本标准规定了流行性乙型脑炎的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。为临床工作者及相关工作人员提供严格的参考标准。 WS 214-2008 流行性乙型脑炎诊断标准 WS214-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 11.020
备案号：25526—2009
中华人民共和国卫生行业标准
WS214—2008
代替WS214-2001
流行性乙型脑炎诊断标准
Diagnostic criteria for Japanese encephalitis2008-12-11发布
民卫生迎康站
蒙水都大
2009-06-15实施
中华入民共和国生部发布
根据《中华人民共和国传染病防治法》制定本标准，本标准代替并废止WS214—2001。本标准与WS214一2001相比主要变化如r下：增加了病原学、流行病学、鉴别诊断；—修改了实验室检查部分；
删除了处理原则。
本标准的附录A、附录B为规范性附录、附录（、附录D为资料性附录。本标准由卫生部传染病标准专业委员会提出。本标准由中华人民共和国卫生部批准WS 214—2008
本标准起草单位：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所.北京地坛医院，国疾病预防控制中心免疫规划中心、解放军302医院本标准主要起草人：梁国栋、李兴旺、陈园生、店青、赵敏、蔡皓东。1范压
流行性乙型脑炎诊断标准
本标准规定了流行性乙型脑炎的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。WS214--2008
本标准适用于全国各级医疗卫生机构及其上作人员对流行件型脑炎的诊断、报告。2犬语和定义
列术语和定义适用于本标准，
流行性乙型脑炎lapaneseencephalitis，i是由乙型脑炎病毒（Japaneseenccphalitisyiris，JEV，简称乙脑病毒）引起的，主要侵犯中枢神经系统的急性传染病，也称日本脑炎，简称乙脑，属白然疫源性病，主要经蚊媒传播，流行于夏秋香。
脑漠刺激征meningeal irritation sign炎症刺激脊髓神经根：山其支配的相应肌群所出现的一研防御反应性肌痉掌现象：主要表现为颈强直、克尼格征（Kernig'ssign）和布鲁辛斯基征（Brudzinski'ssign）阴件等，3诊断依据
3.1流行病学史
店住在（脑流行地区且在蚊虫生季节发病·或发病前25d内在蚊虫擎生季节曾去过乙脑流行地区。流行病学特征见附录D
3.2临床表现
3.2.1潜伏期
一般为10d～11d，可短至4d，长至21d3.2.2临床症状
急性起病，发热、头痛、喷射性呕吡，发热2d~3d后出现不司程度的意认障碍，单症患者可出现全身抽.强直性将挛或瘫痰等中枢神经症状，严重病例山现中枢性呼吸衰，3.2.3体征
浅反射消失、深反射亢进，脑膜刺激征和病理反射阳性、疼挛性瘫痪或去大脑强白，可伴有瞳孔大小改变、血压升高、心率减慢等颅内压升高体征。3.2.4临床分型
3.2.4.1轻型
发热，体温一般不超过39℃；头痛、吸吐，精神萎靡，神志清整，元抽搞·病程7d--103.2.4.2普通型
发热，体温39°℃C~40℃；烈头痛、喷射性呕吐、烦躁、嗜睡、昏戎浅昏迷，局部肌肉小灿搐，病程约2周。
3.2.4.3重型
发热，体温40C以上：剧烈头宿、喷射性呕啡，很快进人昏迷，反复抽摘，病程约3周，愈后可留有后遗症
ws 214—2008
3.2.4.4极重型
起病急骤，体温在1α~2d内工升至40%以上，反复或持续性强烈抽措，伴深昏迷，巡速出现脑疝及呼吸衰竭;病死密高，卒存者发生后遗症几率较高3.3实验室检查
3. 3. 1 血象
H细胞总数多在（10~20)×109/1中性粒细胞可达80%以上3.3.2脑脊液
压为增高，外观清亮：户细胞计数增高，多在（50～500）X10°/L早期以多核细胞增高为主，后期以单核细胞增高为主，蛋白轻度增高，糖与氯化物正ous
3.3. 3 血清学检查
操作方法按附录B进行，附录（
3.3.3.11个习内未接种乙脑
上升高：
3.3.3.3急性期抗乙能
方偿可供多
或脑脊液中抗乙脑病毒igM航体阳性；阳转或乙脑病毒中和抗体滴度比急性期有一倍或4倍以Ig抗体
IgG抗体性，谈恢复期阳性。
病原学检查
摄作方法按附
录A行，病原学
卓期感
脊液或血清中分离出乙脑毒
3. 3. 4. 1
检测出
4诊断原则
根据流行
特毒的特异性核酸。
料和临床表现及实验室检查，综合分析后作出疑似诊断、临床诊断。字货
确定诊断须依
5诊断
疑似病例
血清学或病原学检查。
符合3.1、3.2.
