本标准是在卫生部发布的《全国临床检验操作规程(第二版)》的基础上，参考美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)标准，结合中国国情及卫生系统的实际情况和要求而制定。本标准规定了制造商和用户对商业性微生物培养基质量检验的试验过程。制造商必须进行检测而无须用户进行检测的培养基列于表1，包括检测每组培养基所需的质控菌株及可被接受的预期结果。用户必须进行检测的培养基列于表2。孵育环境和时间适用于所列的指控菌株，但并不表示这些条件即被推荐用于临床标本。 WS/T 232-2002 商业性微生物培养基质量检验规程 WS/T232-2002 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国卫生行业标准
WS/T232—2002
商业性微生物培养基质量检验规程Performance standard of quality assurance for commerciallypreparedmicrobiologicalculturemedia2002-04-20发布
中华人民共和国卫生部发布
2002-07-01实施
WS/T232-2002
本标准是在卫生部发布的《全国临床检验操作规程（第二版）》的基础上，参考美国国家临床实验室标准委员会(NCCIS)标准，结合中国国情及卫生系统的实际情况和要求而制定。本标准从2002年7月1日起实施。本标准由卫生部医政司提出。
本标准起草单位：北京大学人民医院。本标准主要起草人：张正、杨婧、赵晓涛。本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。中华人民共和国卫生行业标准
商业性微生物培养基质量检验规程Performancestandard of qualityassurance for commerciallyprepared microbiological culture media1范围
WS/T232--2002
本标准规定了制造商和用户对商业性微生物培养基进行质量检验的试验过程。制造商必须进行检测而无须用户进行检测的培养基列于表1，包括检测每组培养基所需的质控菌株及可被接受的预期结果。用户必须进行检测的培养基列于表2。孵育环境和时间适用于所列的质控菌株，但并不表示这些条件即被推荐用于临床标本。
2制造商露进行的试验
2.1质控菌株来源
表1、表2中所有的质控菌株来源于ATCC(AmericanTypeCultureCollection美国标准菌株收藏中心），也可以使用商业来源的ATCC演化的菌株或我国国家菌种库贮存的各级标准菌株。表1、表2中罗列的荫株是评价所列培养基的试验组合中所应包括的最低要求，制造商亦可有目的地使用额外的菌株。
培养基
厌氧羊血琼脂培
厌氧肉汤（含羊血）：
血琼脂-CAMP试验
血琼脂-选择性羊血
琼脂培养基
需氧或二氧化碳
二氧化碳
商业性培养基对制造者质量保证标准孵育时间
24h~48h
24h~48h
中华人民共和国卫生部2002-04-20批准质控茵抹（ATCC号）
脆弱拟杆菌（25285）
产气英膜梭菌（13124)
具校梭杆菌（25586）
厌氧消化球菌（27337)
化脓性链球菌（19615)
肺炎链球菌（6305)
金黄色葡萄球菌（25923)
大肠埃希荫（25922)
金黄色葡翻球茵（33862或
25923)
无乳链球菌（12386）
化脓性链球菌（19615）
化脓性链球菌（19615）
肿炎链球菌（6305）
金黄色葡萄球茵（25923）
奇异变形杆菌（12453）
预期结果
生长，乙型溶血
生长，乙型溶血
生长，甲型溶血
阴性反应（无箭头形成）
阳性反应(形成箭头区）
阴性反应(无箭头形成）
生长，乙型溶血
生长，甲型溶血
抑制(部分)
2002-07-01实施
培养基
苯乙醇琼脂
血培养基
CLED琼脂
CYE/BCYE琼脂
伊红美蓝培养基
Hektoen
麦康凯琼脂
enteric
甘露醇高盐琼脂
分枝杆菌晟琼脂培
二氧化碳
厌氧（不通风）
需氧(通风)
WS/T232-2002
表1(续）
孵育时间
24h~48h
5天内
5天内
24h~48h
48h~72h
质控菌株（ATCC号）
化脓性链球菌（19615）
金黄色耐萄球菌（25923）
奇异变形杆菌（12453)
脆弱拟杆菌（25285）
肺炎链球菌（6305）
绿胶假单胞菌（27853）
肺炎链球菌（6305
大肠埃希菌（25922）
普通变形杆菌（8427）
