本标准规定了麻疹的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。为临床医生和其他相关工作人员提供了严格的参考标准。 WS 296-2008 麻疹诊断标准 WS296-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

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备案号：25519—2009
中华人民共和国卫生行业标准
WS296—2008
麻疹诊断标准
Diagnostic criteria for measles2008-12-11发布
人民品生安康
2009-06-15实施
中华人民共和卫生都发布
缩略语
诊断依据
诊断原则
6鉴别诊断
附录A(规范性附录)血消学诊断方法附录B(资料性附录)病原学诊断方法-目
附录(（资料性附录)麻疹的临床表现及鉴别诊断参考文献
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WS2962008
根据《中华人民共和国传染病防治法》制定本标准。WS296-2008
按照国家质检总局、国家标准委公告（2005年第116号），GB159831995《麻疹诊断标准及处理原
则》自本标准实施之日起废止。本标准的附录 A为规范性附录、附录B和附录 C为资料性附录。本标准由卫生部传染病标准专业委员会提山。本标推中中华人民共和国卫生部批准。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心。本标准主要起草人：许文波、谢正德、左树岩。m
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1范围
麻疹诊断标准
本标准规定了麻疹的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。本标准适用十全国各级各类医疗卫生机构及其工作人员对麻疹的诊断,报告。2缩略语
下列缩略语适用于本标准。
ELISA酶联免疫吸附试验
HAI血细胞凝集抑制实验
IgM免疫球白M
IgG 免疫球蛋白 G
PCR聚合酶链反应
RT逆转录
3诊断依据
3. 1 流行病学史
在出疹前6d～21d与麻疹患者有接触史。3. 2临床症状
3.2.1发热体温≥38℃。
3.2.2余身皮肤出现红色斑丘疹。3.2.3咳嗽.流递、喷嚏等上呼吸道卡他症状，并有畏光、流泪、结膜炎症状。3.2.4皮疹白耳后、面部开始，白上而下向全身扩展，3d～5d内波及全身。3.2.5起病早期(---般于病程第2d～3d)在口腔颊黏膜见到麻疹黏膜斑(Koplik斑）。3.3实验室诊断
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3.3.18d~6周内未接种过麻疹减毒活疫苗而在血清中查到麻疹IgM抗体（见附录A）。3.3.2恢复期忠者血清中麻疹IgG抗体滴度比急性期有4倍或4倍以上升高，或急性期抗体阴性而恢复期抗体阳转（见附录A)。
3.3.3从异咽标本或尿液中分离到麻疹病毒，或检测到麻疹病毒核酸(参见附录B)。4诊断原则
典型麻疹病例可根据临床表现结合流行病学做出诊断,轻型麻疹病例需根据血清麻疹抗体的检测结果或麻疹病毒分离阳性或麻疹特异性基因检测结果做出诊断。5诊断
5.1疑似病例
具备3.2.1.3.2.2,同时伴有3.2.3者。5. 2临床诊断病例
符合以下任何一项者：
5.2.1疑似病例与实验室确诊病例没有流行病联系者。ht
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疑似病例未进行流行病学调查者。5.2.2
