本标准规定了流行性脑脊髓膜炎的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断等，为临床工作者及相关工作人员提供严格的参考。 WS 295-2008 流行性脑脊髓膜炎诊断标准 WS295-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

备案号：25518—2009
中华人民共和国卫生行业标准
WS295—2008
流行性脑脊膜炎诊断标准
Diagnostic criteria for cpidemic cerebrospinal meningitis2008-12-11发布
人民正业服社
2009-06-15实施
中华人民共和国卫生部发布
根中华人民共和国传染病防治法》制本标准WS295—2008
按照国家质检总局、国家标准委公告（2005年第145号），GB168841997流行性脑脊髓膜炎诊断标准及处理原则》白本标准实施之日起废止。本标准的附录A为规范性附录、附录B为资料性附录。本标准由卫生部传染病标准专业委员会提出。本标准由中华人民共和国卫生部批准。本标准起草单位：北京地法医院、中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。本标准生要起草人：李兴旺、邵祝军、将茉猛、李群、李军宏，1范围
流行性脑脊髓膜炎诊断标准
本标准规定了流行性脑脊髓膜步的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断WS 295--2008
本标准适用全国各级各类医疗卫生机构及其工作人员对流行性脑脊髓膜炎的诊断、报告2诊断依据
2、1流行病学史
2、1.1客在冬参事节发病.1周内有流脑患者密切接触克2.1.2当地有本病发生或流行。
2.2临床表现
2.2.1潜伏期
数小时至10月，般为2d~3d，
2. 2. 2 主要临床症状和体征
2.2.2.1发热、头痛、呕让、脑膜刺激征，重症患者可有不同程度的意认识障碍我（或）感染中毒怀休克。2.2.2.2皮肤、黏膜出现瘀点或瘀斑，2.2.3临床分型
2.2.3.1普通型
约占90%按病情可分为上呼吸道感染期，收血症期和脑膜炎期，但不易严格区分）上呼吸道惠染期：有发热、咽痛、鼻爽和咳嗽等上呼吸道感染症状。部分患者有此期表现。6的败血症期：恶案，尚热，头痛，呕吐之力，肌肉酸痛，神志淡演等，约0%惠者出现疫点，疫斑！脑膜炎期：多与败血症期症状同时出现。爱病后24h，除高热没毒直症外，主要表现为剧烈头痛、呕吐，可呈喷射生，烦躁不安，脑膜刺激征阳性。颜压增商明显者有血压升高、脉搏减慢等。严重者可进人请妄、寄述。婴幼儿多不典型高热、拒食、频躁，笑不安外，惊殿、腹得及咳款较成人多见。前因末闭者可有隆起，而脑膜刺激征可能不明显。2.2.3.2暴发型
病精风险，选展退速如不及时治疗发病h～24h内即可危及生命可分为休克型、脑膜脑炎型利混台型：a）体克型：叉称”暴发型脑膜炎奈惑菌败血症”。起病急骗，寒战、离热或体温不升，严重中毒症状，短时间内内出现遍及全身的培点，遮无，迅速广大，或继以瘾斑中央坏死，休克为重要表现：面色灰白：唇及指（肚）端紫甜，四肢联冷·皮肤花班状，脉细速，血压下降：易并发弥散性血音内混血（DI)。多无脑膜刺意征脑脊液检食多无异常。百？脑膜脑炎型：除有高热，头痛和呕吐外，可迅速陷人昏迷，领紧拍指，锥体束征阳性：血压持续升高，球结题水吗，部分患者出现脑疝（小脑幕切迹、枕骨大孔础），表现为双侧瞳孔不等大，对光反成退纯或消失：可出现呼吸不规则，快慢深浅不或操荐，肢体肌张力增强等）混会型：润时具备体克理和脑膜服炎盟的临床表现，此型最为凶险，预后善，病死率高。2.2.3.3轻型
临床表现为低热、轻微头痛、咽落等上呼吸道感染症状：皮肤黏膜可有少量细小出血点，亦可者脑膜刺激征。脊液可有轻度炎症改变。2.3实验室检查
WS 295-2008
2. 3. 1末梢血象
白细胞总数、中性粒细胞计数明显升高2.3.2脑脊液
外观呈浑油来汤样或酸样力增高：白细胞数明显增高，并以多核细胞增高为主：糖及氯化物明品减少，蛋白含量升高。
2.3.3病原学
2.3.3.7廉点（斑）组织液、脑脊液涂片检测，可在中性粒细胞内见到草兰阴性肾形双球菌2.3.3.2脑脊液血液养脑膜炎奈瑟菌阳性2.3.3.3腰脊液、血液脑膜炎杂菌特黑性假度片度物阳性2.3.4血清学
2.3.4.1急性期脑管减，血液皮
2. 3. 4. 2
3诊断原则
应根据流行病
得异性多南原检测阳性
其效价较急性期量一借战4情以上升高似及防床诊断
中临床装现受
实验室检验吉果做出款
确诊带要脑出
4诊断
带菌者wwW.bzxz.Net
无临床症妆
4.2疑似病例
菌病原学最市
杜润邮阳性
正，咽拭子培养解膜爽李震菌阳性脑膜炎奈愿菌特异性板酸片股橙测阳性。同附符合2
2.1.,2.3.1 和2.3.
