DB 33/T 428-2003
基本信息
标准号： DB 33/T 428-2003
中文名称：乳制品质量安全监督抽查检验细则
标准类别：地方标准(DB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
DB 33/T 428-2003 乳制品质量安全监督抽查检验细则
DB33/T428-2003
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标准内容
ICS65.020.01
备案号：14139-2003
方标准
DB33/T428-2003
乳制品质量安全监督抽查检验细则Test regulation on quality safety supervision of dairy products2003-08-12发布
2003-08-15实施
浙江省质量技术监督局发布
DB33/T4282003
为保障人民群众身体健康，全面推进“无公害农产品行动计划”，保证乳制品质量安全，指导有关检验机构进行乳制品质量安全监督抽查检验工作，特制定本检验细则，作为组织监督抽查的依据。本标准所列的检验项目与法律、法规、规章有不一致时，应以法律、法规、规章的规定为准。本标准的附录A为规范性附录。
本标准由浙江省农产品质量安全监督检测协调会议办公室提出。本标准起草单为：浙江方圆食品与农副产品质量安全检测中心本标准主要起草人：何乔桑陈自力赵淑娟陈小珍盛华栋
1范围
乳制品质量安全监督抽查检验细则本标准规定了乳制品的分类、检验项目、检验方法、抽样方法及判定原则。本标准适用于浙江省境内生产或销售的乳制品的质量监督抽查。2规范性引用文件
DB33/T4282003
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准GB4789.2
GB4789.10
GB4789.11
GB4789.18
GB/T5009.11
GB/T5009.12
GB/T5009.17
GB/T5009.24
GB/T5009.29
GB/T5409
GB/T5413.32
3产品分类
食品卫生微生物学检验菌落总数测定食品卫生微生物学检验
大肠菌群测定
食品卫生微生物学检验
沙门氏菌检验
食品卫生微生物学检验
金志贺氏菌检验
食品卫生微生物学检验
金黄色葡萄球菌检验
食品卫生微生物学检验
金溶血性链球菌检验
食品卫生微生物学检验乳与乳制品检验食品中总砷的测定方法
食品中铅的测定方法
食品中总汞的测定方法
食品中黄曲霉素M和BI的测定方法食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法生乳检验方法
乳粉硝酸盐、亚硝酸盐的测定
乳制品分以下三类：巴氏杀菌乳、灭菌乳、酸牛奶。4检验项目
检验项目见表1、表2、表3。
表1巴氏杀菌乳检测项目
检验项目
铅（以Pb计），mg/kg
砷（以As计），mg/kg
汞（以Hg计），mg/kg
检验方法
表1(续)
硝酸盐（以NaNOs计），mg/kg
亚硝酸盐以NaNOz计，mg/kg
黄曲霉毒素Mi，μg/kg
菌落总数，cfu/mL
大肠菌群，MPN/100mL
青霉素
链霉素
致病菌（指肠道致病菌和致病性球菌）表2灭菌乳检测项目
检验项目
铅（以Pb计），mg/kg
砷（以As计），mg/kg
汞（以Hg计），mg/kg
硝酸盐（以NaNO计），mg/kg
亚硝酸盐（以NaNO2计），mg/kg黄曲霉毒素Mi，μg/kg
青霉素
链霉素
商业无菌
表3酸牛乳检测项目
检验项目
铅（以Pb计），mg/kg
砷（以As计），mg/kg
汞（以Hg计），mg/kg
硝酸盐（以NaNOs计），mg/kg
，mg/kg
亚硝酸盐（以NaNO2计）
黄曲霉毒素Mi，μg/kg
苯甲酸，g/kg
山梨酸，g/kg
大肠菌群，MPN/100mL
致病菌（指肠道致病菌和致病性球菌）DB33/T428—2003
≤30000
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
商业无菌
纯酸牛乳、调味酸牛乳
果味酸牛乳≤0.23
纯酸牛乳、调味酸牛乳
果味酸牛乳≤0.23
不得检出
5.1的测定
按GB/T5009.11执行。
5.2铅的测定
按GB/T5009.12执行。
5.3汞的测定
按GB/T5009.17执行。
5.4硝酸盐及亚硝酸盐的测定
按GB/T5413.32执行。
