WS/T 413-2013
基本信息
标准号： WS/T 413-2013
中文名称：血清肌酐测定参考方法同位素稀释液相色谱串联质谱法
标准类别：卫生行业标准(WS)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 血清 肌酐 测定 参考 方法 同位素 相色谱 串联 质谱法
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标准简介
WS/T 413-2013 血清肌酐测定参考方法同位素稀释液相色谱串联质谱法
WS/T413-2013
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标准内容
ICS11.020
中华人民共和国卫生行业标准
WS/T413—2013
血清肌酐测定参考方法
同位素稀释液相色谱串联质谱法Reference mesuremcnt method for serum creatinine-Isotope dilution liquid chromatography tandem mass spcctrometry2013-06-03发布
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会2013-12-01实施
WS/T413—2013
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准起草单位：卫生部临床检验中心、中国医学科学院北京协和医院、北京大学第医院，首部医科大学附属同仁医院。
本标推主要起草人：张传宝、张天娇、申子瑜、陈文祥、赵海舰、马嵘、邱玲、王学晶、刘向袜。I
1范围
血清肌酐测定参考方法
同位素稀释液相色谱事联质谱法WS/T413—2013
本标准规定了血清肌研测定参考方法的技术要求，包括样本采集与处理、仪器测定、数据分析和不确定度分析等内容。
本标准适用于实验室血清肌酐的测定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注口期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法JJF1135化学分析测量不确定度评定3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
参考测量方法referencemeasurementmethod经过充分研究的测量方法，其测量值的测量不确定度适合其预期用途，用于评价测量相同量的其他测量方法的正确性和鉴定参考物质方面的用途。3.2
溯源性traceability
·通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常是与国家测量标准或国际测量标准)联系起来的特性：3.3
commutability
互通性
临床检验参考物质或校准物质的互通性，指用不同测量过程测量该物质时，各测量过程测量结果之间的数字关系，与用这些测量过程测量实际临床样本时测量结果的数字关系的一致程度，小即该物质理化性质与实际临床样本的接近程度。4测定原理和方法
本标准建立的血清肌酐参考测量方法以同位素稀释质谱法为测定原理。该法是以稳定同位索标记的肌酐为内标添加至血清中，内标与血清均混合后用无水乙醇沉淀蛋白质，用三氯甲烷净化上清液，用液相色谱串联质谱分离和测定血消肌酐和内标特异的离子转变。用肌酐和内标峰面积比计算血清肌酐浓度。
WS/T 413—2013
5试剂
水（HO）：除非有特别说明，应使用GB/T6682定义的一级实验用水。无水乙醇（CHCH2OH)：色谱纯。三氯甲烷（CHCI.）：色谱纯。
乙腊(CHCN)：色谱纯。
乙酸铵（CHCOONH）：纯度99%
乙酸（CH.COOHI）：纯度≥99%
叠氮钠(NaN.）：分析纯。
6仪器
液相色谱串联质谱联用系统
液相色谱申联质谱联用系统应满足以下要求a)
高效液