4.3临床诊断痛
同时符合菱
4.4确诊病例
符合下刻任向
及2. 2.2,2。
T诊断：
4.4.1疑似病例并同
合2.3.3、2.3.4中何现者
4.4.2临床诊断病复
时符合2.3.3、2.3.中何项者
在确定诊断基
血清群剧的站果敏出店原学分鲜诊断4.5在临床诊断或确定诊断动上：能据22、进行临床分型诊断
5鉴别诊断
其危所致的败血症、各神腰国的紫廉等疾病鉴别。婴幼儿还需主要和其他细菌所致的脑膜美
要与高热惊默等疾病鉴别。
A，1脑膜炎奈瑟菌分离培养
A.1.1标本
附录A
【规范性附录】
脑膜炎奈瑟菌实验室检测方法
所采取的标本为脑脊液（CSF)和面照WS 295—2008
标个的采集应在病后就诊最短时间内在抗生案治疗前，在来集血液标本过程中不应使用抗疑剂。A. 1. 2 CSF 标本接种
CSF采集后应立即选往微生物学实验室并在采集少来
脑背液采集无菌操价
标本露于
诚高温
境下，CSF到实验室后，立即放到无后1h内进行检测，不婴
寒冷的
菌试管内离心，20001/
菌的毛细管吸取沉淀物
24h72h，每日检全
原,亦可将其置！
涂板培养，
Co0r/m
种到5
生长的情况
上清液
血巧克
方色琼脂
2待测。如果得的腩情液
A. 1. 3 血液标本接利
养物供
淀必须行居型振荡或充分混合，用火5%二气化碳环境37℃培养，
羲接种，
CSF上活液部升供检胃Nm特异抗
不进行离心接月它进行革兰染色和采取思者急生制脉血液3mL，采集后应立即注人3Cm增菌用的葡萄翻肉汤三角瓶内，并同时取血液 0. 1mLr-
工直接涂板培养
日进行观察，如现
落再分离培养
A.1.4脑膜炎奈 菌落
，5%氧化碳坏境37培养，24h~72h，增菌月的葡萄糖肉汤每本南在血琼
克力及驹黄琼脂平板上经论2增养后可见圆形、降遇光骨、湿响、散带炭兰色似露珠状光透
直径0.5um
科不新无色素，菌体含有口溶副培养时间过长由于口裕葡死亡，此酶在65ain即被破坏
英膜及细胞膜，此
陈旧商落在边绝品生长出工型小菌落形态口露珠或成丝状：无患者标本中遇到：再绣培养可恢复其原形。培基中加人多粘葡素B或E万种制而有利于脑膜灸菌的生长提高检出率。古舞素，制醇菌素等加
A.1.5脑脊液的革兰染色
2000r/min心C62m
降干埋的皮片上滴加1-~2滴沉是物，准可能的情况下，在生物安全中风干玻片将玻片大快
火增以固定涂片，不应孩干。结品紫冲洗被片1min，用流水冲洗皱片Imin.并去除多余的来ss兰碘糖洗玻片1m用罐动水冲洗玻片并干燥，95%的乙棉键0s或用耐红复染10s-5s，用流动水冲洗玻片并抹于。显脱色（5s～10s足够），用番红染滤享英微镜观察染色的涂片，用完视野的透镜和油镜，脑膜炎球菌是在多形核白细胞内外出现的，革兰阴性、咖啡豆形双球菌
A.1.6脑膜炎奈瑟菌生化特征
绝大多效Nm菌株分解葡萄糖和麦芽裙，产酸不产气，不分解蔗精，果糖和乳糖。过氧化酶和氧化酶阳性。
A.2脑膜炎奈瑟菌血洁学分群
A.2.1试验方法
乘用玻片凝集试验方法，Nm诊断血清包括多价T（包含A.B、C、D群）、多价Ⅱ（他含Y、H、29F）、多价Ⅱ（包含W135、X、1.K群)及各群单价血清,共计-13种，但世界卫生组织（WH0)己不维荐I33
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群作为带规检测的自清样。
A.2.2实验操作