金黄色葡球菌（25923）
晓肺军团菌（33152）
波兹曼军团菌（33217)
鼠伤寒沙门菌（14028）
宋内志贺菌（9290）
大肠埃希菌（25922）
鼠仿寒沙门菌（14028）
大肠埃希菌（25922）
粪肠球茵（29212)
鼠仿寒沙门茵（14028）
橘氏志贺菌（12022）
类肠球菌（29212)
大肠埃希茵（25922）
大肠埃希菌（25922)
奇异变形杆菌(12453）
鼠仿寒沙门菌（14028）
粪肠球菌（29212)
金黄色葡萄球荫（25923）
24h~48h
可达21天
表皮谢萄球菌（12228）
奇异变形杆菌(12453)
H37Ra结核分枝杆菌
(25177)
1群塔萨斯分枝杆菌
(12478)
1群擦分枝杆菌
(19981)
群胞内分枝杆菌
(13950)
N群偶发分枝杆菌
(6841)
大肠埃希菌（25922）
预期结果
抑制(部分)
生长，黄色中心
生长，脊紫色，抑制蔓延（部分）生长，不均一深黄色
生长，黄绿色荧光
生长，蓝白色荧光
传代生长
传代生长（可能被亚硒酸盐培养基抑制）
传代受抑制（部分到完全）
生长，无色到晓珀色菌落
生长，蓝熙色菌落抑制（部分）生长，蓝至蓝绿色菌落，有熙心生长，绿至蓝绿色茵落
抑制（部分，黄色菌落）
抑制（部分至完全，黄色茵落）生长，粉色菌落
生长，无色菌落，抑制成堆
（部分）
生长，无色菌落
抑制(部分)
生长，48h时茵落呈黄色
生长，48h时菌落呈红色
抑制(部分)
生长，在选择性LJ和选择性
Middlebrook培养基上可能被抑
生长，在选择性L-J和选择性
Middlebrook培养基上可能被
抑制（部分到完全）一仅用于选择性分枝杆菌培养基
培养基
沙保弱葡葡糖培养
SS琼脂
选择性支原体培
肠球菌的选择性培养基，
（含叠氮化物）
肠球菌的选择性培
养基，（不合含叠鼠
化物）
巯基乙酸酯培养基
有或没有指示剂
随基乙酸酯培养基，
富含维生素K和氯
化血红素
管培养基（BHI和
XLD琼脂
注1如无特殊标明，温度为35C。WS/T2322002
表1(完）
孵育时间
可达7天，
25℃~35℃
可达7天，
24h和48h
24h和48h
（塞紧瓶盖）
（塞紧瓶塞）
24h48h
质控菌株（ATCC号）
白色念珠菌（60193或
10231)
馨癣毛癣菌（9533）
鼠伤寒沙门菌（14028）
福氏志贺菌（12022）
粪肠球菌（29212）
大肠埃希荫（25922)
A.niger(16404)
白色念珠菌（10231）
聚癣毛癣菌（9533）
大肠埃希菌（25922）
粪肠球菌（29212）
化脓性链球菌（19615)
大肠埃希菌（25922）
类肠球茵（29212)
化脓性链球荫（19615）
脆弱拟杆菌（25285）
金黄色葡萄球菌（25923）
厌氧消化球菌茵(27337)
普通拟杆菌（8482）
产气英膜梭茵（13124）
大肠埃希菌（25922)
金黄色葡萄球菌（25923）
伤寒沙门茵（14028)
福氏志贺茵（12022）
粪肠球茵（29212)
大肠埃希茵（25922）
注2ATCC是美国标准菌株收截中心的注册商标。注3此要求适用于制造商，用户不必进行检测。生长
预期结果
生长，无色菌落，有或无黑心
生长，无色蔗落
抑制(完全)
抑制（部分至完全）粉红至玫瑰红菌落，有沉淀
在含有放线苗酮的培养基上受
抑制（部分至完全）
在食有驾舞素的培养基上受抑
制（部分至完全）
生长，茵落周国变黑
抑制（部分至完全）
抑制(部分)一-在胆汁七叶昔琼
脂上为无色菌落
生长，菌落周围变黑
邦制（部分至完全）
生长，红色菌落，有黑心
生长，红色菌落
抑制(部分)
抑制（部分至完全，黄色至费红色茵落）
培养基
弯曲菌旗琼脂
病原性奈瑟菌属的
选择性培养基
减少氧气，
WS/T 232--2002
表2商业性培养基的用户质量检验孵育时间
增加二氧化碳，
二氧化碳
注1如无特殊标明，温度为35C。48h
24h~48h
质控菌株（ATCC号）
空肠弯曲菌（33291）
大肠埃希菌（25922）
淋病奈瑟菌（43069或
43070)
奇异变形杆菌（43071）
表皮髓爵球菌（12228）
注2ATCC是美国标准荫株收凝中心的注册商标。生长
预期结果
抑制(部分）
抑制（部分），仅用于含甲氧苄氨嘧啶的培养基
抑制（部分）
2.2质控菌株的保存
保存用于质控目的的菌株的过程必须标准化，以减少污染或者生长特性发生改变的机会，为此可以采用冻存菌种或者采用商业来源的标化菌种。下面的过程（2.3及2.4部分）可用于制备快速生长菌的质控菌种，如葡萄球菌属、多数键球菌属、肠杆菌科及铜绿假单胞菌。在制备和使用奈瑟菌屑、嗜血杆菌属、分枝杆菌属及真菌时须对这些过程做些改变。如果是商业来源的菌株，则按厂家的说明使用。2.3冷冻菌种的制备
