DB32/T 1165-2007 鸡肝中利巴韦林及其代谢物残留总量的测定 液相色谱-串联质谱法 DB32/T1165-2007 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS65.020.01
备案号：21646-2008
苏省地
方标准
DB32/T1165—2007
鸡肝中利巴韦林及其代谢物残留总量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of total residues of ribavirin and its metabolites inchicken Iiver-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method2007-11-26发布
2008-01-26实施
江苏省质量技术监督局发布
DB32/T1165—2007
为保证动物性食品安全，维护人民身体健康，特制定鸡肝中利巴韦林及其代谢物残留检测方法。本标准按GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T1.2-2002《标准化工导则第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》的要求进行编制。本标准的附录A为资料性附录下载标准就来标准下载网
本标准由江苏省农林厅提山。
本标准由江苏省备产品质量检验测试中心起草。本标准主要起草人：朱永林、陆桂萍、时勇、贡工清、邵德住、毕昊容、蒋大梅、吴琼、冯群科。1范围
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鸡肝中利巴韦林及其代谢物残留总量的测定液相色谱-串联质谱法
本标准规定了液相色谱-串联质谱（LC-RS/MS）法测定鸡肥中利巴韦林及其代谢物残留总量的原理测定方法、检出限、准确度和精密度。本标准适用于鸡肝中利巴韦林及其代谢物残留总量的检测，检出限为0.5ug/kg，2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而戎为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的弓用文件，其最新返本适用于本标准。CB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法3原理
试料中残留的利巴韦林代谢物经磷酸酯酶水解成利巴韦林原药，与试料中残留的原药一起，经提取、净化后，于液相增串联质谱仪上测定，同位素内标法定量。4测定方法
4.1试剂和材料
除特别注明外，本标准所用试剂均为分析纯试剂：水为符合GB/T6682-1992规定的一级水。1.1.1甲醇：色谱纯。
甲酸：色谱纯，96%，
乙酸铵
冰乙酸
氯化钠
氨水：密度0.88g/mL。
磷酸酷酶：0.8U/uL
乙酸铵缓冲液（250mmo1/L，pF4.8）：称取乙酸铵18.12g土0.01g，水约700mL使溶解，冰乙酸调至pH值为4.8土0.1，再加水稀释至1L，摇匀，即得。4.1.9
乙酸铵缓冲液（250mmo1/1.pll8.5）：称取乙酸铵18.12g土0.01g，加水约700mL使溶解，用氨水调至pl值为8.5土0.1，再加水稀释至1L，摇，即得。4.1.10100rmmol/L甲酸率液：称取甲酸4.8g土0.1g，加水稀释至1000mL，摇勺，即得。PBA苯基硼酸回相萃取柱：100mg/1mL。4.1.11
标准品：利卫韦林，纯度≥98%。4..12
同位素内标：3C，-利巴韦林，纯度≥98%。4.1.13
4.1.14标准储备液：称取利巴韦林标准品10mg（精确至0.01mg），宵100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释刻度，摇匀，得到0.1mg/mL的准储备液，置-18℃以下冰箱中保存，有效期6个月。4.1.15标准工作液：月移液管吸取标准储备液1mL置100ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到1.0ug/mL标准工作液，置4℃~8℃保存，有效期1个月。求
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4.1.16内标储备液：称取\c.-利巴韦林10mg（精确至0.01mg），置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，操匀，得到0.1mg/mL的内标储备液，置-18℃以下冰箱中保存，有效期6个月。4.1.17内标工\液：用移液管吸取内标储备液1mL置100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到1.0μg/mL内标工作液，置4℃～8℃保存，有效期1个月，4.2仪器利设备