3和3.3.1项者，
5. 2临床诊断病例
疑似病例同时符重项者。
5.3确诊病例
临床诊断病例、同时符合
一项者；或临床诊渐病例，同时符合3.3.4中征一项者。中
5.4 在临床诊断或确定诊断型O量 3.2. 进行临床分量会期。鉴别诊断
上要与其他病毒性脑炎、细菌性脑膜炎、真菌性胸膜炎、中毒性痢疾等鉴别TIKAONKAca
A. 1 乙脑病毒分离
A.1.1原理
附录A
（规范性附录）
乙脑特异性病原学检测
ws 2i4-2008
感染之脑病毒后至发病早期，机体会有短暂的病毒血症期，此时采集患者血液和或）脑脊液标本有可能分离到乙脑病毒，从脑炎患者标本中分离到乙脑病毒是乙脑诊断的金标辉，H前常规采用的病毒分离方法有凯织细胞培养法和新生乳鼠种如有条件可以两种方法同时进行。HOC
A.1.2组织细胞培养法
A.1.2:1试验材料
A.I.2.1.1组织培养细胎
C6/36、BHK-21
胞等乙脑病青敏感的细胞系。
A.1.2.1.2C6/36
细胞块
产养基
a）生长液：100
H长液中包含Eagle
养液27ml脂牛血满10ml.10000U/000ug/mL链霉素各1nl
nI.青霉素和
1%奋氨酰胺]ml.7. 5%磁毂氢钠调液体pH7. 2-~8
b）维持液：100m/维持液中包含Egle液61ml1610培养液31ml.胎牛血青2ml10000U/mL青霉素和1
004g/mL链索名
iml1%谷氨酰胺Iml.,7.5%碳酸氢钠调液体pH7.2~7.4。A. 1.2. 1. 3 BI!k-21 和(或)Vero 细胞培养基a）生长液：100m
和1000029
b）维持液：10
Eagle's生长液中包含Eagles液84m胎牛血清10ml、10000U/ml.背需素L链霉素各1ml.1%各氨酰胺1ml.7.%碳酸氢钠调液体pl17.2~7.4。Eagle's维持液中包含Faples液92ml、胎牛血清2mI10000U/ml.背霉素和10000ug/
霉素各lnL、
%谷氨酰胺1mL.7.5%的碳酸氢钠调液体的pH7.2~7.4.A.1.2.2操作步骤（以
16/36细胞为例）
A.1. 2. 2. 1生长至
单层细胞培养管，弃去培养液，加人02mL标本夜（脑脊液可用原液直接接种，血清需1：2～1：稀霜用),置子A. 1. 2. 2. 2 1h 后弃去液体小28℃、5%一氧化候培养箱中，每院15m轻操-次，倪进吸附；1mL细胞维持液·同时设立对照细胞管，置小28%、5%二氧化碳培养箱十继续培养：
A. 1. 2. 2. 3显微饮下观察细胞病。脑病毒在 C6/36 细胞比现病变时间一般为 3d~-4d;出现病变的细胞感集上消减恶步鉴定，无病变者言传三代不出现细胞病变可以停止A. 1.2.2. 4
实验：
A. 1.2.3结果判定
乙型脑炭病毒感染（C6/36红胞后，细胞病变表现为细胞聚集，融合和脱落等特征。患者标本引起组织培养细胞出现病变片非诊新乙脑病毒感染的特异性指标，还需要对分离物进行乙脑病毒特异性签定实验方能确诊。
A.1.3新生乳鼠接种法
A. 1. 3. 1 试验材料
a）2d-～~3l龄乳鼠，每窝乳鼠为一组。6）血清或脑脊液标本可以直接用丁乳鼠接种：A. 1. 3.2 操作步骤
WS 214—2008
A.1.3.2.1在每只乳鼠左（或右）侧眼后角与耳前缘与颅中线构成的三角区中心，划人2m～3mm；注射血消或脑脊液0.02ml