用乙醇擦净一块载玻片，用蜡笔或其他记号笔将载玻片分为一个部分，每个部分10mm×4m在每个部分的近底部处加10L0.5务的生理盐水，用无南接种环、针、无菌涂棒或牙签从BAP上采取细菌培养物，在生理盐水中，将培养物制成用于测试的略呈乳液状的悬液。在每个部分的上部加上所选的血清各10L以及10L生盐水或PES（二者都可以）。在亮光下或黑色背景下，将抗血情或生理盐水与各自的培养菌悬液很合，据动坡片1min--2min(时间可能会周为血清的制造者不同而有所差异）
A.2.3实检结果的读取
培养菌应该只与一种抗血涛凝集·面与生理盐水或PBS不会发生凝集反应。如果在生理盐水中颜集说明培养菌有自接性：和儿种抗血清燕集而无自凝现象，说明培养菌是粗罐的：和在何一种元血清或生理盐水都不能发生凝集，说明菌株为不能分群菌株，这样的结果在新鲜分离株中很少发生·但碗实会偶尔发生。血清和生理盘水/PBS应在C冰箱中储存备用。A.3标本及疑似菌株采用聚合随链式反应（PCR)辅助鉴定对于不能月血清学分群的脑膜炎奈意菌疑似菌袜或光法进行脑膜炎奈恶菌分离培养的脑脊液、血液，血清标本可采用PCR方法进行DNA扩增输助检测紧定A.3.1目的基因
睡液酸转移酶基因Cs2D基因）：可以作为PCR扩增的月的片段来区分A，B,CW135、Y等五个常见流脑血清群。
CrgA及o2基可作为流脑奈瑟菌属的特异性基因A.3.2鼻聚核甘酸引物序列
1) crgA F.5'-gctggcgecgctggcaataaaatte-3 ,R.o'-ctietgcagattgcggcgtgccgt-32) Orf 2(A)F:5 cgcaateggigtatatatictlec 3,R:5' cgtaategtttcgtatgcettett-33) SteD(B)F.5-ggatealllcagtgitltccacca-3',R.5'-gcatgctggaggaataageatraa-34)SiaD(C)F:5-tcaaatgagtiugcgaataganggr-3':R:5'-caatcacgatngzccaattgac-35)SiaD(Y)F.5-ctctiagcgaaggctttggtta-3'R:5-ctgaagcgtttcattataattgctaa-35)SinD(Wias)F:5-cagaaagigagggarticeata-3'R5'-cacaaccaltttcaltatagtlacig13A.3.3样品处理
可采用日前市售的DNA提敢试剂盒提取样品DNA。也可采取直接点沸方法，将样品煮沸301min离心，取上清液作为扩增样品。A.3.4扩增及检测条件
92C305，5540s，72℃30s。37个循环，反应产物用1.5%2%琼脂糖凝胶检测，电压6V/mA.4胶乳凝集检测
已套南售的试剂盒，严格遵照制造商的操作说明进行操作。为了获得最佳的结果，CSF择本的上清应尽快检测：妇果不能立即检测，样本应冷毫（2℃8℃）几个小时，或在一20℃冻存更长的时间，备用试剂应该2℃一8℃保存，不应冻存A、4.患者标本的处理方法
A.4.1.1CSF离心，3000r/min.20anin），取上清，沉淀部分作细菌培养：A.4.1.2急性期而液（2ml.），分离血清，置56将其灭活30mimA.4.2结果判断
A.4.2.1按照说明书操进行，在亮光下不需要扩人倍数读取，A.4.2.2阴性反应：激液仍均质并出现轻薇的浑独。A.4.2.3附性反应：乳胶题粒2mi内凝集（战可见团块）。A.5酶联免疫吸附试验(EY,YSA)
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应用ELISA间接法测惠者急性期和快复期血清中的抗体水平，过可以应用于健康者血清抗体的测定。严格遵照制造商的操作说明进行操作A.6杀菌力试验