5.5山梨酸、苯甲酸的测定
按GB/T5009.29执行。
5.6黄曲霉素M的测定
按GB/T5009.24执行。
5.7青霉素的测定
按GB/T5409执行。
5.8链霉素的测定
按附录A执行www.bzxz.net
5.9菌落总数的测定
按GB4789.2和GB4789.18执行。
5.10大肠菌群的测定
按GB4789.3和GB4789.18执行。
5.11致病菌的测定
按GB4789.4、GB4789.5、GB4789.10、GB4789.11和GB4789.188执行
抽样方法
6.1抽样方法
采取随机抽样的方法进行抽样。6.2样品数量
DB33/T4282003
规格≥250mL的样品，抽取样品数量为5瓶（盒），其中3瓶（盒）用作检验，2瓶（盒）作为备样封存留企业，规格≤250mL的样品，抽取样品数量加倍。6.3注意事项
6.3.1抽样人员抽样时应填写好浙江省农产品质量监督检查抽样单，样品用塑料袋包装，贴好样品标志，并经受检单位或个人对其有效性进行确认。样品标志的格式统一，包括以下内容：产品名称、种类、抽样地点、抽样时间、抽样人姓名及签字、见证人姓名及签字。6.3.2抽样后应尽快将样品送至检验机构进行检验。6.3.3抽样单位或人员应采取必要的措施，保证送检样品满足检验需要。3
判定原则
DB33/T428—2003
抽检全部项目符合标准要求，判定该批产品为合格：有一项或一项以上项目不符合标准要求时，判定该批产品为不合格。
受检方对检验结果异议时，可申请复检。复检指对备样进行检验。复检申请向原检验机构提出，原检验机构应在3个工作日内作出受理或不受理决定。若受检方对不受理决定仍有异议，可向浙江省农产品质量安全监督检测协调会议办公室提出。不合格结果以检验结果通知书的形式送达受检方，受检方应在收到不合格通知书之日起3日内提出复检申请，逾期不予受理。4
A.1测定原理
附录A
（规范性附录）
乳制品中链霉素残留的测定
DB33/T428—2003
测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有结合到蛋白上的链霉素（固相），链霉素抗体、链霉素酶标记物、标准或样品溶液或样本加入后，游离链霉素与链霉素酶标记物竞争链霉素抗体。没有被结合的酶标记物在洗涤时被除去，将酶基质（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到微孔中并孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的物质，加入反应停止液后，使微孔中的颜色由蓝转变为黄色。在450nm处进行吸光度测量，吸收度与样品中的链霉素浓度成反比，通过计算比例可以获得样本中链霉素的浓度值。
A.2试剂和材料
A.2.1酶标免疫分析定量测定链霉素残留试剂盒。德国R-Biopharm公司制造A.2.2正已烷。
A.2.3CarrezI：0.36mol/L铁氰化钾（Il）3H20。A.2.4Carrezll：1.04mol/L硫酸锌·7H20A.2.5PBS缓冲液：(0.55gNaH,PO4H2O；2.85gNa2HPO4-2H2O+9gNaCI+0.1%吐温20，加入蒸馏水至1000mL)。
仪器和设备
微孔板酶标仪(450nm)。
离心机。
振荡器。
4混合器。
磁搅拌器。
25uL，50uL，100uL，1000μL微量加样器。A.4样品处理
A.4.1脱脂牛奶
DB33/T4282003
用PBS-Tween缓冲液以1:40(25μL牛奶+975μL缓冲液)稀释，取50μL进行测定。A.4.2脂肪牛奶
15℃离心10分钟（3000转/分钟），去除脂肪（如无冷冻离心机请予冷却样品）。去除上层脂肪，用PBS-Tween缓冲液以1:40稀释脱脂牛奶，取50uL进行测定。A.5工作液的准备
制备标准应用液：50uLμL标准浓缩液用450μL缓冲液稀释并混合均匀，不要用塑料瓶而用玻璃瓶。
标准液1：50μL标准浓缩液1用450uL缓冲液稀释标准液2：50μL标准浓缩液2用450L缓冲液稀释标准液3：50μL标准浓缩液3用450μL缓冲液稀释标准液4：50uL标准浓缩液4用450μL缓冲液稀释标准液5：50μL标准浓缩液5用450μL缓冲液稀释标准液6：50μL标准浓缩液6用450口L缓冲液稀释每一批实验所用的标准液应当按上述要求重新制备。A.6实验步骤
A.6.1使用之前将所有的试剂回升至室温20℃-24℃。oμg/kg。
0.5ug/kg。