语仪；
三重鸣极杆
中联质谱仪，配有电喷雾离手源（EST），质量校正合格，各项参装指标待合正常工作的美求
液相色谱柱
液相色谱格
柱应满足以下要
有极性育能团嵌人或端基封尾的a）具有
水量高的流动相中具有良好的稳定性Cl键合色谱柱，在合
和重现性；
规格为内径：0 mm
6.3天平
2.1mm，粒径3am5μm，桂长150mm十万分之一天平（最小分度0.01mg），应校准合格并在强制检定周期内6.4离心机
水平转头离心机。离心力应能达到1500g。6.5旋涡式混合器
适用于安、试管等的旋涡式混合装置。6.6加热吹于装置
加热方式应为干热，不宜使用水浴加热的装置。6.7微量移液器
经校准合格的微量移液器两支，规格分别为1000μL和200μL。6.8血液混匀器
适用于安颜、密封瓶等的血液或液体混匀装置。2
6.9安颜或试管
规格5mL。试管应配有聚四氟乙烯密封塞。安部应配有融封装置。7样本
7.1通则
本参考测量方法适用于新鲜、冰冻或冻干血清样本的肌酐浓度测定。WS/T413—2013
在处理样本时，应该严格遵从对潜在生物传染性样本处理的相关规定，使用时遵循生物安全规则，并根据规定对废物进行处理。
7.2样本用量
样本所需用量根据肌的浓度确定，一般用量为0.1mL~0.4mL。为保证取样量的准确性和操作可行性，最小取样量不得低于0.1mL。7.3样本的保存
新鲜血清样本若不立即测定，应于一20℃冰冻保存，保存时间不应超过3个月。长期保存应置于一70℃以下，可稳定保存至少1年。使用前应在室温下将血清融化、充分混匀。冻干样本应按照说明书描述的使用期限和条件保存，临用前按照说明复融重组，充分混匀。测定系统和分析部分的准备
8.1液相色谱串联质谱联用系统的准备8.1.1质谱系统部分的准备
测定前应对质谱系统进行性能检查，包括：a）最近3个月内进行过质量校准并合格。若上一次质最校准时间与测定时间超过3个月，应重新校准至合格免费标准bzxz.net
b）离子源装配电喷雾离子源，运行正常；）真空度达到正常工作要求的范围。所需辅助气体纯度符合要求，供应充足，气路通畅。8.1.2液相系统部分准备
测定前应对液相系统进行准备，包括：a）流动相准备：水，乙酸铵水溶液；b）色谱柱的平衡：用流动相（见9.2）冲洗色谱柱约30～40倍柱床体积，直至色谱柱达到平衡。8.2校准溶液的准备
8.2.1校准物质
8.2.1.1纯度标准物质
应使用肌酐纯品的国际有证标准物质或国家一级标准物质为校准物质。校准物质的使用、保存及使用期限应符合标准物质研制机构提供的标准物质证书。WS/T 413—2013
8.2.1.2同位素标记物质
应使用稳定同位素标记的肌酐为内标，标记的稳定同位素个数应不低于3个。内标的使用、保存及使用期限应符合生产厂商提供的产品证书或使用说明书，8.2.2校准溶液的制备
本法使用包括法(bracketingmethod)校准。用重量法制备肌酐纯度标准物质（见8.2.1.1)的水溶液为校准物质溶液：配制浓度约为0.10mg/g的校准物质溶液用于肌酐浓度大于200mol/L样本的测定（简称为校准物质溶液1)；配制浓度约为0.01mg/g的校准物质溶液用于肌酐浓度小于200umol/L样木的测定（简称为校准物质溶液2），记录称量过程，准确计算所配制校准物质溶液的浓度。校准物质溶液应于一70℃以下保存。
用重量法制备稳定同位素标记朋酐（见8.2.1.2)的水溶液为内标溶液：配制浓度约为0.10mg/g的内标溶液用于肌酐浓度大于200μmol/L样本的测定（简称为内标溶液1)配制浓度约为0.01mg/g的内标溶液用于肌酐表度小手200μmol/L样本的测定（简称为内标溶液2)，记录称量过程，准确计算所配制内标溶液的依度
内标溶液应于一7℃℃以下保存。用重量法将
技准物质溶妆
平的校准溶液（
一定比例精确混合，制成高低两个浓度水具对应浓皮的内标容液接照
。要水其中一个校准溶液（简标为低标，其中用手肌酐农度人于200μmol/L样
本测定的记为
标工用于肌酐浓皮小手20
的质量比控制在0.