A.1.3.2.2乳鼠接种后从24h起，每8h观察一次.出现发病后改为每4h观察-次。接种24h内死亡的乳鼠视为非特异性死亡：
A.1.3.2.3乳鼠濑死时收获鼠脑纠织.未发病的乳鼠继续观察至11d；A.1.3.2.4制备鼠脑研磨液迹行下一轮接种实验：按照上述方法在鼠脑内传代 3次。叫以引起乳鼠规律病变的标本进行乙脑病毒特异性鉴定实验。A.1.3.3结果判定
一般乳鼠接乙脑病毒后60h左右升始发病，表现为拒乳、离群、蜷曲、抛、四肢强直等症状，随着间的掘移症状遂渐加更，多数乳鼠在72h死亡：忠者标本引起乳鼠发病并非诊断乙脑病毒感染的特异性指标，还需要对分离物进行乙脑病毒等异性鉴定实验方能确诊。4.2乙脑病毒特异性核酸检测
4. 2. 1 原理
基于常规RT-PCR原理，设计乙脑病毒特异性引物，对脑炎患者的标本进行乙脑病毒特异性核酸检测，阳性结果可以判定为乙脑病毒感染。该方法比病毒分离史加敏感、快速，可直接作出诊断。A.2.2试验材料
A.2.2.1待检患者标本
血清、脑脊激和（或）户检脑组织均可。标本要求无菌采集，最好是一80℃或液氮保存，冷链运愉；A.2.2.2PCR扩增引物
I游引物:PrMF(251-275):5'-CgT TCT TCA AGT TTA CAR CAT TA C-3'， 下 游 I 物P-MR(925-901) : 5'-CC YRT gTT YCT gCC AAg CAT CCA MCC-3':A.2.2.3细胞总RN1分离试剂
Trizol(用」组织标本）T'riznlSL（用于液体标本），或病毒RNA提取试剂盒：A.2.2.4逆转录和PCR扩增试剂
AMV逆转录酶LNA聚合酶、dVTPMixure等。A.2.3操作步骤
A. 2. 3. 1病毒 RNA提取
待检标本用细胞总RNA分离试剂提取RNA，按照细胞总RVA分离试剂说明书操作：A. 2.3. 2逆转录合成 cDNA
根据AMV逆转录酶反应要求按照说明书通过逆转录反应合成与口的基因RNA序列互补的cDNA：A.2.3.3PCR 扩增
H的基网的扩增条件为05℃预变性5mim,94℃30s.55℃30s、72%℃60s、增30~35个循坏，72℃延伸10min；
A.2.3.4结果观察
用.%~2%晾脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。A.2.4结果判定
该对引物对中国以往分离株及近年新分离的乙脑病毒均特异，应用以上引物扩增产物应为674核苷酸片断，如果扩增产物分子量与预期片段相同，而阴性对照龙条带，表明标本中含有乙脑病葬核酸，可以判定为乙脑病毒核酸检测附性。PCR产物的核皆酸序列还可以进行乙脑病毒基因分型研究，从而进一求揭否病每株的呆因型别特征，+
TIKAoNTKAca-
谢录B
【规范性附录]
乙脑血洁学检测
B.1微量中和试验(固定病毒-稀释血清法)B.1.1原理
WS 214—2008
人或动物感染乙两病毒后，血洁中可产牛具有高度特异性的中和抗体。中和试验是利用观察病毒感染力而检测标本巾乙脑病毒中和抗体水平的实验方法。其基本原理是先将病赤与标本进行中和反应，然后接种组织培养细跑或实验动物来测定病毒感染力，观察病毒感染力的方法有细胞病变法，蚀斑形成法以及计剪动物死亡数等。这单主要介绍用于检测忠者血清标本中和抗体滴度的固定病稀释血清的微最中和试验。