5.2.3疑似病例在完成调查前失访/死亡者。5.2.4疑似病例无实验室诊断结果且不能明确诊断为其他疾病者。5. 3流行病学诊断病例
疑似病例无标本或标本检测结果为阴性,并同时具备3.1者。5. 4实验室确诊病例
疑似病例同时具备3.3.1、3.3.2、3.3.3中任何一项者。5.5排除病例
符合以下任何一-项者：
5.5.1麻疹疑似病例采集了合格血标本，经合格实验室检测麻疹IgM阴性，并与实验室确诊病例无流行病学联系。
5.5.2经实验室检测证实为其他疾病（如风疹等）。5.5.3能明确找是由其他原因引起发热出疹的病例（如药物性过敏性皮疹等）。6鉴别诊断
本病应与风疹进行鉴别，参见附录C。http：
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A.1血液标本的采集，储存及运输附录A
（规范性附录】
血清学诊断方法
A.1.1IgM血清学诊断中单份血标本的采集：出疹后0d~28d内采集血液标本。A.1.2在下列情况下需要第2份血标本WS296-2008
出疹3d内仅70%左右的患者gM阳性4d～28d则为100%阳性，如第1份血标本是在出疹3d内疗S上28d内的第 2 份血标本一,非除第 1 份标本中可能出现的假Hou
采集的，检测IgM阴性，需要采集出疹阴性。
A1.3血标本采集流程
收集2rnL~3mL静脉人到无菌试管中，写明收集目期和患者编号（ID)；全血不能冷冻，应
/min，离心10min，用于分离血清，如果没有离心机，血标本应冷藏放置，直到血细胞块从血清中的完全析出；小心吸取血清避的吸到红血球，在走菌条件下移至无菌有外螺旋盖的血清管中，填写完整的病例调查表，其中未次麻疹疫苗接种日期、出疹口期、样品采集日期应明确。A.1.4血标本的储存
A.1.4.1全血应冷减（4℃~8℃）保存，并在24h内送达检测实验室；如不能达到上述要求，应按照A.1.3方法分离证
A.1.4.2无菌血清应在48h内使用冰盒运送到检测实验室，或保存在4℃～8℃，最多不能超过7d；血清长期保存应在200冷冻。
注：血清反复冻融会影响IgM抗体的效价。A.1.5血标本的运输
标本应尽快运送到检测实验室，不要总是等待收集更多的标本再送；将盛装标本的器放在有封口的塑料袋中，用冷藏盒或保温瓶；将标本送检单利调香表放在塑料袋中，再用胶带固定在冷藏盒中的上部，安排运送日期；运输日期确定后，通知接收实验室标本运送的时间和运输方法。A.2实验室检测
根据采集血液标本检测自的不同，实验室选择的检测项目租方法也各异。每次检测最好使用同一种试剂盒，确保检测结果的致件，检测结果可疑的必须用同一种试剂进行重复实验，当认为重复结果不可靠，应改用另一种试剂盒或方法进行重复实验。每份血液标本必须同时要有一份实验室登记表，内容包括患者的基本信息、疫苗接种信息、临床相关信息、标本采集时间、运送条件、接收日期、储存（地点、条件）、检测（时间、方法、结果）等信息。A.2.1抗体捕捉ELISA法检测麻疹IgM抗体A.2.1.1用途
本试剂用于检测麻疹IgM抗体，血清只做1：25或1：100稀释定性检测，用于麻疹忠者的早期诊断。
A.2.1.2试剂组成（48人份）：
A.2.1.2.1已包被抗人IgM抗体的48孔板。A.2、1.2.2阴性对照：直接可用。3
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A.2.1.2.3阳性对照：直接可用。A.2、1.2.4麻疹抗原：直接可用。A.2.1.2.5酶标麻疹单克降抗体：直接可用。A.2. 1.2.6底物液A液：直接可用。A.2.1.2.7底物液B液：百接可用。A.2.1.2.8终止液：直接可用。
A.2.1.2.9稀释液：直接川用。
A.2.1.2.10洗液：直接可用。
A.2.1.3仪器