~之间，
测定的记为高标1
用于肌酐乳
质量比控制在1~
1之间。准确记
物质与内标质量的精确比例，
mo1/L样本测定的记为低标2）摄准溶液
200μm
简称为高标
其中用于肌酐液店
本测定
记为高标2）
所取校准物
质溶液
标溶液的质量
注1：可在快准物质溶液和内标替鼓市加人0%登风镀作为防离剂
注2：样本液度划分的依据是操作的可行性均合票件含肌酥饺准物质与内标
大于2
200μmol/L样本
含肌酐校
唯物质与内标的
算校准容液中肌配校准
不是临课医学快定水
表1校准容液的配制
针对的样本
肌酐浓度>200μmol/L
肌浓度200umal/
8.3分析样本的处理
校准济液
高标2
低标2
8.3.1常规方法测定肌酐浓度
校准物质裕液
校准物质溶液1
校准物质溶液工
校准物质格妆么
权性物质商设
内标溶液
内标溶液1
内标落装
内标溶液
内标溶液2
准物质
内标的质量比
1~-1,1
在分析前，使用常规方法（如碱性苦味酸法或酶法）初步测定各种分析样本中肌酐的浓度。8.3.2测定血清密度
在分析前，应准确测定血清样本的密度，所得结果应保留4位有效数字。8.3.3样本前处理流程图
样本前处现流程见图1。
8.3.4分析样本与内标的混和
用微量移液器取约
天平称取样木
天平称
加入同位系内标
充分藏合均勾
乙醇沉淀蛋白
三氯甲烷净化
（分析液）
图1样本的处理流程图
得其精确质量，加人样本中充分溶液，称重
1:1.肌酐浓度
前样本使
大于200
amo/L的
称重得
青确质量
WS/T413-2013
量移液器取约
10.1mL内标
使其所
含肌酐与
的量应
内标的质最比约为
内标溶液，肌酐浓度小于
mg/g的
1的样本使用浓度约为0.01起
中g/色的内标溶液
200μmol/1
约为0.5ml，轻轻混
加入适量水，使其终体
8.3.5去除蛋白
，室温下放置1h平衡
加人2nL无水乙醇，涡旋振荡5min后以1500g离心力离心5min，取2上清液至安或试管中，60℃氮气流下吹于。
提取净化
残渣溶于0.6mL水中，加人0.6ml三氯甲烷，竭旋派荡5min后以1500g高心力离心5min。将水相移至2mL色谱分析样本瓶中进行液相色谱串联质谱分析。8.3.7高浓度样本的处理
为保证取样量的准确性，要求最小取样量不得低于0.1mL。当样本肌酐浓度大于850μmol/L，取样量不满足要求时，可增加样本的最以到达最小取样量要求，同时相应增加内标液的加人量，使其中所含肌酐与内标的质量比仍保持约为1：1。仪器分析前将样本用流动相稀释，使其保持与其他样本一致的浓度水平。
注：高值样本是根据操作的可行性与合理性而设定的，不是临床医学决定水平。示例：样本肌酐浓度约为1150μmol/L,取该血清约0.15mL，称重得其精确质盘，加入0.2mL浓度为0.10mg/g的内标济液，称重得其精确质量，混勾。按照8.3进行样本前处理，LC/MS/MS测定前将样本稀释2倍，设定进样体积为1x
WS/T413—2013
9液相色谱串联质谱系统（LC/MS/MS）测定9.1LC/MS/MS使用前检查
测定前检查LC/MS/MS，使其符合8.1的要求。9.2液相色谱测定条件
流动相为5mmol/l乙酸铵（pH5.5，100%水相），流速为0.2mL/min。肌酐浓度小于200μmol/L样本的进样体积为10μ，肌酐浓度人于200μmol/L,样本的进样体积为1μL。9.3串联质谱测定条件
9.3.1数据采集模式
使用电喷雾电离源（ESI)正离子模式和多反应监测（MRM)模式分析：监测的母离子为[M+HJ+，子离子为母离子失去一个炭基后的碎片离子.即监测肌m/z114→86的离子转变和同位素内标相应的离子转变。
注：选用不同的同位素内标，所监测的内标离子转变将有所不同，应根据其标记同位素的数量和位置确定9.3.2辅助气体，离子源条件参数的设置调整辅助气体，离子源条件等参数的设置，使肌軒和内标色谱峰的信噪比达到最佳。9.4分析过程
9.4.1分析系列
