WS 275-2007 白喉诊断标准 WS275-2007 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS11.020
备索号：20493—2007
中华人民共和国卫生行业标准
WS275—2007
白喉诊断标准
Diagnostic criteria for diphtheria2007-04-17发布
欢光生电迎临
2007-10-15实施
中华人民共和国卫生部发布
根据《中华人民共和国传染病防治法》制定本标准。WS275--2007
按照国家质检总局国家标准委公告（2005年第146号），GB15997—1995白喉诊断标准及处理原则>自本标准实施之日起废止。本标准的附录A是资料性附录,附录B是规范性附录。本标准由卫生部传染病标准专业委员会提出。本标准由中华人民共和国卫生部批准。本标准起草负责单位：黑龙江省疾病控制中心、中国疾病预防控制中心，哈尔滨医科大学附属第一临床医院。
本标准主要起草人苏华、张荣珍、殿大鹏、马美骥。1范围
白喉诊断标准
本标准规定了白喉的诊断依据，诊断原则，诊断和鉴别诊断，本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及其工作人员对白曦的诊断和报告。2术语和定义
下列术语和定义适用于本标准
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2.1异染颗粒metachromaticgranule用奈恶（Neisser）染色或阿尔伯特（Albert）法染色，白喉杆菌菌体两端或一端可见着色较深的浓染的颗粒。
2.2自喉毒素diphtheriatoxin
种毒性强、具有高度抗原性的蛋白质，由A，B两个肽链经二硫键连接而组成2.3假膜pseudomembrane
在扇桃体，聘弓或聘垂处，由炎性分泌物形成的致密，不易素离的白色或灰白色的膜2.4毒源菌和非毒源苗exotoxin-producing strain and nonexotoxin-producing strain产生外毒素的为毒源菌，即带有毒素生物结构基因编码。非毒源菌株不产生外毒素，即不带有毒素生物结构基因编码。
3诊断依据
3. 1流行病学史
3.1.1多在秋冬季节发病，参见附录A3.1.2一周内与白喉病人有直接或间接接触史3.2临床表现
潜伏期1d～7d，多数为2d～4d。根据病变侵犯部位分为以下四种类型：3.2.1咽白喉最常见，占发病人数的80%左右。根据病情轻重又分为4型3.2.1.1轻型全身及咽部症状均较轻，假膜呈点状或小片状，常局限于扁桃体上，有时可无假膜，但白喉杆菌培养阳性。
3.2.1.2普通型全身症状有轻至中度发热、乏力、食欲减退恶心、呕吐、咽痛等，伴有扁桃体肿大，表面有灰白色片状假膜，可逐渐扩大，延及咽喉壁。常有颌下淋巴结肿大及压痛。3.2.1.3重型全身中毒症状明显，有高热，面色巷白、明显乏力、恶心、取旺、咽痛明，严重者出现血压下降。扇桃体和咽部水肿，假膜延至咽部及鼻咽部，甚至整个口腔，呈灰白色和黑色。口腔有腐臭味，颈部淋巴结肿大，颈部有明显的软组织肿胀，称为“牛颈”，常并发心肌炎和周围神经炎3.2.1.4极重型起病急，病情进展快。假膜范围广泛，多呈黑色，并有局部坏死，口腔有特殊的腐臭味，扇桃体和咽部出现高度肿胀，可影响呼吸和春咽，颈部到锁骨上窝软组织明显水肿，出现重度“牛颈”。全身中毒症状严重，并发有严重心肌炎和周围神经炎，亦有血小板减少、出血等表现，病死率极高3.2.2喉白喉原发性喉白喉少见，多为咽白喉向下扩散所致。起病较缓，全身中毒症状轻，起病时呈大样咳嗽，声音晰匾，甚至失音，重者出现吸气性呼吸困难，呼吸道梗阻而室息。3.2.3鼻白喉原发性鼻白喉少见，多由咽白喉扩展面来。全身症状轻，局部表现为鼻塞、流浆液血性鼻递，鼻孔周围皮肤红，糜烂或结痛，鼻前庭或中隔上可见白色假膜。WS275-—2007