A.2.1. 3. 1微量移液器 JμL~～20μl.100μl.,1 000μL。A.2.1.3.2洗板机或类似的清洗装置A,2.1.3.3酶标仪,波长 450nmTMB)。A.2.1.3.4便携式计算器。
A.2. 1. 4操作步骤
A.2.1.4.1开始试验前，将所有试剂置于室温0.5h。取出已包被好的聚举乙烯48孔板。A.2.1.4.2稀释待检血清：将待检血清1；25倍稀释。在微量孔内分别加入50μL阴性对照,阴性对照和已稀释的待检血清。留一个孔为底物牢白使用。37℃孵育 1h充去末结合的血清,洗 4次，拍于。
A.2.1.4.3加抗原：将麻疹抗原加入板中（空白孔除外），每孔加50ul。37℃孵育30min，弃掉未吸附的抗原，洗4次，拍下。
A.2.1.4.4加酶标麻疹单克隆抗体：将酶标麻疹单克隆抗体加入板中（空白孔除外），每孔加50μL，37℃孵育 30min后弃去未吸附的抗体，洗1次，拍干。A.2.1.4.5加底物液：每孔加底物液A液和B液各50μL（包括空孔）。室温避光放置30mincA.2.1.4.6加终止液：每孔加入终止液50μL（包括空孔），反应终止。A.2.1.5结果判定
A,2.1.5.1无酶标仪可！I测：标本孔和阴性对照孔有明显差别的判为阳性,无差别的判为阴性。A.2.1.5.2用酶标仪测定：450nm波长（TMB）。调字白孔值为零后，逐孔测定（0D值A. 2. 1. 5. 3标本 OD值阴性对照 OD值的差值0. 10,判断结果为 TgM阴性。A.2.1.5.4标本OD值阴性对照OD)值的差值在0.10～0.15之间，判断结果为可疑。A,2. 1.5.5标本(D值一阴件对照D值的差值>0.15,判断结果为IgM阳性。A,2.1.6试剂的保存和使用期限
试剂盒内所有试剂均应保存于2℃～8℃,并在有效期内使用。A. 2. 2间接定量 ELISA法检测麻疹 IgM抗体(IgM试剂盒【单孔定量))A.2.2.1用途
主要用于定性和(或)定量检测人而清或而浆中抗琳疹病毒的 IgM抗体。IgM 性，表明是急性期感染。
A.2.2.2操作步骤【或按照试剂使用说明书进行】A.2.2.2.t定量ELISA检测麻疹病毒IgM抗体的标本稀释法：A.2.2.2.1. 1应使用 50μL稀释缓冲液对 10L患者待测样品进行稀释,制成患者标本稀释液。A2.2.2.1.2将40uL类风湿闪子吸附剂（rheumatoidlactor，RF）加人100μL患者标本稀释液(A.2.2.2.1.1)中,并用60ul.稀释缓冲液进行稀释。A. 2.2. 2,2检测过程
A.2.2.2.2.1将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并备好张标签。4
A,2.2.2.2.2加入RF吸附剂的待测血清标本需在室温吸附15min或4℃过夜。WS 296—2008
A.2.2.2.2.3在微量孔内分别加人100ul.的已稀释样本或立即可用的对照血清。留一个孔为底物空白使用·例娅：
定量的 IgM
抗原微鼠孔
底物空白
阴性对照
标准血消
定量的IgM
抗原微量孔
A.2.2.2.2.4将样品 J湿盒内 37℃（+1℃)孵育 60min(上5min)。A.2.2.2.2.5孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔（使用白动洗板机或于工洗板）a）吸去或甩去洗液。
b）每孔内加人300uL洗液。
）吸去或甩去洗被。
d）重复洗涤过程3次（共4次)。c）将微孔板翻转过来在纸巾上拍打，使微孔中不再含有液体。标准血清
A,2.2.2.2.6加入酶标记抗体：于相应孔内（底物空白除外)加人100μI.IgM酶标记抗体。A.2.2.2.2.7湿盒内37℃(±1%)孵育30min（一1min)。孵育后，以洗液清洗板孔(见A.2.2.2.2.5)。A.2.2.2.2.8加入底物：于每孔内加人100mL底物溶液（包括底物空凹孔）。湿盒内37℃（土1℃)孵育30min(±lmin)。