2uμg/kg。
8ug/kg。
32ug/kg。
128 μg/kg。
A.6.2将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，标准和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。
A.6.3加入50μL稀释了的酶标记物到微孔底部，再加入50μL的标准或处理好的样品到各自的微孔中。标准和样品做两个平行实验。A.6.4加入50uL稀释了的抗体溶液到每一个微孔底部充分混合，在室温孵育2小时，覆盖上薄膜（防止蒸发)。
A.6.5倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打(每行拍打3次)以保证完全除去孔中的液体.用250uL蒸馏水充入孔中，再次倒掉微孔中液体,再重复操作两次。A.6.6加入50uL基质和50μL发色试剂到微孔中，充分混合并在室温暗处孵育30分钟。A.6.7加入100μL反应停止液到微孔中，混合好在450nm处测量吸光度值，以空气为空白。必须在加入停止液后60分钟内读取吸光度值。6
A.7结果计算
DB33/T428—2003
所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(0标准)的吸光度值再乘以100。因此0标准等于100%并且以百分比给出吸光度值标准的吸光度值(或样品)。
吸光度值%=标准的吸光度值(或样品)x1000标准的吸光度值
计算的标准值绘成一个对应链霉素浓度（ug/kg)的半对数坐标系统曲线图，校正曲线在2ug/kg-32ug/kg范围内应当成为线性：。相对应每一个样品的浓度（ug/kg)可以从校正曲线上读出。本方法牛奶中链霉素的检测限是20ug/kg。A.8注意事项
保存试剂盒于2℃-8℃，不要冷冻。A.8.2在使用中不要让微孔干燥。A.8.3在EIA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。
A.8.4在所有恒温孵育过程中避免光线照射,用盖子盖住微孔板。A.8.5无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。A.8.6为提高回收率，将进样及洗脱速度定为10滴/分钟，并将甲醇洗脱液的数量定为2mL。回收率大于90%。
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备案号：14139-2003
方标准
DB33/T428-2003
乳制品质量安全监督抽查检验细则Test regulation on quality safety supervision of dairy products2003-08-12发布
2003-08-15实施
浙江省质量技术监督局发布
DB33/T4282003
为保障人民群众身体健康，全面推进“无公害农产品行动计划”，保证乳制品质量安全，指导有关检验机构进行乳制品质量安全监督抽查检验工作，特制定本检验细则，作为组织监督抽查的依据。本标准所列的检验项目与法律、法规、规章有不一致时，应以法律、法规、规章的规定为准。本标准的附录A为规范性附录。
本标准由浙江省农产品质量安全监督检测协调会议办公室提出。本标准起草单为：浙江方圆食品与农副产品质量安全检测中心本标准主要起草人：何乔桑陈自力赵淑娟陈小珍盛华栋
1范围
乳制品质量安全监督抽查检验细则本标准规定了乳制品的分类、检验项目、检验方法、抽样方法及判定原则。本标准适用于浙江省境内生产或销售的乳制品的质量监督抽查。2规范性引用文件
DB33/T4282003
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准GB4789.2
GB4789.10
GB4789.11
GB4789.18
GB/T5009.11
GB/T5009.12
GB/T5009.17
GB/T5009.24
GB/T5009.29
GB/T5409
GB/T5413.32
3产品分类
食品卫生微生物学检验菌落总数测定食品卫生微生物学检验
大肠菌群测定
食品卫生微生物学检验
沙门氏菌检验
食品卫生微生物学检验
金志贺氏菌检验
食品卫生微生物学检验
金黄色葡萄球菌检验
食品卫生微生物学检验
金溶血性链球菌检验
食品卫生微生物学检验乳与乳制品检验食品中总砷的测定方法
食品中铅的测定方法
食品中总汞的测定方法