2.3.1质控菌种一般由来自ATCC的冻干菌种制备，按ATCC的说明进行复苏。2.3.2用一无菌环，将复苏的菌悬液划线接种于两或三个加有5%羊血的大豆-酪蛋白消化琼脂（TSA），在合适的环境和温度下孵育18h～24h（见表1)。2.3.3孵育后，通过菌落形态检查纯度。如有必要则进行生化试验。用足量菌悬浮于50mI～100mL的防冷冻培养基中。防冷冻培养基可以是无菌脱纤维羊血、免血、脱脂牛奶或大豆-酪蛋白消化肉汤（TSB），其中包含终浓度为10%到15%的甘油。如果这些冻存菌种要用以接种待测培养基，则在冰冻前应将悬浮物浊度调至0.5麦氏标准（1～2×10°CFU/mL）。淋病杂瑟菌的液调至1.0交氏标准。细菌悬液必须含有足量有活力的细菌，以便在冻融一个循环后仍能继续传代。2.3.4将少量（0.5mL~1.0mL）菌悬液分装到小的无菌玻璃瓶或塑料瓶中。制备足够量的质控菌种瓶以够一年之用。在进行质控检测前检查纯度。2.3.5将小瓶置于一50C或更低的温度保存备用。可将小瓶在超低温冰箱或液氮罐的气相中保存。在低于一70C的温度下菌株可以无限期保存，在一50℃～一70℃仅能保存一年，不应在一50C以上的温度保存。
2.3.6当需要时，从冰箱或液氮罐中取出一瓶质控菌种并迅速融化，即可用于试验或制备工作质控菌种。也可用次级培养物进行检测，可通过接种一个固体培养基来获得单个的菌落。孵育后，用单个的菌落做试验或接种琼脂斜面或平板用做主要工作质控菌株。未用的细菌悬液应弃掉，不要重复冷冻后使用。
2.4工作质控菌种此内容来自标准下载网
2.4.1用冻存的质控菌种最多向下传三代，就应更换质控菌种。过多的传代会增加表型改变的机会。2.4.2制备工作质控菌种，用冻存的质控菌种接种一个琼脂斜面或平板，孵育过夜或得到足够的量为止。这些工作琼脂斜面或平板上的培养物应贮存于2C～8℃，或者室温，可放四个星期。菌种再传代后应检查纯度和典型的菌落形态。2.4.3工作冻存菌种也可使用2.3条中所述的步骤由冻存的质控菌种制备。原代贮存瓶或工作质控菌株均可用来接种待测培养基。
2.4.4厌氧菌的工作质控菌株应在肉培养基或其他适宜的厌氧肉汤培养基中保存，或使用冷冻保存4
菌种，不应使用琼脂斜面或平板。2.5培养基检测过程
WS/T232-2002
2.5.1将工作质控菌株在培养平血上转种，孵育后取3~5个单个的菌落悬浮于少量的灭菌TSB中，孵育4h~5h。用分光光度计调整浊度至0.5麦氏标准或在625nm吸光度值为0.08~0.1。或者由培养过夜的生长物直接制备菌悬液，用同样方法调节浊度。不论使用哪种方法进行接种物的浊度测定，都应使菌落计数达到(1～2）×10°CFU/mL。如果冻存菌种已被调整到此范围，则稀释物可由融化的菌种直接制备。为了在冷冻后获得适宜活力的细菌，对于对冷冻敏感的微生物（如淋病奈瑟菌），冻存时的计数需达到（3～6)×10°CFU/mL（1.0麦氏）。2.5.2为检测培养基的营养能力，将基础细菌悉液用生理盐水或纯净水1：100稀释，在每个待测培养基上用10μL接种环或0.01mL稀释悬液划线接种，使浓度达到(12)×10*CFU/碟。如果这样操作不能保证在特定的测试培养基上形成单个的菌落，则应再10倍稀释接种物。2.5.3为检测选择性培养基的抑制能力，将基础细菌悬液用生理盐水或纯净水1：10稀释，在每个测试培养基上用10μL环或0.01mL稀释悬液划线接种，使浓度达到（1～2)×105CFU/碟。为防止在选择性培养基上生长过度，可能需要10倍稀释接种物。2.5.4为检测培养管的生长效果，用10μL环或0.01mL基础细菌悬液接种。如有需要，调整接种物的浓度。
2.5.5将接种后的培养基在表2的条件下孵育，正常情况下在35℃孵育18h～24h或42h～48h。巧克力琼脂和选择性分离病原性奈瑟菌属的培养基必须在5%～10%二氧化碳环境中孵育，在18h～24h及42h～48h检查结果。对于厌氧菌，通常在富含二氧化碳的厌氧环境中培养至少48h。对于弯曲菌属琼脂，在42℃富含二氧化碳微氧环境中孵育48h。2.6如果解释
如果检测菌株在表1所列培养基中充分生长并形成典型的菌落形态，则认为培养基效果满意。对于选择性培养基，某些菌被抑制，而所需要的细菌充分生长。在某些情况下，必须产生表1所示的适当的颜色或溶血反应。
2.7向用户报告质控数据
2.7.1表1罗列的培养基