A.2.2.2.2.9终止反应：每孔内加人100μuI.终止液，轻微振荡微孔板以混合济液。A.2.2.2.2.10读取吸光度：以底物空白为空白对照液，60min内读取405nm的OD值，建议参考波长范围为620mm~690nm（例如650mm）A.2.2. 3质控标准
A.2.2.3.1底物空白的0D值必须_0.25。A.2.2.3.2阴性对照必须为阴性。A.2.2.3.3EI1SA定量试验：标准血清的-均OD值必须在有效范围内，此范围已在试剂盒专用的质量控制证书中给定(减去底物空山之后)。A.2.2.3.4FLISA定性试验：阳性对照的平均OD值必须在有效范围内，此范围已在试剂盒专用的质最控制证书中给定（减去底物空白之后）。如果未达到以上标准，则试验无效H必须重做。A.2.2.4结果评估
每个试剂盒内均备有一个标准曲线和一个评估表,因而每一个标本OD值都可得到一个抗体活性值。标准而清的参考值和有效范围已在评估表格(质量控制证书)中给定。所有的（OD值在评估前必须先减去空白（A1）。A. 2. 3间接 ELISA法检测麻疹 IgG抗体A. 2. 3. 1 用途
本试剂用」检测麻疹IgG抗体，麻疹抗体≥1：200为阳性。可用于：A.2.3.1.1 人群抗体水乎测定:1:200,1:800,13200.1:12800。A.2.3.1.2人群抗体阳性率测定:1：200.1：800。A.2.3.1.3疫苗的初免效果观察：免疫前1：200，免疫后1：200～112800.再免抗体测定免前也为1 : 200~~1: 12 800.
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A2.3.1.4麻疹患者诊断：急性期利恢复期双份血清抗体相差≥4倍，或抗体检测结果阴转阳可诊断，
A.2.3.2试剂组成：100人份试剂盒含有下列试剂。A.2.3.2.1麻疹抗原：1：20用，2mL。A.2.3.2.2对照抗原，1：20用，2mLA.2.3.2.3抗人-IgG酶标记物，1：100用，0.8mLA.2.3.2.4麻疹IgG（+)血清：0.1mL.（效价1：800）A.2.3.2.5每份血清做4个稀释度，4个病毒孔，4个对照孔A.2.3.3操作步骤
A.2.3.3.1包被：用包被液分别将病毒抗原和对照抗原稀释至1：20.包被病毒4孔和细胞对照4孔每孔100pL，留一空自孔不包被，调客S与e过夜，次口.弃去抗厚液，洗3次，拍于。见图A.1。1:200
1:3200免费标准下载网bzxz
1：12800
1:3200
112800
间接ELISA法检测IgG的96孔板设计C
A.2.3.3.2加待格
清：用2%牛NST稀释液稀释待检血清。每份血清分别按不同的稀释度加入对放置1h~1.5h
应孔中，每孔100
A2.3.3.3加入抗人gG酶标记物：用稀释液按标签所示工作浓度将酶稀释，加入板中，每孔100L，37℃孵育1h1.5h，
未结合的酶标记物，洗3次，拍干。A.2.3.3.4加底物液：每孔加底物液100山，包括空白孔。37C或室温避光放置5min~20min，当阳性对照血清达1：800，病毒孔明氯显色，对照孔未显色时，加入2mol/LHSO%，孔50uL（包括空白孔），反应终止。
A.2.3.4结果判定
A.2.3.4.1逐孔测定OD值或直测。2用酶标仪测定：调空自孔值为零后，逐孔测定待检血清及阳性对照的OD值A.2.3..4.2
病毒孔OD值空白孔OD值
细胞孔OD值空白孔OD值
≥2.1为阳性
每份血清每个稀释度的病毒孔OD值与相应细胞孔OD值之比≥2.1即为阳性。（细胞孔OD值0.05时按0.05计算）。
