DB34/T 802-2008 液态菌种生产技术规程 DB34/T802-2008 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

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安徽省地
方标准
DB34/T802-2008
液态菌种生产技术规程
2008-06-25发布
2008-06-25实施
安徽省质量技术监督局发布
1范围
2规范性引用文件
3术语和定义
4技术要求
5液体菌种生产技术规程
6液体菌种的使用方法
7标签、贮存．.
附录A（规范性附录）
附录B（规范性附录）
常用母种培养基
常用摇瓶种培养基.
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DB34/T802—2008
本标准由由安徽省农业委员会和安徽大学提出本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。DB34/T802—2008
本标准由安徽大学生命科学学院、安徽省菜篮子工程办公室、安徽省食用菌技术协会、六安市金土地农业科普示范园起草。
本标准主要起草人：张书祥、沈业寿、丁作坤、陈全勇、史新强。本标准于2008年6月25日首次发布。I
http：//foodmate.net/1范围
液态菌种生产技术规程
DB34/T8022008
本标准规定了液态菌种的生产场地、设备设施、工艺流程、生产技术规程、使用方法以及标签、贮存。
本规程适用于主要栽培的食用菌液态菌种。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB5749生活饮用水卫生标准
GB9687-1988食品包装用聚乙烯成型品卫生标准GB9688-1988食品包装用聚丙烯成型品卫生标准3术语和定义
液态菌种liquidspawn
液态菌种是以菌种所存活的培养基形态来命名的，液态菌种是指在装有液体培养基的容器中，通过不断通气搅拌或振荡，使菌丝在液体深层繁育，并在短期内获得大量菌丝体（球）和代谢产物。概括来说，就是生长在液体培养基中的菌种。3.2
母种stockculture
由孢子、子实体组织、菇木或基质菌丝分离纯化，并在琼脂培养基上繁殖的菌种。3.3
发酵罐种子
fermentorstrain
由摇瓶菌种转接，在发酵罐中扩大培养得到的菌种。3.4
接种innoculation
将菌种移植到新鲜培养基物中的方法。3.5
灭菌sterilization
用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。4技术要求
4.1技术人员
具有与所生产的菌种级别相适应的《食用菌菌种生产经营许可证》的专业技术人员。4.2生产场地选择
4.2.1基本要求
DB34/T802—2008
地势干燥、空气优良、通风良好、水源充足且符合GB5749生活饮用水卫生标准、排水畅通、交通便利。
4.2.2环境卫生要求
至少300m之内无禽畜舍，无垃圾场，无污水、粉尘污染源。4.3厂房设置和布局
厂房设置具有相互隔离的原料库、配料场、灭菌室、无菌室、培养室、化验室、储藏室。4.3.1原料库
干燥、通风良好，防雨防潮，远离火源。4.3.2配料场
水电方便，空间充足，通风良好，采光良好。4.3.3灭菌室
电力充足，水源方便，通风良好，水电布局合理，便于操作。4.3.4冷却室
洁净、防尘、易通风散热。
4.3.5无菌室
要设缓冲间，换气性能优良，具无菌装备，有调温设施。4.3.6培养室
内壁和房顶光滑，易清洗和消毒，在室内直接进行菌种培育时，室墙壁要加隔温层，利于控温。有调温设施。
4.3.7发酵室
电力充足，水源方便，空间充足，通风良好、地面易冲洗，排水方便。4.3.8检验室
水电方便，空间充足，有利于安装、放置检验设备和仪器。4.4设备设施
具天平、高压灭菌锅、恒温培养箱、鼓风干燥箱、摇床、超净工作台、显微镜等，高压灭菌锅应选用经有关部门检验的安全合格产品。小型发酵罐罐体、管道用不锈钢SUS316L材质。空压机选无油低噪音型。
5液体菌种生产技术规程
5.1工艺流程
母种→活化→摇瓶菌种
原料一→培养基配制一→空消后发酵罐一实罐灭菌一→发酵培养（两级）→液体菌种+
无菌空气
5.2母种
5.2.1容器
使用18mm×180mm或20mm×200mm玻璃试管，试管应保持清洁、干燥。5.2.2培养基
根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。常用的配方见附录A。5.2.3灭菌