每个样本与其对应浓度水平的校溶液（即低标和高标）同一批测定，其中肌酐浓度大于200μmol/L的样本使用低标1和高标1.肌酐浓度小于200μmol/L的样本使用低标2和高标2,每个样本至少重复测定3次。分析的顺序如下为：第一次：低标；样本1；样本2；高标；第二次：高标；样本1；样本2；低标；第三次：低标；样本1样本2；高标9.4.2原始数据的有效性检查
要求三次重复测定所得航前和内标的峰而积比的变异系数小于1%。应接照8.1的要求进行仪器准备，保证测定数据符合要求。10数据处理
10.1有效数据
符合9.4要求的3次重复测定结果的均值为样本测定的有效数据。10.2结果计算
使用包括法计算血清肌酐浓度，计算公式见(1)：[sm -l)×(Wm-Wu)+WLow
lm—Iaw）
×s×Ds×Pe×
.........(1)
式中：
血清中肌的浓度，单位为微摩尔每升(umol/L)；样本中肌商与内标的峰面积比（测定值）：低标中肌酐与内标的峰面积比（测定值）：高标中肌酐与内标的峰面积比（测定值）：低标中肌酐与内标的含量比；
高标中肌酐与内标的合量比；
血清样本中内标的含量，单位为微克（μg）；血清样本的质量，单位为克（g)；血清的密度：
校准品的认定纯度（由标准物质证书提供）；肌酐的相对分子质量
分析可靠性
不确定度评估
11.1.1不确定度来源分析
本标推的血清肌酐参考
测量程序！
样本和内标的添
液的配制
可位量
量法。
国使用量
肌醉校准品的称量
水的称量
肌酐校准品的纯度
样本的称量
内标溶液的称量
样本的重复测定
11.1.2不确定度的计算
测定间
WS/T413—2013
售法为测定原理，以包括法为校难方法。校推落确定度
表2。
要来源见
不确定度主要来
美源分析表
根据JJF1135和11.1.1中不确定度主要米源计算合成不确定度（uc:）。以包含因子为2，计算扩展不确定度（U)与相对扩展不确定(Ural）。测定结果的相对扩展不确定度应≤2%。11.2加样回收实验
以肌酐标准物质（见8.2.1.1）为标准品，添加至待测血清中，混合均匀。用所建测量程序测定添加标推品前后的肌酐浓度。计算方法的加样回收率。加样回收率应在（100士2）%范周之间。11.3测定有证标准物质
测定血清肌酐的国际有证标准物质或国家一级标准物质，所得结果应在标准物质（认定值士不确定7
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度)的范围之间。
应使用与校准物质（见8.2.1.1)不同的有证标准物质用于正确性验证。示例：美国国家标准和技术研究院（NIST)有证标准物质SRM909b和SRM967b。11.4测定精密度
为保证测定结果的靠性，应对样本进行重复性测定，包括批内试验和批间试验。测定结果的批内和批间不精密度应≤2%。12实验室间验证
除按照11的要求对所使用的测定过程进行分析可靠性的研究，还应通过有计划的实验室间研究进行验证，测定结果应符合所参加实验室间研究的要求，示例：参加由国际临床化学联合会(IF(XC)和德国临床化学与检验医学学会(DGKL)共同组织的环形比对试验(RingTrials)。
13特殊情况
使用本标准描述的参考测量方法测定制各物（如质控品和校准品)或有证标准物质的肌酐浓度，其结果不能直接用于肌酐常规测定方法的校准。应考察制备物或有证标准物质的互通性对肌酐常规测定方法的影响。
14报告
14.1样本来源的说明
应报告样本的类型：新鲜、冰冻或冻干。应报告样本的保存方式和保存时间：重组的样本应同时报告重组的过程，14.2使用测量程序的说明
应说明所使用测量程序的原理：同位素稀释液相色谱串联质谱法。应报告所使用校准物质的溯源性、名称和认定纯度。14.3测定结果
报告血清肌酐浓度的单位为微摩尔每升（umol/L）。应报告測定结果的不确定度。
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中华人民共和国卫生行业标准
WS/T413—2013
血清肌酐测定参考方法