IgG不做阴性血清对照，只做一份阳性血清对照，做多块板时，其中一块做阳性对照即可血清抗体滴度为阳性孔最高血清稀释度的倒数。A.2.3.5试剂的保存和使用期限
试剂可分多次使用，使用前包被，取样时室温放置时间应尽量短。一20℃可保存一年。运输时需冷藏。
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A.2.4血凝抑制试验
A.2.4.1原理
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猴红细胞上有麻疹病毒受体，遇麻疹病毒可产生凝集现象。若将抗体与病毒（血凝素）预先温育后再加入红细胞则不产生凝集，称为血凝抑制。定量血凝素与不同稀释度抗体（血清）作用后能完全抑制血凝的最高血清稀释度，即为抗体效价。A.2.4.2主要材料
A.2.4.2.1血凝板
6×12或8×12个圆形孔，孔底光滑的U形板A.2.4.2.2稀释棒或定量移液器
稀释棒为优质不锈钢制成，尖端分数瓣，瓣间容量应精确为025mL，稀释棒应标化后使用。定量移液器选用25元L，
滴管用玻璃制成或磨山玻璃管
营工安
个注射器针头制成定量滴头，垂直控制滴下每滴量G
为0.025mL。
A.2.4.2.4尖底小试管
形如离心管，便于血清的吸取。A.2.4.3麻疹血凝素的制备
A.2.4.3.1粗血疑素的制备
选择血凝性状点对的麻疹毒株接种到生长旺盛，形态良好的原代细胞（人美膜、猴肾等）、人二倍体细胞或传代细胞KBMERN、FL、BHKVero等）。接种病毒剂量根据病毒滴度而定原代人羊膜细胞接种病毒后培育于37℃，约在2~3周出现血凝素后每隔3d~5d收获上清液，换以新鲜的维持液音养
如此反复培养数次收获上清液，最后一次将细胞连同培养液置一30℃以下冻化后，沉淀去细胞残渣，教次收获的上清液即为血凝系。原代猴肾细胞A
赔体细胞及传代细胞接种麻疹病毒后，病变发展较快，待病变送“|十十|”并有50%病变细胞脱落时增细胞连同培液置一30℃以下反复冻融三次，低速沉定后最上清液即为血凝素。血凝素效价应在32以上置
A.2.4.3.2血凝素的处理
取一定量粗血激素
30℃保存备用
三角瓶或试管中，加入5%旺温80（工ween-80）并使其最终浓度为0.125%，空温振荡5min，再加人与机凝素等量的乙醛醚（分析纯），用力充分振荡）2min，然后，移人沉淀管内以2000r/min离心10min，小心吸出下部水层，将乙醚排尽至儿乙醚味时为止，即为本试验用之血凝素，加青霉素100U、链霉素100ug，℃保
A.2.4.4猴红细胞悬液的配制O
选择与麻疹血凝素凝集效价高的可脉采血骨间氏(A1scvo液中(阿氏液量为猴红细胞的4倍），4℃保存，一般可用二周。用前以生理盐水洗三次，最后一次经2000r/mim离心10min，弃上清，压积的猴红细胞用生理盐水配成1%浓度用于放验。A.2.4.5血清处理
血清分离后取0.1mL，加等量生理盐水于56℃水浴30min灭活.每管加人0.1mL经2000r/min离心10min处理的压积猴红细胞1滴，充分摇匀后，4℃过夜，次日吸取上清液测定（此时血清稀释度为1：2），
A.2.4.6血凝素滴定
A.2.4.6.1效价滴定
血凝板1~10孔各加生理盐水0.025mL，于第1孔加血凝素0.025mL，混勺后从第1孔移1滴(0.025mL）至第2孔，如此倍比稀释至第9孔（1：2~512），第10孔不加血凝素作为红细胞对照。每孔7
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各加1滴(0.025mL)1%猴红细胞，报勾后静置37℃1h读结果，而凝达十一时的而凝素最高稀释度为其效价，即1个血凝单位。正式试验时采用2个单位血凝素。A.2.4.6.2单位滴定