高压蒸气灭菌，在121℃，0.11MPa的压力下，维持在40分钟。灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。5.2.4接种
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DB34/T802—2008
用药物消毒并用紫外灯照射接种室和超净工作台，在超净工作台上严格按无菌操作接种。接种完成后及时贴好标签。
5.3摇瓶种
5.3.1容器
采用500ml的常规三角瓶，三角瓶应保持清洁、干燥。5.3.2装液量
每瓶装量为100～150ml，用纱布和牛皮纸封口。5.3.3培养基
根据不同微生物的不同营养需要配制不同的摇瓶培养基。常用的配方见附录B。5.3.4灭菌
同5.2.3高压蒸汽灭菌法。
5.3.5接种
将灭菌后的培养基冷却至30℃以下进行接种，每瓶接入0.5cm左右大小的琼脂斜面母种3块～5块。5.3.6培养
将接种后的三角瓶放到摇床上进行振荡培养，振荡频率为100r/min～120r/min，振幅为6cm~10cm，若使用旋转式摇床，振荡频率为150r/min~220r/min，旋转速度不宜过快。摇床适温应控制在24℃~26℃。
5.4种子罐种
5.4.1容器
气升式不锈钢发酵罐，体积根据生产规模自定。5.4.2装液量
定容至罐体积的70%。
5.4.3培养基此内容来自标准下载网
同5.3.3培养基
5.4.4灭菌
实消，先用夹层预热培养基至80℃后，从不同方向放蒸汽进罐升温至121℃，0.11MPa保压恒温40min，关蒸汽，无菌空气保压，开冷却水降温，待接种。5.4.5接种
接摇瓶种子，接种量为7%～10%。接种后调节进、排气阀，使罐内保持一定正压即可。5.4.6培养
发酵培养温度，pH值根据不同微生物进行控制。定时用肉汤培养基检查发酵液的无菌情况，显微镜检查菌体的状况。
5.5发酵罐种
5.5.1容器
气升式的不锈钢发酵罐，体积根据生产规模自定。5.5.2装液量
定容至罐体积的70%。
5.5.3培养基
同5.3.3培养基
5.5.4灭菌
5.5.5接种
压差法接入种子罐种子，接种量为7%～10%。5.5.6培养
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同5.4.6，培养基达到一定工艺要求，无杂菌即可放罐液体菌种的使用方法
DB34/T802—2008
用液体菌种接种器接种时，菌种瓶一般不用棉塞封口，而采用聚丙烯薄膜封口。接种时，先将待接种的菌种瓶成排地放在工作台上，依次将针管插入菌种瓶封口的薄膜内，每瓶接种量10ml～15ml菌液即可。塑料菌袋应进行多点接种，针管拔出后立即封闭塑料菌袋针孔，并竖立在培养架上进行培养。聚丙烯或聚乙烯材料执行GB9687-1988，GB9688-1988标准。7标签、贮存
7.1标志
出售的菌种必须贴有菌种质量合格标签，注明菌种种类、级别、品种、生产单位、接种日期。7.2贮存
7.2.1母种保存方法
夏、秋季节生产的高温菌类，母种应放在15℃的室内保存，冬季应移入恒温箱内，防止受冻：秋冬季节生产的菌种，可置于0～7℃C的冰箱中保存。低温保存、每隔3～5个月就应转管移接一次，在适宜的温度下培养一星期，待菌丝基本布满斜面后，再放在低温中保存。7.2.2摇瓶种保存方法
摇瓶培养的液体菌种用牛皮纸包好，放在4℃的温度下可保存5～7天，7.2.3种子罐液体菌种保存方法
15~20℃室温可保存1～2天。
附录A
（规范性附录）
常用母种培养基
A.1马铃薯葡萄糖琼脂培养基（简称PDA培养基）水1000mL，pH值依据菌种调配。DB34/T802—2008
马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂（凝固剂)20g，A.2综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA培养基）马铃薯200g（用浸出汁），葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，琼脂20g，水1000mL，pH值依据菌种调配。附录B
（规范性附录）
常用摇瓶种培养基
B.1葡萄糖3.0%，豆饼粉2.0%，玉米粉1.0%，酵母粉0.5%，磷酸二氢钟0.1%，碳酸钙0.2%硫酸镁0.05%，pH值依据菌种调配。B.2可溶性淀粉3.0%~6.0%，煎糖1.0%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁0.15%，酵母膏0.1%，pH6适合于多种食用菌。
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