3.2.4其他部位的白喉其他部位的白喉少见，皮肤、眼结膜、耳、外阴、新生儿脐部、食管等处偶尔可发生白喉。均有局部炎症、假膜形成，全身症状轻，但在疾病传播上有重要意义。3.3实验室检查
3.3.1白喉杆菌分离培养阳性并证明能产生外毒素，检测方法见附录B。3.3.2咽拭子直接涂片镜检可见革兰氏阳性棒状杆菌，并有异染颗粒，检测方法见附录B，病原学参见附录A
3.3.3病人急性期和恢复期血清特异性抗体四倍或四倍以上增长，检测方法见附录B。4诊断原则
根据临床表现及实验室检查，结合流行庭学史进行综合分析，做出诊断。HOUS
5诊断
5.1疑似病例
符合3.2.1或3.2
5.2临床诊断病例
号3.1。
疑似病例加3.3
5.3确诊病例
疑似病例同的
.3.1或3.3.3
6鉴别诊断
6.1咽白喉需与
下列疾病鉴别
起病急，高热，咽部疼痛较重，扇机体充血水肿明显，表面脓性分泌物附着疏松，6.1.1急性扁机体炎
不超出扇桃体范自，
易擦去
多在口腔粘膜两侧，早乳白色斑换状融食，疏松易剥离，全身中睡症状轻，多见于6.1.2鹅口疮
久病体弱幼儿或长期质用广谱抗生素者本病主要在齿龈或咽部有坏死，贵疡和假膜形成，口有黑臭除片可见梭形杆菌6.1.3奋森咽峡
和螺旋体，
6.2喉白喉应与下列疾病鉴别
该病多教生于婴幼儿，起病急，呼吸围难有日轻夜重现象。呵部无假膜形成。6.2.1急性咽炎
抢咳明显，多无发热，咽部无假膜，可有高限性肺气肿，肺不张，纵隔摆异物吸人
6.2.2气管异物
动等。
6.3鼻白喉应与下列疾病鉴别
6.3.1鼻腔异物有异物史直接规检可分泌物不量血性，无慢膜
6.3.2慢性鼻炎
A1病原学
附录A
（资料性附录】
病原学、流行病学
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白喉杆菌为革兰氏阳性细菌，约（1.5um～4gm）×（0.5μm~1.0μm）大小。菌体一端或两端膨大呈棒状.形态常呈多样化，不运动、无假膜，不声生英胞，用Neisser染色，菌体黄褐色，颗粒呈紫黑色。Albet法染色，菌体蓝绿色，颗粒蓝黑色，由于菌体着色不均匀，面出现异染颗粒，异染颗粒是白喉杆USE
菌形态学诊断的重要依据。
白曦杆菌在含血，血清和鸡我每养基士生长良好生长的量适温度效35℃~37℃，pH7.2~7.8白喉杆菌比较脆弱.5
对寒冷及干燥耐受性比
较强，对多种抗生素，
白喉杆菌产生的
A.2流行病学
人类是白喉
染性，不典型和车
白喉主要通
在分泌
崇或红霉索中
普通消毒藏在常用浓度下几分钟内可杀死白喉杆菌。但在限暗处能存活1一个月对磺胺类药物耐受性比光其是
，是致病主要
知的唯一宿主，病人和有毒菌株的带菌者为唯一的传染源，患者在潜伏期即有传者容易误诊，所以在传播白喉中的危害性更大。道飞沫传播，也可以通过污染的器具和食物传播，外伤性感染主要通过破摄的皮更感染。一年四季均可发生，但秋冬季发病较多。白喉主要为儿童传染病，1～5肤或呼吸道以外
岁发病率最高。
行白喉疫苗免疫预防后，患者年龄构成尚大年龄推移并导高度教发的趋势。S
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B.1白喉杆菌的分离培养和监定
B.1.1标本的采集
B.1.1.1病人
附录B
（规范性附录）
白喉杆茜实验室检测方法
以无菌棉拭子或无菌棉拭子吸附新鲜配制的亚碎酸钾，甘油氧化钠溶液保存液·从疑似患者咽喉假膜边缘薰取标本或同时采取鼻咽拭子，迅速放人灭菌试管内同时送检。B.1.1.2带菌者或疑似病人