食品中黄曲霉素M和BI的测定方法食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法生乳检验方法
乳粉硝酸盐、亚硝酸盐的测定
乳制品分以下三类：巴氏杀菌乳、灭菌乳、酸牛奶。4检验项目
检验项目见表1、表2、表3。
表1巴氏杀菌乳检测项目
检验项目
铅（以Pb计），mg/kg
砷（以As计），mg/kg
汞（以Hg计），mg/kg
检验方法
表1(续)
硝酸盐（以NaNOs计），mg/kg
亚硝酸盐以NaNOz计，mg/kg
黄曲霉毒素Mi，μg/kg
菌落总数，cfu/mL
大肠菌群，MPN/100mL
青霉素
链霉素
致病菌（指肠道致病菌和致病性球菌）表2灭菌乳检测项目
检验项目
铅（以Pb计），mg/kg
砷（以As计），mg/kg
汞（以Hg计），mg/kg
硝酸盐（以NaNO计），mg/kg
亚硝酸盐（以NaNO2计），mg/kg黄曲霉毒素Mi，μg/kg
青霉素
链霉素
商业无菌
表3酸牛乳检测项目
检验项目
铅（以Pb计），mg/kg
砷（以As计），mg/kg
汞（以Hg计），mg/kg
硝酸盐（以NaNOs计），mg/kg
，mg/kg
亚硝酸盐（以NaNO2计）
黄曲霉毒素Mi，μg/kg
苯甲酸，g/kg
山梨酸，g/kg
大肠菌群，MPN/100mL
致病菌（指肠道致病菌和致病性球菌）DB33/T428—2003
≤30000
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
商业无菌
纯酸牛乳、调味酸牛乳
果味酸牛乳≤0.23
纯酸牛乳、调味酸牛乳
果味酸牛乳≤0.23
不得检出
5.1的测定
按GB/T5009.11执行。
5.2铅的测定
按GB/T5009.12执行。
5.3汞的测定
按GB/T5009.17执行。
5.4硝酸盐及亚硝酸盐的测定
按GB/T5413.32执行。
5.5山梨酸、苯甲酸的测定
按GB/T5009.29执行。
5.6黄曲霉素M的测定
按GB/T5009.24执行。
5.7青霉素的测定
按GB/T5409执行。
5.8链霉素的测定
按附录A执行www.bzxz.net
5.9菌落总数的测定
按GB4789.2和GB4789.18执行。
5.10大肠菌群的测定
按GB4789.3和GB4789.18执行。
5.11致病菌的测定
按GB4789.4、GB4789.5、GB4789.10、GB4789.11和GB4789.188执行
抽样方法
6.1抽样方法
采取随机抽样的方法进行抽样。6.2样品数量
DB33/T4282003
规格≥250mL的样品，抽取样品数量为5瓶（盒），其中3瓶（盒）用作检验，2瓶（盒）作为备样封存留企业，规格≤250mL的样品，抽取样品数量加倍。6.3注意事项
6.3.1抽样人员抽样时应填写好浙江省农产品质量监督检查抽样单，样品用塑料袋包装，贴好样品标志，并经受检单位或个人对其有效性进行确认。样品标志的格式统一，包括以下内容：产品名称、种类、抽样地点、抽样时间、抽样人姓名及签字、见证人姓名及签字。6.3.2抽样后应尽快将样品送至检验机构进行检验。6.3.3抽样单位或人员应采取必要的措施，保证送检样品满足检验需要。3
判定原则
DB33/T428—2003
抽检全部项目符合标准要求，判定该批产品为合格：有一项或一项以上项目不符合标准要求时，判定该批产品为不合格。
受检方对检验结果异议时，可申请复检。复检指对备样进行检验。复检申请向原检验机构提出，原检验机构应在3个工作日内作出受理或不受理决定。若受检方对不受理决定仍有异议，可向浙江省农产品质量安全监督检测协调会议办公室提出。不合格结果以检验结果通知书的形式送达受检方，受检方应在收到不合格通知书之日起3日内提出复检申请，逾期不予受理。4
A.1测定原理
附录A
（规范性附录）
乳制品中链霉素残留的测定
DB33/T428—2003
测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有结合到蛋白上的链霉素（固相），链霉素抗体、链霉素酶标记物、标准或样品溶液或样本加入后，游离链霉素与链霉素酶标记物竞争链霉素抗体。没有被结合的酶标记物在洗涤时被除去，将酶基质（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到微孔中并孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的物质，加入反应停止液后，使微孔中的颜色由蓝转变为黄色。在450nm处进行吸光度测量，吸收度与样品中的链霉素浓度成反比，通过计算比例可以获得样本中链霉素的浓度值。