B..2试验材料
B.1.2.1待检血清标本：无菌采集，一20℃以下保存；B.1.2.2纠胞及相应培养液：按A,1.2分离乙脑病毒；B.1.2.3菌IIanks洗液，调至pH7.4;B.1.2.4仪器设备：倒置生物显微镜、37C.5%CO.恒温培养箱，37℃水浴锅、组织培养板及加样器、吸管等，
B.1.3操作步骤
B. 1. 3. 1 TCMso滴定
首先在敏感的细胞测定病毒50%致细随病变垦（TCIL）以确定迹行中和试验的病毒用量，一般使用1001CID/50L：充许范用为32~-320TCIDB.1.3.1.1将生长状态良好的组织培养细胞接种至光菌96孔极（100L/孔），在37℃.5%CO，孵箱培养24h左右，观察细胞生长状态以进行TCID.试验；B.1.3.1.2取新鲜病毒悬液，用维持液连续10倍系列稀释，每一个稀释度换用一个新的吸管或吸头：B.1.3.1.3稀释的病声分别接种于组织培养细跑、9G孔板接种量为50l./孔；病毒每稀释度接种4孔，平行设立正常细胞对照4孔，37℃，5%cO.培养箱中吸附1h；B.1.3.1.4取山细胞培养板，吸去病毒液，以TIanks液洗3次，补加100L细胞维特液将细胞管置15%二氧化碳恒温培养箱中培养数H：B.1.3.1.5逐月在显微镜下观察并记录细胞病变情况，一般连续观察3d7d：B. 1.3. 1.6按Ree和 Mucrch法计算该病毒液的 TCJID3具体计算方法见或(B.1)和式(B. 2)高于50%细胞病变百分数一50
距离比例一高了50%细胞病变百分数，低50%细胞病变页分数(3.1)
TCDse—高于50%病变的病最高稀释度的对数+距离比例...（B.2）得到的计算结果可以表述为，在所计算得到的稀释度下，病毒的感染性剂量为TCI)..750L：B.1.3.2中和试验
.1.3.2.1细胞培养：将生长状态良好的组织培养细胞接种至无菌96孔板，5%C0孵箱培养24h左右，观察细胞牛长状态以进行微量中和试验；B.1.3.2.2血清标本的稀释首先将待检血清在56℃灭活30min;用维持液进行系列倍比稀释成1：10、：：20、1：40等。具体操作步骤：取6～10个无菌处理的离心管分别标记不同的稀释度：向第1加人450ml.纤持液，其余各管户加入100mL维持液；取50ul.血清原液加人到第1管中，充分混勾.换用新吸头吸取100uL加入第2管：充分混约并依次进行蒂释；5
wS 214—2008
B.1.3.2.3对照的设立:已知阳性对照血清8孔,设立：10,1：80两个滴度的阳性对照孔：以维持液为阴性对照，设正常细跑对照4孔；血清对照孔（待检血清-等体积维持液）病毒感染对照4孔（病青稀释液十等体积维持液）.病毒作液满度检查，（每孔中加人50μl2倍系列稀释病被.最终第-孔 100TID50TCIDs25TCD0. 7TCID
B.1. 3.2.4血清标本与病毒悬液的孵育：按照 TCID:试验测定的病毒原液进行近当稀释，得到100T25T.病毒稀释液，取病毒称释液分别与领释的得检血清，病藓对照，H性血清对照等量混勾：37℃水溶作用1h；bzxZ.net