由于未见到明显的假膜，故应采集鼻咽部或扁梯体粘膜上的分泌物送检。B1.2白喉杆菌的分离培养：鼻咽拭子接种吕氏血清斜面（非选择性培养基）或亚蹄酸钾培养基（选择性培养基)等作细菌培养观察鉴定B1.2.1菌形
白喉杆菌为革兰氏阳性，细长星棒状，排列不规则，常呈人字形，栅栏状。Neisser或Albert法染色可见异染颗粒。
B1.2.2培养及生化特性
白喉杆菌在血平板上形成灰白色、圆形光滑菌落，有溶血环。在亚碲酸钾血平板上，菌落呈中心黑色或灰黑色，边缘带灰色。在尿素卵黄双糖培养基上，经37℃12h~48h培养后可做初步鉴定。白喉杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、糊精，均产酸不产气，不发酵蔗糖、甘露醇、乳糖、可溶性淀粉。依据形态、培养、生化特性可将白喉杆菌分为轻、中、重三型。B.1.3自喉杆菌外毒索鉴别试验
白喉杆菌产生的外毒素是其主要致病因索，只有那些拱带阝棒状杆菌哮菌体的菌株才能产生外毒素，白喉杆菌外毒素鉴别试验可测定白喉杆菌产生外毒的能力，常用的方法有两种B.1.3.1艾立克(Elek)平板毒力试验将Elck培养基加热熔化，冷却至50C左右混勾后用无菌镊子取预先制好的白喉抗毒素（每毫升含1000IU~3000IU）干燥滤纸条，贴于平板中央表面，置37℃孵箱内约0.5h，烘干表面水分时间不宜过长，以免影响结果。
将试验菌株划线接种于平板上成一直线，使其与抗毒素滤纸成直角相交。同一平板可同时接种4~5个标本。同时要用已知有毒菌株作阳性对照。于37℃培养48h～72h，如发育良好即可观察结果。阳性者于距纸条稍远处沿接种线开始有絮状沉淀线出现。如72h仍未出现沉淀线者可作阴性报告。B.1.3.2豚鼠皮内接种毒力试验
将待试菌株接种吕氏血清斜面，于37℃培养16h~18h，加肉汤1mL，刮下菌苔，制成悬液，吸取此菌液0.5mL，加人3.5mL肉汤中，混匀后即可应用。同时要用已知有毒菌株作对照。选体重250g左右豚鼠两只，只在试验前24h腹腔注射白喉抗毒素1000IU.作为对照动物：另一只不注射抗毒靠，作为试验动物。接种前先将动物腹部向上，固定在架上。以温水洗净腹部后剃毛，剃毛后再用无菌生理氯化钠溶液擦洗一次待干，用1mL注射器吸取菌液，准确注射0.1mL于皮内，可同时接种6~8株菌。注射后4h，给试验动物注射抗毒素4000TU，以免因毒株毒力太强而致死。注射后经24h，48h，72h，各观察皮内反应一次。对照动物无论接种有毒或无毒菌株，均应无局部反应，试验动物在注射有毒株的部位，于24h呈红肿，48h在红肿部位边缘有化脓性病变，72h可见硬块出现灰黑色坏死斑，无毒的菌株则无病变。动物毒力试验也可应用家免作试验动物。B.2白喉抗体测定（间接血凝法）B.2.1原理
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间接血凝法是利用红细胞作为载体，并经过一定处理后，使蛋白质抗原吸附于红细胞表面制备成致敏红细胞。然后用致敏红细胞来测定相应的微量抗体。当特异抗体存在时，发生抗原抗体结合，红细胞出现特异性凝集，为阳性反应。B.2.2材料
B.2.2.1抗原
作致敏红细胞用。白哦类毒素含量为20L//mL~30L1/mL以上。B.2.2.2标准抗毒素
每毫升含10个国际单位。用以测定致敏红细胞效价，用前须进行56亡，30min灭活。B.2.2.3试验溶液配制
B.2.2.3.10.15mol/L磷酸盐和食盐溶液配制B.2. 2. 3. 1. 10. 15mol/L Na, HPO,NaHPO.:12H.O(M.W=358.16)53.72g蒸馏水至
B.2.2.3.1.20.15mol/LKH,PO.