A.2试剂和材料
A.2.1酶标免疫分析定量测定链霉素残留试剂盒。德国R-Biopharm公司制造A.2.2正已烷。
A.2.3CarrezI：0.36mol/L铁氰化钾（Il）3H20。A.2.4Carrezll：1.04mol/L硫酸锌·7H20A.2.5PBS缓冲液：(0.55gNaH,PO4H2O；2.85gNa2HPO4-2H2O+9gNaCI+0.1%吐温20，加入蒸馏水至1000mL)。
仪器和设备
微孔板酶标仪(450nm)。
离心机。
振荡器。
4混合器。
磁搅拌器。
25uL，50uL，100uL，1000μL微量加样器。A.4样品处理
A.4.1脱脂牛奶
DB33/T4282003
用PBS-Tween缓冲液以1:40(25μL牛奶+975μL缓冲液)稀释，取50μL进行测定。A.4.2脂肪牛奶
15℃离心10分钟（3000转/分钟），去除脂肪（如无冷冻离心机请予冷却样品）。去除上层脂肪，用PBS-Tween缓冲液以1:40稀释脱脂牛奶，取50uL进行测定。A.5工作液的准备
制备标准应用液：50uLμL标准浓缩液用450μL缓冲液稀释并混合均匀，不要用塑料瓶而用玻璃瓶。
标准液1：50μL标准浓缩液1用450uL缓冲液稀释标准液2：50μL标准浓缩液2用450L缓冲液稀释标准液3：50μL标准浓缩液3用450μL缓冲液稀释标准液4：50uL标准浓缩液4用450μL缓冲液稀释标准液5：50μL标准浓缩液5用450μL缓冲液稀释标准液6：50μL标准浓缩液6用450口L缓冲液稀释每一批实验所用的标准液应当按上述要求重新制备。A.6实验步骤
A.6.1使用之前将所有的试剂回升至室温20℃-24℃。oμg/kg。
0.5ug/kg。
2uμg/kg。
8ug/kg。
32ug/kg。
128 μg/kg。
A.6.2将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，标准和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。
A.6.3加入50μL稀释了的酶标记物到微孔底部，再加入50μL的标准或处理好的样品到各自的微孔中。标准和样品做两个平行实验。A.6.4加入50uL稀释了的抗体溶液到每一个微孔底部充分混合，在室温孵育2小时，覆盖上薄膜（防止蒸发)。
A.6.5倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打(每行拍打3次)以保证完全除去孔中的液体.用250uL蒸馏水充入孔中，再次倒掉微孔中液体,再重复操作两次。A.6.6加入50uL基质和50μL发色试剂到微孔中，充分混合并在室温暗处孵育30分钟。A.6.7加入100μL反应停止液到微孔中，混合好在450nm处测量吸光度值，以空气为空白。必须在加入停止液后60分钟内读取吸光度值。6
A.7结果计算
DB33/T428—2003
所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(0标准)的吸光度值再乘以100。因此0标准等于100%并且以百分比给出吸光度值标准的吸光度值(或样品)。
吸光度值%=标准的吸光度值(或样品)x1000标准的吸光度值
计算的标准值绘成一个对应链霉素浓度（ug/kg)的半对数坐标系统曲线图，校正曲线在2ug/kg-32ug/kg范围内应当成为线性：。相对应每一个样品的浓度（ug/kg)可以从校正曲线上读出。本方法牛奶中链霉素的检测限是20ug/kg。A.8注意事项
保存试剂盒于2℃-8℃，不要冷冻。A.8.2在使用中不要让微孔干燥。A.8.3在EIA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。
A.8.4在所有恒温孵育过程中避免光线照射,用盖子盖住微孔板。A.8.5无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。A.8.6为提高回收率，将进样及洗脱速度定为10滴/分钟，并将甲醇洗脱液的数量定为2mL。回收率大于90%。
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