同位素稀释液相色谱串联质谱法Reference mesuremcnt method for serum creatinine-Isotope dilution liquid chromatography tandem mass spcctrometry2013-06-03发布
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会2013-12-01实施
WS/T413—2013
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准起草单位：卫生部临床检验中心、中国医学科学院北京协和医院、北京大学第医院，首部医科大学附属同仁医院。
本标推主要起草人：张传宝、张天娇、申子瑜、陈文祥、赵海舰、马嵘、邱玲、王学晶、刘向袜。I
1范围
血清肌酐测定参考方法
同位素稀释液相色谱事联质谱法WS/T413—2013
本标准规定了血清肌研测定参考方法的技术要求，包括样本采集与处理、仪器测定、数据分析和不确定度分析等内容。
本标准适用于实验室血清肌酐的测定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注口期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法JJF1135化学分析测量不确定度评定3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
参考测量方法referencemeasurementmethod经过充分研究的测量方法，其测量值的测量不确定度适合其预期用途，用于评价测量相同量的其他测量方法的正确性和鉴定参考物质方面的用途。3.2
溯源性traceability
·通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常是与国家测量标准或国际测量标准)联系起来的特性：3.3
commutability
互通性
临床检验参考物质或校准物质的互通性，指用不同测量过程测量该物质时，各测量过程测量结果之间的数字关系，与用这些测量过程测量实际临床样本时测量结果的数字关系的一致程度，小即该物质理化性质与实际临床样本的接近程度。4测定原理和方法
本标准建立的血清肌酐参考测量方法以同位素稀释质谱法为测定原理。该法是以稳定同位索标记的肌酐为内标添加至血清中，内标与血清均混合后用无水乙醇沉淀蛋白质，用三氯甲烷净化上清液，用液相色谱串联质谱分离和测定血消肌酐和内标特异的离子转变。用肌酐和内标峰面积比计算血清肌酐浓度。
WS/T 413—2013
5试剂
水（HO）：除非有特别说明，应使用GB/T6682定义的一级实验用水。无水乙醇（CHCH2OH)：色谱纯。三氯甲烷（CHCI.）：色谱纯。
乙腊(CHCN)：色谱纯。
乙酸铵（CHCOONH）：纯度99%
乙酸（CH.COOHI）：纯度≥99%
叠氮钠(NaN.）：分析纯。
6仪器
液相色谱串联质谱联用系统
液相色谱申联质谱联用系统应满足以下要求a)
高效液
语仪；
三重鸣极杆
中联质谱仪，配有电喷雾离手源（EST），质量校正合格，各项参装指标待合正常工作的美求
液相色谱柱
液相色谱格
柱应满足以下要
有极性育能团嵌人或端基封尾的a）具有
水量高的流动相中具有良好的稳定性Cl键合色谱柱，在合
和重现性；
规格为内径：0 mm
6.3天平
2.1mm，粒径3am5μm，桂长150mm十万分之一天平（最小分度0.01mg），应校准合格并在强制检定周期内6.4离心机
水平转头离心机。离心力应能达到1500g。6.5旋涡式混合器
适用于安、试管等的旋涡式混合装置。6.6加热吹于装置
加热方式应为干热，不宜使用水浴加热的装置。6.7微量移液器
经校准合格的微量移液器两支，规格分别为1000μL和200μL。6.8血液混匀器
适用于安颜、密封瓶等的血液或液体混匀装置。2
6.9安颜或试管
规格5mL。试管应配有聚四氟乙烯密封塞。安部应配有融封装置。7样本
7.1通则
本参考测量方法适用于新鲜、冰冻或冻干血清样本的肌酐浓度测定。WS/T413—2013