B.1. 3. 2.5病毒接种：从细胞培养箱巾取出 96 孔板,弃去细胞培养液,用[Iinzk液洗涤细胞孔板 3次，动作底轻柔，弃去孔板内的液体，取50m孵育后的混合液至相成细跑培养孔中，每个滴度样品平行加4孔，放置于37℃二氧化碳细胞培养箱孵育1h后补加50L维持液放置于37℃二氧化磺细胞培养箱US
继续培养：
与中和滴度的计
B.1.3.2.6细胞病变的观
完成细胞病变观察后按腰式(B3.进行距离比侧
小和坑体滴度的
B.1.4结果判定
B. 1. 4. 1TCIDs
表.1着贵
Recd 和Muerw:h
高于50
为：低厂
算：病毒接种48h以后，开始观察并记录细胞病变情况。体的
与判定
跑病变首分
脂细胞病
变白分案
60%细胞离变百分数
数一值
病变率血清稀释度对数十距离比例×稀释系数的刘数。算方法举例如下
更50%纫胞孔出现病变的病毒稀释度在10-4~10-之间，其中间距离比例按算：见式（B、4）
1%细胞病变百分数一50
高子50
距离比例=
高丁50细胞病变百分数
低于50%细胞病变百分数
-(80—50)/(8020)=0.5
高于50%病变的与毒最高稀释度的对数+距离比例G
稀释度
正常对照
总技种
无病变细
胞孔数
浒：所增方为累加的方向。
滴定病毒TCID5计算表（示意）
病变细
饱跑孔数
累总数
无病变孔数+！
有病变孔数中
病变细胞
孔数比例
出现细孢
病变率/%
能使50%细胞管发生病变的病毒稀释度为10-4.5,即TCIDs,为10-4.5,当病毒悬液做1C4b倍稀释时,50L含 1个rCID
B.1.4.2中和试验结果计算方法举例如下中表B.2可以看出50为细胞病变出现在血洁橘释度的1：320～1：640之可，其间比例叫可以按武(B.5)：
-TKAONTKAca
血清稀释度1g
1: 10(10-)
1 : 20(10~1.1)
1:40(1016)
1:80(101.9)
1 : 160(10-2.)
1: 320(10-2:3)
1+64000-2.3)
1:1280(1na1)
中和抗体滴定计算表（示意】
病变观察
CPE孔数/总孔数
CPE分布
NGHOUSE
汁：++所指片向为累加的方
低于 50%病变率
则上述结果可，
和抗体滴度
2.65的反
滴度判定为」：
如果患名怠
IgiM捕获
乙型脑炎病刮
伏期为 4c-~21d.
性 IgM抗体。查到折
高于50
市释度对娄
距离比例
胞病变
CPE累计
lg01/2
1：447,即该份血清格
希释系数
阴性率
C亚比数
变百分
60%细胞离变百分数
WS214—2008
r比/%
释可以护50%细胞不产生病变，中和抗体1：447稀
口恢复期而清的中和抗体出现4倍或4倍以上升高可以诊断为脑病毒感染：法检测抗乙脑病毒IgM抗体
后机体首先产生IsM抗体，
一般gM抗体持续存在
个月左右。山于乙脑闷潜
lod～14a.1
因此出现临床症状的患者，其血液中或脑滑液中即可查到乙脑特异IgM亢体，结合症状可以
脂病毒IgM抗体，尤其是在脑脊液中查创抗乙脑病毒诊断为乙型脑炎：IM
本中抗乙脑病毒IgM抗体
EI.ISA实验是利用包被在聚米乙板上抗人IM链抗体.捕获感染者标染者体内抗乙脑病毒IgM抗体与乙脑抗原了以特异性结合，再通过标记有过氧化物酶的抗脑抗原抗
体与底物结合并显色而达到检测目的速：近于早期快速诊断。
13.2.2试验材料
B.2.2.1抗人Lg-V链抗体；
B. 2. 2. 2
B. 2. 2. 3
B. 2. 2. 4