KH.PO.(M.W-136.09)
蒸增水至
B.2.2. 3. 1. 3 0. 15mol/L NaCINaCI(M.W-58. 45)
蒸馏水至
B.2.2.3.2pH7.2磷酸盐缓冲液（P.B.S)0.15mol/LNazHPO.
0.15mol/LKH,PO
0. 15mol/L NaCI
配后测PH值，灭菌后备用。
B2.2.3.3pH6.4磷酸盐缓冲液(P.B.S)0.15mol/LNagHPO,
0.15mol/LKH.PO
0. 15mol/L NaCl
配后测PH值+灭菌后备用
B.2.2.3.4PH8.2磷酸盐缓冲液(P.B.S)0.15mol/L.NazHPO,
0. 15mol/L KH,PO.
配后测PH值.灭菌后备用
B.2.2.3.5戊二醛稀释液
PH8.2磷酸盐缓冲液（P.BS)
0. 15mol/L NaCl
蒸馏水
灭菌后放冷库备用。
B.2.2.3.61%戊二醛溶液
25%皮二醛溶液
1000mL
1000ml
1000mL
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戊二醛稀释液
B.2.2.3.71%辣酸溶液
蒸馏水加至
4C避光保存可用一周，用前以生理盐水稀释至1：20000。B.2.2.3.8红细胞保存液
葡萄糖
枸酸钠
用 10糖酸E
蒸溜水加至
服HOU
B.2.3致敏红细胞制备
选择健康绵羊静脉来品人红细胞保存液中（红细胞与保存液比为11)，摇匀放冷库（2℃~8℃）48h.离心奔上清/用车理盐水洗涤红细胞三次，每次离心（2000mmin2500r/min）20min~25min，弃上清得压机红细包
B.2.3.2红细胞醛化
取上述压积红细胞1份，加人24份冷却的1%戊二醛泽液中，放2℃~5℃同定时间大于等于30min，每5min一m器动一次，高心c2000r/min，10mim）弃上清，用生理盐水洗五次，再用蒸馏水洗五次，最后用生理热水配成10%红细胞悬液，加人1：10000硫柳汞防腐，放2%B.2.3.3红细服致域
8冷库备用。
10%醛化红胞液，白类用pH7.2磷酸盐缓冲液（P.B.S）稀释至2.5%后进行深酸处理。B.2.3.3.1耗酸处理
2.5%红细胎
次）.然后用pH
如1：10000的鞋酸
份：混匀后放450或37℃水浴30minc每5min~6min摇BS）洗涤三次（2000r/min~2500r/mm，5mmm~6min），最后用酸盐缓冲液（P
PH6.4磷酸盐螺滑液口BS)配成2.B.2.3.3.2致敏
6%群化红细脑县液。
口精制白喉类毒素一份(25LT/mL）加pH6.4磷酸盐理冲液（P.B.S）三份置2.5%棘化红细胞
#常播动），离心弃上清，用0.5%免血清生理水洗量二次，再用0.5%免血45C或37℃水浴30mm折
清生理盐水配成2.5%红细能液
B.2.3.4对照红细胞制备
2.5%辑化红细胞一份加份4磷酸盐缓冲液（P.B置45%或37℃水浴30min（领经常播动），离心弃上清，用0.5%免血清生理水涤红细胞二次，再用免面清生理盐水配成2.5%对照红细胞悬液。
B.2.4效价滴定
B.2.4. 1致敏红细胞、敏感度的测定将标准白喉抗毒素用0.5%免血清生理氯化钠溶液先行稀释使每毫升含1个单位，然后进行适当倍比系列释，每个稀释度取25mL加人血凝板孔中，再加人致敏红细胞25mL，摇勾放37℃2h，取出判读结果或放2℃～10℃冰箱，次日判读结果，以“+十\为凝集试验终点。同时设立鞋化红细胞和致敏红细胞对照：）不同稀释度抗血清加释化红细胞，以检查抗血清有无非特异性凝集：b)0.5%免血清生理氟化钠溶液加致敏红细胞以检查红细胞有无非特异性凝集。以上两种对照皆为阴性试验才能成立，否则应重试。B.2.4.2待检血清处理
a）待检血清经56℃30min灭活
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b）醛化红细胞吸收，吸收方法：待检血清1份加50%醛化红细胞2份，放37℃1h~2h，离心况淀，吸取上清即为12稀释的血清样品。B.2.4.3待检血清滴定
先在血凝板中每孔加人0.5%兔血清生理氯化钠落液25L，再将25L待检血清滴人第一孔中，使与0.5%免血清生理氧化钠溶液混合，每孔均取25uL，加人到第二孔中混勾，进行系列稀释。最后一孔取出25mL弃掉。取25L0.5%致敏红细胞加到每个孔中，然后摇勺，放37℃2h，或放2℃~10℃冰箱内次日判读结果，以“十十”为集试验终点。每份待检血清设立释化红细胞和致敏红细胞阴性对照，每血凝板设定阳性对照。下载标准就来标准下载网
2符检血清果社一待检血清多血病量危后准而情些点磷样压所白单位数。B.2.4.4结果计算
例如标准白喉抗毒素（10O%