在处理样本时，应该严格遵从对潜在生物传染性样本处理的相关规定，使用时遵循生物安全规则，并根据规定对废物进行处理。
7.2样本用量
样本所需用量根据肌的浓度确定，一般用量为0.1mL~0.4mL。为保证取样量的准确性和操作可行性，最小取样量不得低于0.1mL。7.3样本的保存
新鲜血清样本若不立即测定，应于一20℃冰冻保存，保存时间不应超过3个月。长期保存应置于一70℃以下，可稳定保存至少1年。使用前应在室温下将血清融化、充分混匀。冻干样本应按照说明书描述的使用期限和条件保存，临用前按照说明复融重组，充分混匀。测定系统和分析部分的准备
8.1液相色谱串联质谱联用系统的准备8.1.1质谱系统部分的准备
测定前应对质谱系统进行性能检查，包括：a）最近3个月内进行过质量校准并合格。若上一次质最校准时间与测定时间超过3个月，应重新校准至合格免费标准bzxz.net
b）离子源装配电喷雾离子源，运行正常；）真空度达到正常工作要求的范围。所需辅助气体纯度符合要求，供应充足，气路通畅。8.1.2液相系统部分准备
测定前应对液相系统进行准备，包括：a）流动相准备：水，乙酸铵水溶液；b）色谱柱的平衡：用流动相（见9.2）冲洗色谱柱约30～40倍柱床体积，直至色谱柱达到平衡。8.2校准溶液的准备
8.2.1校准物质
8.2.1.1纯度标准物质
应使用肌酐纯品的国际有证标准物质或国家一级标准物质为校准物质。校准物质的使用、保存及使用期限应符合标准物质研制机构提供的标准物质证书。WS/T 413—2013
8.2.1.2同位素标记物质
应使用稳定同位素标记的肌酐为内标，标记的稳定同位素个数应不低于3个。内标的使用、保存及使用期限应符合生产厂商提供的产品证书或使用说明书，8.2.2校准溶液的制备
本法使用包括法(bracketingmethod)校准。用重量法制备肌酐纯度标准物质（见8.2.1.1)的水溶液为校准物质溶液：配制浓度约为0.10mg/g的校准物质溶液用于肌酐浓度大于200mol/L样本的测定（简称为校准物质溶液1)；配制浓度约为0.01mg/g的校准物质溶液用于肌酐浓度小于200umol/L样木的测定（简称为校准物质溶液2），记录称量过程，准确计算所配制校准物质溶液的浓度。校准物质溶液应于一70℃以下保存。
用重量法制备稳定同位素标记朋酐（见8.2.1.2)的水溶液为内标溶液：配制浓度约为0.10mg/g的内标溶液用于肌酐浓度大于200μmol/L样本的测定（简称为内标溶液1)配制浓度约为0.01mg/g的内标溶液用于肌酐表度小手200μmol/L样本的测定（简称为内标溶液2)，记录称量过程，准确计算所配制内标溶液的依度
内标溶液应于一7℃℃以下保存。用重量法将
技准物质溶妆
平的校准溶液（
一定比例精确混合，制成高低两个浓度水具对应浓皮的内标容液接照
。要水其中一个校准溶液（简标为低标，其中用手肌酐农度人于200μmol/L样
本测定的记为
标工用于肌酐浓皮小手20
的质量比控制在0.
~之间，
测定的记为高标1
用于肌酐乳
质量比控制在1~
1之间。准确记
物质与内标质量的精确比例，
mo1/L样本测定的记为低标2）摄准溶液
200μm
简称为高标
其中用于肌酐液店
本测定
记为高标2）
所取校准物
质溶液
标溶液的质量
注1：可在快准物质溶液和内标替鼓市加人0%登风镀作为防离剂
注2：样本液度划分的依据是操作的可行性均合票件含肌酥饺准物质与内标
大于2
200μmol/L样本
含肌酐校
唯物质与内标的
算校准容液中肌配校准
不是临课医学快定水
表1校准容液的配制
针对的样本
肌酐浓度>200μmol/L
肌浓度200umal/
8.3分析样本的处理
校准济液
高标2
低标2
8.3.1常规方法测定肌酐浓度
校准物质裕液
校准物质溶液1
校准物质溶液工
校准物质格妆么
权性物质商设
内标溶液
内标溶液1
内标落装
内标溶液
内标溶液2
准物质
内标的质量比
1~-1,1
在分析前，使用常规方法（如碱性苦味酸法或酶法）初步测定各种分析样本中肌酐的浓度。8.3.2测定血清密度
在分析前，应准确测定血清样本的密度，所得结果应保留4位有效数字。8.3.3样本前处理流程图