制造商应该用标签、技术手册或其他的文件表明经检测产品符合本标准。制造商还应标示出无菌试验、pH测定等其他试验。
2.7.2表1未列的培养基
制造商必须向用户报告所需的特殊质控步骤，包括：检测所用菌种、PH、操作标准的评价、待测菌株所产生的反应以及对污染的评价。每批检测结果不必逐一报告，但应提供证明表明达到产品的质控标准。报告中需注明批号和保质期。
表1中未列的培养基应由用户进行检测。2.8运输和贮存
培养基在运输时应防止过分失水，并应进行机被保护及保温。制造商在制定失效期时，应考运输和贮存条件。
3用户所需进行的试验
3.1操作试验
如前所述，所有用户制备的培养基应参照以上规定进行检测。对于表1未列的培养基及下列培养基即弯曲菌属琼脂及选择性分离病原性奈瑟菌属的培养基（列于表2），用户必须对每批培养基进行检测。从其他地方以非商品形式分发获得培养基的用户使用时也应参照本文作中的规则。生产者（制备培5
WS/T232—2002
养基的试验室)也应执行适用于商家的质量检验。3.2其他的质量保证标准
使用商业性培养基的用户必须检查每批培养基：平血的裂纹，充碟不均，培养基裂纹，溶血（血琼脂），冷冻，过多的气泡或斑点，污染。3.3缺陷性报告
如果发现培养基有缺陷，实验室应记录此结果并通知制造商。其中包括：不能生长，不能产生预期大小的菌落，或提供污染、干燥、破裂的证据。制造商应有适当的改进措施，这也应该进行试验室记录。这些情况不一定改换培养基，用户可以加做试验以查明原因并加以纠正。表3培养基中英文名称对照
培养基中文名称
厌氧肉汤
厌氧羊血琼脂培养基
血琼脂-CAMP试验
血琼脂-选择性羊血琼脂培养基
血培养基
弯曲菌属琼脂
CLED琼脂
CYE/BCYE琼脂
伊红美蓝培养基
Hektoen enteric琼脂
麦康凯琼脂
甘露醇高盐琼脂
分枝荫属琼脂培养基
莱乙醇琼脂
沙保弱葡葡糖培养基
SS琼脂
肠球菌的选择性培养基（含叠氨化物）肠球菌的选择性培养基（不含叠氮化物）病原性奈瑟菌属的选择性培养基选择性支原体培养基
培养基，富含维生素K和氧化
殖基醋酸酯
血红素
培养基，有或没有指示剂
硫基乙酸酯
管培养基（BHI和TSB)
XLD琼脂
anaerobic broths
培养基英文名称
anaerobic sheep blood and laked blood agar mediablood agar-CAMP test
blood agar-selective sheep blood agar mediablood eulture media
campylobacter agar
CLED agar aerobic
CYE/BCYE agar aerobie
eosin methylene blue media
Hektoen enteric agar aerobicmacconkey'agar aerobic
mannitol salt agar aerobic
mycobacteria agar media
phenylethyl alcohol agar
sabouraud dextrose agar aerobicsalmonella shigella
selective media for enterococci,with azideaerobicselective media for enterococci,without azideaerobicselective media for pathogenic Neisseria speciesselective mycology media
thioglycolatemedium,enrichedwithvitaminKandhemin aerobicthioglycolate medium.with or without indicator aerobictubed media(BHI and tryptic soy broth)XLD(xylose lysine desoxycholate) agar aerobicWS/T232-2002
中华人民共和国卫生
行业标准
商业性微生物培养基质量检验规程WS/T232--2002
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售开本880×12301/16印张3/4字数15千字2002年8月第一版2002年8月第一次印刷印数1-800
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