B. 2. 2. 5
B. 2. 2. 6
B. 2. 2. 7
B. 2. 2. 8
B. 2. 2. 9
B. 2. 2. 10
B. 2. 2. 11
灭活乙脑病毒抗原；
乙脑单克隆抗岱；
过氧化物酶标记的抗鼠IgG抗体；包被液：0.05mol/L:pH9.6碳酸盐缓冲液：该方法的待点是特异、敏感、快封闭液：含【%牛血清白蛋H（或%脱脂奶)和0.05%Tween-20的IPBS液体；稀释液：含有0.5%牛血清白蛋白（或3%脱脂奶)和C.05%Tween20的PBS液体；洗液：含有0.05%Tween-20的PBS液体：底物液：OPL或TMB；
终止液：4NH.SO
酶标仪、洗板机、FLJSA用96孔板、移液枪、多通道移液枪、37℃水浴、湿盒。7
wS 2142008
B.2.3操作步骤
13.2.3.1抗人IgMμ链抗体而pII9.6碳酸盐缓冲液稀释后包被，100,/孔,4℃过夜，洗板3次甩干；B.2.3.2每孔加2C0l.闭液，37℃温浴2h.洗板3次：B.2.3.3加待测标本（血清或脑脊液），并设立阳性对照、阴性对照和空对照，100J./孔：B.2.3.437℃温浴1h，洗板4次，甩下；每孔加1Cg火沿抗原.37℃温浴1h.洗板4次，甩干；B. 2. 3.5
B.2.3.6加适当稀释后的乙脑单克降抗体，100/L/孔，3?℃温浴11，洗板4次，电十；加酶标抗鼠IgG抗休，100μL/孔.37℃温浴1h.洗板1次，尼干；B. 2. 3. 7
B. 2. 3. 8
B. 2. 3. 9
加底物液OPD或TVB.100mL/孔，37℃温箱避光孵育15min：每孔加0量终液，终止反应；
酶标仪在490nm或450mm处测OD值；. 2. 3. 10
B.2.3.11阳性对照：乙脑阳性血清或脑脊液代替待检标本，率少设立孔，取平均值：B. 2. 3. 12
阴性对照：阴性血清或脑脊液代替待检标本，至少设立两孔，取平均值；B.2.3.13空对照：稀释腋代替待检标本。13.2.4结果判定
首先根据式(B.6)P/N值：
P/A-(N:-N)/(N.N)
标本的（D值；
N——空白对照的OD值：
N。一阴性对照的OD值。
-: (B. 5)
首光计算阳性对照孔：阳性对照P/V2.1情况下说明实验成立。其他检测标本的结果判定如下：
检测标本P/N2.i时，可以判定为阳性，表明患者新近感染乙脑病毒：当1.5-P/N-2.1时，检测结果判为可疑阳性，需结合其他诊断方法的结果进行综合分析；当P/N1.5时，结果判为阴性，提示标本中无抗乙脑病毒IgM抗体。B.3间接FIISA法检测抗乙脑病毒IgC抗体B. 3.1原理
利用包被在塑料板礼十乙脑病毒抗原可以特异性结合患者标本中抗乙脑病毒抗体，引通过酶标记的抗人IgG抗体结合人源IgG的特性，达到检测H的。一般用乙脑全病毒作抗原，故检测到的不仪有乙脑中和抗体，还有（.脑非中和抗体。抗乙脑病嵌IgG抗体阳性提示感染过乙脑病牵或接种过乙脑疫苗：
B.3.2试验材料
B.3.2. 1包被液、封闭液、洗液、底物液与终止液同B.2.2。B.3.2.2灭活抗原过氧化物酶标记的抗人-1gG抗体[3.3.3操作步骤
B.3.3.1乙脑病毒抗原用pH9.6碳酸盐缓冲腹稀释后包被，100元L/礼，4℃过夜，洗板3次，甩干；R.3.3.2加封闭液200L/孔，37℃温浴2h，洗板3次：B.3. 3.3