应用微量系菌力试验（TTC法）测定惠者急性期和恢复期血清中对m的杀菌抗体水平。此方法也可用于健康人群的血清抗体测定，为检测患者血消抗体血消的标准实验。A.6.1目标靶菌
应选择对补体的自然杀菌作用具有耐受性，但对杀菌抗体反应敏感的脑膜炎奈恶菌菌株1. 6.2稀释液
灭菌醇酸盐缓冲盐水.pH7.1。使用时每1COml.稀释液加灭活小免血清1ml，万古毒素500ug，多粘菌素2500单位。配就的稀释液盛于小瓶中，置4℃各用2周。A.6.3滴定板、补体及琼脂
底部呈“形的96孔带盖有机玻璃微滴板。一般采用纱龄免或成略免血清中筛选的免补体，预试测定要求它们不能具有白然杀靶菌的活性，但加有已知即性参考血清附应产生较离杀菌抗体滴度。使用氟化三基基四氨唑琼脂培养基（TTC脂）A.6.4阳性参考血清
用m免疫免制备的诊断血清，未加防腐剂.经预试测定其柔商抗体滴度较高（1：3200以二）。A.6.5杀菌抗体测定步骤
A.6.5.1靶菌液的制备
将A，B或（群N菌纯培养物制成轻度混浊的均匀菌悬液：其光密度值相当于0.丁，以菌滚的最终浓度为1000cfu/mL。稀释好的靶菌总液在1h内用完。著室银较高，可将用被管置冰溶巾，以防潮菌迅死。
A.6.5.2杀菌抗体的测定
先在微滴板每孔内拥25uL的帮释液。用移液器从每排第一孔内加25，rL经6℃30min火活的待检血清，吹吸5次~10次后吸出25，至下二孔，如此作连续倍比稀释至最后一孔。从低温冰箱内取出补体，于37C逼水中择动将其速溶，每孔加25，每孔加一满稀释成合通浓度的靶国菌液，微满板置微型振商器上中速振落5min再在37C培养25roin，取出后重复上述振满，每孔加2滴已落化井冷至45℃左右的1TC鲸脂后.微滴饭置5%二氧化碳环境37℃养15h-~20h后观察结果。
A.6.5.3实验对照
阳性参考血清对照：4孔补体对照（稀释液、补体、菌液各一滴，检查补体自然杀菌活性）4孔单菌生长对照（稀释液，灭活补体和靶菌菌被各1消），每次检测时至少每5块微滴板中应有组上送三种对照试验，往各孔滴完靶菌菌液之后，应特该液两滴分别滴加到一个巧克力色琼脂平且的一端，沿着切好的两条线倾斜下流，于37℃，5%二氧化碳环境内同时培养，次日检查每滴靶菌的菌落数及其纯度
A.6.5.4结果判断
先检查上述三种对照试验的绪果，补体的和细菌生长对照的各孔应出现众多的红色点状小茵落；阳性参考血清应达到原来确定的杀菌滴度。着所试各凡中红色点状菌落数昌明显地少于补体对照孔或不出现红免点状南落时，则判断为杀菌阳性：如果所试扭中的诺落教自接近补体对照孔的半或更多时，5
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则判断为杀菌阴性。根据红色点状菌落数口的多少，以符号“十“记录试验结果。著补体及靶菌牛长对照各孔的细菌正常生长时，应出现众多红色点状菌落，可记为“+十「「”。当所试各孔与其比较，菌落数减少30%以下，记为“十十十：减少50%在右记为“十+”避少70%左右记为“一”每孔少于10个茵落则记为“主”。以细菌生长呈“十”及以下者判为茶菌阳能：以“十十”及以上者判为杀菌阴性，以出现杀菌阳性的血清最高稀释度为杀菌抗体的最高滴度。B. 1病原学
附录B
【资料性附录】
病原学、流行病学、样品采集和运送ws 295—2008
B.1.1流行性膨脊髓膜炎的病原菌为脑膜炎奈瑟菌，俗称脑膜炎双球菌，为肾型或豆型革兰阴性双球菌。在患者脑脊液中，多位于中性粒细胞内形态典型。新分离的菌株大多带有英膜和菌毛，人工培养后可成卵圆形或球形，排列不规则SE
B.1.2脑膜炎奈悉菌的主要致病成分内维素，内荐系作用于小血管和毛细血管，引起坏死、出血，出现皮肤遮点或疼斑和微循环造量，B.1.3美膜多糖为脑膜发杂菌特号时：大量内毒素释放可造成DIC及中毒性体克：原国