48.售有0.0048IU/mL，而特检血清终点稀稀释度为
释度为1·8.于是其单位为0.08810/B.2.4.5结果判定标准
a）颜集的红细胞购了地铺在孔底形成一薄雲为b）疑集的红细跑本同动，只是在此薄层的底部有银弱红圈为“十
底形成的薄层，
松散的红图为“十
c）凝集的红细
d）疑集的红细胞不孔底形成一园圈，周圈可见少量的红级细胞比对照圆圈精大为“十”
e）红细胞在
成紧密的圆圈成园点为
影响血凝试验的
确性与敏感度固素很多，如用具的清洁，材料的标准化，操作的细致等。B.3酶联免疫吸附试验检测白喉毒素抗体B.3.1原理
和或体上白喉类毒素捕提持检血清中相应抗毒素抗体，再用每标记的抗人尼G抗体利用包被在吉
去掉反应（抗原抗件
B.3.2材料
B.3.2.1抗原
标记抗体），利用底物使酶量包而测知是否存在抗体。/mL以上。
精制白曦类毒素
B.3.2.2结合物
羊抗人IgG酶标记气体
B.3.2.3参考血清
多份间接血凝法阳性高效价血消量合为阳性参考血清，多份阴性血清混合为阴性参考血清。或试剂盒提供的参考血清，
B.3.2.4被检血清
白喉病人和健康者血清，56℃30min灭活B.3.3方法及步，按试剂盒使用说明书进行。WS275—2007
参考文献
1. Vaccines and Biological World Health Organization, WHOrecommended standards for surveillanceof selected vaccine-preventable diseases[R.Geneva:WHO.2003.2.连文远.计划免疫学，第二版［MI.上海：上海科学技术文献出版社，2001.404-4173.张延龄，张辉疫苗学［M.北京：科学出版社，2004.837-853.4.彭文伟，传染病学，第六版[M.北京：人民卫生出版社，2004.161-164.5.李兰娟.传染病学[M.北京，高等教育出版社，2004.118-121.6. National Committee for Clinieal laboratory Standards. USA Performance standards for antimicro-bial susceptibility testing:twelfth infortmational supplement[R].Arlanta;CDC,2002.7. Gubler J,Huber-Schneider C,Gruner E.et al, An outbreak of nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae infection single bacterial clone causing invasive infection among Swiss drug usersJ]. ClinInfectDis.1998,271295-1298.
8. CDC. Respiratory diphtheria caused by Corynebacteriun ulcerans Terre Haute, Indiana, 1996.MMwR MorbMortal wklyRep.1997.46 : 330-332.9. Wong TP,Groman N, Production of diphtheria toxin by selected isolates of Corynebacterium ulcerans and Corynebacterium pseudotuberculosis[J7. Infect Immun. 1984,43 : 1114-1116.1o. Galazka AM,Robertson SE,Oblapenko GP.Resurgence of diphtheriaJI. Eur J Epidemiol. 1995,1195-105.
Il. Galazka A, Tmplications of the diphtheria epidemic in the former Soviet Union for immunizationprograms[J].J Infect Dis, 2000,181 Suppl 1 : S244-24812.TharmaphornpilaxP,Yoocharoan P,Prempree P,et al. Diphtheria in Thailand in the199osJ.JInfectDis.2001,184:1035-1040,13.刘德，微生物学检验.第二版[M.北京人民卫生出版社，2005.252-256.
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