加待捡的而清.并设立阳性对照阴性对照和空白对照，100g1/孔37℃温浴1h.洗板1次；B.3.3.4加标记抗人I抗体，100uL/孔，37：温浴1h，洗板1次；5加底物液OPD或TM，100uL/孔，37℃温箱避光孵育15in；B. 3. 3. 5
B.3.3.6加终止液终止反应，50l/孔；8
HKAoNrKAca
R.3.3.7在490nm或150nm处检测Om值；B.3.4结果判定
按式(B.6)计算P/N值
WS214—2008
首先计等阴性对照孔.阳性对照P/N三2.1情况下说明实验成立。其他检测标本的结果判定如下
检测标本P/N2.1时，可以判定为阳性：当1.5≤P/N<2.！时，检测结果判为可疑阳性，需结合其他诊断方法的结果逊行综合分析；当P/N1.5时，结果判为阴性。只有当双份咖清中抗乙脑病毒IgG抗体4倍或4倍以上升高才具有诊断意义：
S 214-—2008
附录C
（资料性附录】
免疫荧光法检测抗乙脑病毒抗体C.1间接免疫荧光试验[ILFA)检测抗乙脑病毒IgM,IgG抗体C. .1原理
检测原理和ELSA法基本相同.不同之处在于反府在玻片上进行，首先制备细胞培养的病毒抗原MOUSE
片，使用炭光标记的抗体直接在荧光显微镱下观察结果。本方法的特点是快速、简便、结果卓观、敏感性和特异性较高等优点.它同样可以C.1.2试验材料
细胞制备.低温干燥保荐
C.1.2.1抗原片：用乙脑满南感组织培养鼠免疫血清或阳性病
C. 1. 2. 2
对照：乙脑病
清（5
ITC标记
FITC标记
抗gG抗体
C.. 1. 2. 3
制)等：
c. 1. 2. 5
常用稀释
荧光晶微镜
移液枪
操作步骤
晾下，
C. 1. 3. 2
C. 1. 3.3
C. 1. 3. 4
C. 1. 3. 5
对照孔）；
C. 1. 3. 6
C. 1.3. 7
C. 1. 3. 8
PRS液体
水浴、混盒、染色缸、
人IgM
过照）、阴性血清：
链抗体；
文思兰（PBS稀释）、90为甘源（PBS配租
量搅拌器、稀释板、盖玻片。
从冰箱
出制备好的抗原片，散掉雾气，PBS液振洗2遍，蒸溜水振洗！遍，舒次2mlin；滴加卫BS模稀释好的待测标本，并设立阳性对照、阴性对照和空白对里，每孔6αL；7#服育30min；
混盒：
用缓流托原片39~~5*，再用PBS液振洗3遍，蒸馏水振洗1遍，每次2min，晾干，用1：
o伊文思兰液稀释FITC标记的抗人IgM或抗人G抗体，孔6uI（包括所有混盒37℃膏
BOrnin;
用缓流冲洗优原，3s-5s，再用PBS液振洗3遍，蒸留水振洗遍，每次2min晾干；用90%自美片，加盖玻片，荧光显微镜观察；阳性对照；阳性血情代替得测标本加到固定有抗原的孔中阴性对照：阴性加清代替持测标本加到固定有抗原的孔中；C. 1. 3. 10
C.1.3.11空白对照：PBS液代替得测标本加到固定有抗原的孔中C.1.4结果判定
只有在阳性对照存在特异性荧光，阴性对照无特异性荧光，空白对照无荧光时，检测结果才是可靠的。急性期恤清标本稀释度≥1：10炭光阳性（脑脊液为1：5)可以判定为抗乙胸病毒IgM抗体阳性；或双份血抗乙脑病毒IgG抗体4倍或4倍以上升高可以判定为阳性。10
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