4.2.1液相色谱一串联质谱仪：配电喷雾离子源。4.2.2
组织匀浆器
电子天平：感量0.01mg。
离心机：转速不低于3000r/min。4.2.4
涡旋混合器
恒温烘箱
固相荐取装置
4.3测定步骤
4.3.1料的制备
取绞碎后的供试样品，作为供试试料，置-18C以下冰箱一冷冻保存，冬用。另准备牢白样品，绞碎后置-18℃以下冰箱中冷冻保存，作为空户试料备用。4.3.2水解
称试料1g（精确至0.01g）T10mL具塞离心管中，加入内标工作液10μL，再加入2mL100mmo1/L甲酸溶液，加盖后涡旋2min，3000r/min离心10min，吸取上清液，于残渣十再加入2ml100mmo1/1甲酸溶液，司法操作，合并两次上清液，用氨水调pH值为1.8二0.1，加2mLpH.8的乙酸铵缓冲液，混匀，再加入20uL磷酸酪酶，加盖后涡旋1min，于恒温烘箱中37℃培养2h。取出后冷却至室温，加氟化钠使饱和，用氮水请pH值至8.5土0.1，混匀，3000/min离心10min，取上清液备用。4.3.3净化
将PBA小柱装好，依次用1mL100:r.c1o1/甲酸溶液，3clLpH8.5的乙酸铵缓冲液过柱，然后将4.3.2的上清液上样至固相萃取小柱中，再用3mLpH8.5的乙酸铵缓冲液淋洗，拉干，用1mL100mmo1/L甲酸溶液洗脱，抽干，收集洗脱液，涡旋0.5min，过0.45滤膜，供测定。4.3.4标准测定溶液的制备
称取空白试料1g（精确至0.01g）于10mL具塞离心管中，加入标准工作液适量，同4.3.2和4.3.3步骤操作，得到适宜浓度的标准测定溶液，供测定，4.3.5测定
4.3.5.1色谱条件
色谱柱：C150mm×2.1mm（i.d.），粒径5μm；流动相：日醇-0.1%甲酸溶液（20:80），用前过0.45Hm滤膜，脱气：流速：0.3mL/min：
柱温：30℃：
证样量：25叫L。
4.3.5.2质谱条件
扫措方式：正离子扫措：
检测方式：多反应监测：
电离电压：3.8kV；
源温：320℃：
械撞气：氩气，3.0×10*mbar；驻留时间：0.5s
定性、定量离子及对应的碰撞电压：见表1表1利巴韦林和内标物的监测离子和碰撞电压日标化合物
利巴韦林
13C，利巴书（内标）
注：*为定量离子。
4.4结果与计算
4.4.1定性判断
母离子
华离子
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截撞电压
在相同试验条件下，试料中待测药物与利巴韦林标准物质的保留时间一致，且监测离子相对于基峰的丰度比符合表2的要求，可判定该试料中存在利已韦林残留。表2试样离子相对丰度的允许偏差范围相对十度
>29-50
>10~20
4.4.2定量方法
允许偏差
以利巴韦林定量离了与内标校正离子（表1）峰面积之比选行单点或多点校准定量，标准测定溶液和试料测定溶液中利巴韦林的响应值均应在仪器检测线性范围内：色谱图参见附录A。按式（1）计算试料中利巴韦林及其代谢物的残留总量（以利巴书林计，gkg）：X=AxAs×CgxVs
ArsxAsxm
式中：
试料中风巴韦林及其代谢物的残留总量，以利巴韦林计，学位为微克每千克（ug/kg）试料测定溶液中利巴书林定量离子色谱降的峰宜积A
一试科测定溶液中内标校正离子色谱峰的峰面积一标准酒定溶液守利巴书松定量离子色谱峰的峰面积-标准测定溶液中内标校正离子色谱峰的峰面积：-标准工作液中利巴韦林的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL)：标准工作液取用量，单位为微升（uL)：试料的取样量，单位为克（g)。注：最终测定结果用平行测定的算术平均值表尔，保留3位有效数学。5检出限、准确度、精密度
检出限
本方法在鸡肝中的检出限为0.5ug/kg。准确度
本方法在1.0ug/kg~10μg/kg的添加水平上的回收率范封为60%~120%。5.3
精密度
本方法的批内变异系数≤20%，批间变异系数≤20%。DB32/T1165—2007
附录A
（资料性附录）
利巴韦林和内标的对照色谱图
A.1和去韦林和内标的对照色谱图见图A.1。RT:0.30-300SM:11G
40D30-
200 30
imre (mn)
m/z250>113
m/z245>113
m/z245>96
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EE-1CmSRM
M623456
EC0-113M5
AL:138
GeistSi0m
bc.113gNx
GtstSTQm
利巴韦林和内标的特征离子色谱图图A1
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