
武中：
试样中被测组分残留量，单位为微克每升(μg/.)：从标准工作曲绒上得到的被测组分游波浓度，单位为纳克每毫升（ng/mI）：样品溶液定穿体积,单位为毫升(mI.);Y
样品溶液所代表试样的质量.单位为克（）。注：计算结果应扣除空色伯。
9精密度
本标准的精密度数据足按照GB/T6379.1和（:R/T6.8S79.2的现定确定的，其重复性和再现性的俏以95光的间度来计算
9.1画套性
在重复性条件下，牛尿中雌二醇的含量在0.25g/1.~-2.0g/1.范固内，获得的两次独立测试结果的绝对差信不超过重复性限（r），本标推的重复性限按式（2)计算：r=0.155m0.(191
式中：
雌二醇测定值的浓度，单位为微克海升（g/I)：如果差值超过重复性限，应舍弃试愉结果并重新完成次单个试验的测定。9.2再现性
在冉现性条件下,牛尿雌醇的含最在0药I~2.0范围内,获得的纳次独文测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，本标准的再现性限按式(3)计算：IgR —1.1a2lgm0.885
式中：
…雌一醇测定值的涨度，单位为克每。（3
附录A
（资料性附录）
雌二醇和内标衍生物总离子流图和质谱图A. 1 雌二醇和内标衍生物总离了流图,见图 A.1。Azuncance
bo0Loo
5GG000
150000
400000
Hiaty 0U
250000
280000
100000
25.01 25. 5th 26.< 26.50 27.00 27.50 28.00 28. 50 T/min图A.1
雌二醇和内标衍生物总离子流图A,2性二醇标准物质衍牛物质谱图,见 A.2。Abmmdance
2B0000
240005
120000
13414100
can 2740 (26. 044 ITum) 4. [0 (-278H)(-)660
GB/T 20749--2006
19624030036
416490548599
702740796
50 u1 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800图A.2
雌二醇标准物质衍生物质谱图
A,3[二醇 1)4 标难物质衍生物质谱率，见图 A. 3。Atundame
scan 2732 (25. 977 miz) - 5, 1) (-2653) (-)664
01 71 413 111 24'273 . 343 489 21.495 354 690 11701742 781240.
50 100 150 200 250 301 50 400 450 500 550 600 650 700 750图 A,3雌二醇 D4标准物质衍生物质谱图5
GB/T20749-—2006
（瓷料性附录）
回收率
本力法中雌二醇淤加浓度及其平均回收率的试验数据：在0.25/1.时，回收率为100，0%：在0.5#g/1.时，向收率为71.7%！在1.0/时，间收率为190.7；
2.0时，收率86.0
GB/T 20749-2006
中华人民共和
回家标推
牛尿中雌二醇残留量的测定
气相色谱-负化学电商质谱法
GH/T 20745: 2006
中国标准出版社出版发行
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2007年3月第一版
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2007 年 3 月第--次印刷
书号:1550661 28928
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