内外轻
三个新的血清样，
个血清群，我国建立了
B.1.4本菌对环境的，力低，对塞青13
A、B C、D、Y.Z、29E、W135.L 等 10青群。
高温、日光
及紫外线都不敏感
火、0.01%杆
0.1%升汞、0.1%新#
新脂奶.特别是
保扩剂中（卵黄盐
培养基或保护剂
B.2流行病学
B.2.1传染源
、752
省酒精等处理
化学药剂如1%酚、
快死亡，脑膜聚奈菌能产牛白溶酶，在传代菌株散置冷暗处自落酶活力受到中制，可延长保存时间，在置℃~6℃，最长可存活2个
带菌者和者。
.2.2传播途径
病原菌主要普略喷、喷晚、说话等殊直接从室气传播，进人呼吸道引起感染密切接触对2岁以下婴幼儿的传着者重要意义。B.2.3人群易感生
人群普遍易感
购调年龄从2个月~3个月开始，后个月至2岁时发病常最高，以后随着年龄的增长而逐渐降低。易感大胖脑膜炭奈瑟菌感染片.60%一70%度为无症状菌者25%表现为皮肤出现烧点，7%表现为上呼吸道感柔，仅1表现为化依性脑膜炭B.2.4流行特征
B.2.4.1地区分布
全球均有流脑发病。A养曾是世界各地大流行的主要菌群，十余年来欧美地区流行的主要为B群或C群，近年在非洲发生了W13群的流行。我国流行菌群以A群为主，近年个别地区有C群病例发生。
B, 2. 4, 2 周期性
在流脑菌苗广泛府用以前曾大约3年-5年出现次小流行，8年～10年出现一次较大流行，流脑菌的的接种可改变流行的周期性B.2.4.3季节分布
全年皆可发生，以冬寿季节发病较多。B.3流行性脑脊髓膜炎的样品采集和运送实验检止脑膜炎奈菌足流脑的确诊依据，适宜的检测样品为脑脊腋、血液、皮肤黏膜点或斑组织液、血清及鼻，咽式了等，脑脊液，血液，皮快黏膜瘀点或瘀斑组织液中检出脑膜炎奈菌可真接作7
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为确诊依据
B.3.1样品菜集
B.3.1.1咽拭子
用长柄棉拭子采咽后壁两侧分泌物，立即接」卵黄双抗培养基（FPV)义巧克力羊血平板，也可将吲拭广放入液体双抗增菌管内，增菌8h-12h以后分离培养。B.3.1.2脑脊液
采集脑脊液1mL--3mL。可用0. 1mL--0.5mL直接接种于巧壳J或ElV平板，也可先增菌再进行分离培养。
B.3. 1.3血液
元菌操作抽取发热期患若全血5mL~10ml.0.1ml.~0.Sml.直接接种EPV-平板，余血立即加于50mL的葡萄糖肉汤中增菌后再分高培养。采集患者发病早期和恢复期双份血清，检测血清中特异性抗体早4倍或4倍以上升高。
R. 3. 1.4瘀点或瘀斑
选忠者皮肤上的新鲜瘀点或瘀斑，生理盐水消等后用针头挑破，挤出组织液，用消毒后的玻片直接葡取组织液涂片，革兰染色镜检。也可用无菌棉签取组织液先接种于含双抗的葡萄糖增菌肉汤管中，增菌8h~-12h后分离培养或直接接种EPV平板，再涂片染色直接镜检。B.3.2样品的处理和运送
H.3.2.1样品处理
脑膜炎奈瑟菌比较脆弱，采案样品后：应尽可能地做到床边接种，若无可能则应在最短的时间内送至实验室进行接种培养。
B.3.2.2早期采集样品
应尽可能果集患者仗用抗生素前的早期样品，以提高病原的检出率，B. 3. 2. 3保温运送
脑膜炎奈瑟菌对温度较为敏感，温度过低或过高均可导致菌株死亡，在运送样品或培养物时，应保持样品处于25℃～35℃之间，切记不能低温运送（检测抗体的血清标不除外）。8
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