按上述效价将血凝素稀释成2U(如血避素效价为1：128,稀释成1：64)、1U,1/2U、1/4U,各孔中用生理盐水倍比稀释,再加1滴等量的1%猴红细胞,振勾后,置 37℃1h判定结果,应出现“+十+十十十、十十、十、一”之凝集方能用于试验。A.2.4.7血凝抑制试验
在微孔U形底血凝板中进行，
第2~~9孔每孔加生盐水0.025mL，第9孔为血清对照。第1,2及9孔各加1：2处理好的血清0.025mL，从第2孔开始稀释使血消充分混匀后，再放入下一孔倍比稀释至第8孔。
第 1~8孔各加 2U 而凝素 1 滴,第 9孔加生理盐水 1滴。振勾后置 37℃ 30min。然后每孔加 1%猴红细跑1滴，振句后置37℃1h判定结果判定结果时应先将血凝板倾斜待血清对照孔内的红细胞自由下滑呈泪滴状时即读结果。红细胞下滑与对照相同者为完个抑制。完全抑制的血清最高稀释度即抗体的效价。而清对照不应出现凝集，否则判断时应慎重或再吸收。
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B. 1 病毒分离
B. 1.1 标本收集与处理
附录B
【资料性附录】
病原学诊断方法
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B.1.1.1用}病毒分离的标本类型：麻疹忠者宜在出疹前3d至疹后3d内取咽拭子，尿液标本，不要超过出疹前后5d。
B.1.1.2咽拭子标本：将无菌棉拭了稍生理盐水，反复涂抹患者咽部数次，然后将棉拭子浸于1mL~2mL标本维持液（含500U/ml.~】000U/ml.寿霉素、500μg/mL~1000μg/mL链霉素和2%牛血清TMEM液）巾，并反复挤压后，弃棉拭子，标本维持液中最好加无细胞毒性的制霉菌素50μg/ml.或两性霉素5μg/ml
B.1.1.3尿液标本：尤菌收集30ml～50ml中段尿液-150ml.懂螺旋盖的无菌塑料离心管中，当R尽快冷链送至实验率,2000r/min,离心5min,弃t.清，沉淀用1mL标本维持液重悬，即用于病毒分离：如不能及时进行病毒分离，标本液于一70℃冻存。B.1.2标本接种
上述处理后的标本一70℃冻化次后，取0.3ml,～0.5ml.标不液接种-j生长良好的单层传代细胞系如Vero-SLAM上，置37℃吸附1h~2h后弃液，加人维持液，置37℃培养，次日观察有无细跑毒性，必要时换液。
B.1.3观察细胞病变
接种后每大观察细胞病变(CPE)的进展情况，连续观察7d,如果有特征性的麻疹病毒CPE山现，观察直到75%以上的细胞发牛：病变（CPE+--+-），70%℃冻存；若无CPE，即置一70℃冻化3次，再言传2代。
B.1.4毒株鉴定
可以采用RT-PCR和序列测定等方法进行麻疹病毒的鉴定。参见附录B中B.2。B.2病毒核酸检测
B. 2. 1 标本收集与处理
参考B.1.1,进行标不的收集与处理。在标本的运送过程中，注意低温条件运输，在标本进人实验室后，不要反复冻融标本，以免核酸发生降解。B.2.2病毒核酸提取：使用TRIZOL法提取B.2.2.1取250uL病毒悬液加到1.5ml.离心管中，然后加人750μl.TRIZO1.溶液，混匀5s后离心。
B.2.2.2加入200l.氯仿溶液，充分混匀5sB.2.2.3室温放置10mir.然后在室温，10 000t/min离心20min。B. 2. 2. 4>
将上清液转移到一支新的1.5mL离心中。B.2.2.5再加人500gl.异丙溶液，摇勾10sB.2.2.6案温静置军少15min。
B.2.2.74℃,13000r/min离心25min。B.2.2.8倒掉上清液，加人950uL冰冷的70%乙醇。B.2.2.94,13000r/min离心20min。9
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