样本前处现流程见图1。
8.3.4分析样本与内标的混和
用微量移液器取约
天平称取样木
天平称
加入同位系内标
充分藏合均勾
乙醇沉淀蛋白
三氯甲烷净化
（分析液）
图1样本的处理流程图
得其精确质量，加人样本中充分溶液，称重
1:1.肌酐浓度
前样本使
大于200
amo/L的
称重得
青确质量
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量移液器取约
10.1mL内标
使其所
含肌酐与
的量应
内标的质最比约为
内标溶液，肌酐浓度小于
mg/g的
1的样本使用浓度约为0.01起
中g/色的内标溶液
200μmol/1
约为0.5ml，轻轻混
加入适量水，使其终体
8.3.5去除蛋白
，室温下放置1h平衡
加人2nL无水乙醇，涡旋振荡5min后以1500g离心力离心5min，取2上清液至安或试管中，60℃氮气流下吹于。
提取净化
残渣溶于0.6mL水中，加人0.6ml三氯甲烷，竭旋派荡5min后以1500g高心力离心5min。将水相移至2mL色谱分析样本瓶中进行液相色谱串联质谱分析。8.3.7高浓度样本的处理
为保证取样量的准确性，要求最小取样量不得低于0.1mL。当样本肌酐浓度大于850μmol/L，取样量不满足要求时，可增加样本的最以到达最小取样量要求，同时相应增加内标液的加人量，使其中所含肌酐与内标的质量比仍保持约为1：1。仪器分析前将样本用流动相稀释，使其保持与其他样本一致的浓度水平。
注：高值样本是根据操作的可行性与合理性而设定的，不是临床医学决定水平。示例：样本肌酐浓度约为1150μmol/L,取该血清约0.15mL，称重得其精确质盘，加入0.2mL浓度为0.10mg/g的内标济液，称重得其精确质量，混勾。按照8.3进行样本前处理，LC/MS/MS测定前将样本稀释2倍，设定进样体积为1x
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9液相色谱串联质谱系统（LC/MS/MS）测定9.1LC/MS/MS使用前检查
测定前检查LC/MS/MS，使其符合8.1的要求。9.2液相色谱测定条件
流动相为5mmol/l乙酸铵（pH5.5，100%水相），流速为0.2mL/min。肌酐浓度小于200μmol/L样本的进样体积为10μ，肌酐浓度人于200μmol/L,样本的进样体积为1μL。9.3串联质谱测定条件
9.3.1数据采集模式
使用电喷雾电离源（ESI)正离子模式和多反应监测（MRM)模式分析：监测的母离子为[M+HJ+，子离子为母离子失去一个炭基后的碎片离子.即监测肌m/z114→86的离子转变和同位素内标相应的离子转变。
注：选用不同的同位素内标，所监测的内标离子转变将有所不同，应根据其标记同位素的数量和位置确定9.3.2辅助气体，离子源条件参数的设置调整辅助气体，离子源条件等参数的设置，使肌軒和内标色谱峰的信噪比达到最佳。9.4分析过程
9.4.1分析系列
每个样本与其对应浓度水平的校溶液（即低标和高标）同一批测定，其中肌酐浓度大于200μmol/L的样本使用低标1和高标1.肌酐浓度小于200μmol/L的样本使用低标2和高标2,每个样本至少重复测定3次。分析的顺序如下为：第一次：低标；样本1；样本2；高标；第二次：高标；样本1；样本2；低标；第三次：低标；样本1样本2；高标9.4.2原始数据的有效性检查
要求三次重复测定所得航前和内标的峰而积比的变异系数小于1%。应接照8.1的要求进行仪器准备，保证测定数据符合要求。10数据处理
10.1有效数据
符合9.4要求的3次重复测定结果的均值为样本测定的有效数据。10.2结果计算
使用包括法计算血清肌酐浓度，计算公式见(1)：[sm -l)×(Wm-Wu)+WLow
lm—Iaw）
×s×Ds×Pe×
.........(1)
式中：
血清中肌的浓度，单位为微摩尔每升(umol/L)；样本中肌商与内标的峰面积比（测定值）：低标中肌酐与内标的峰面积比（测定值）：高标中肌酐与内标的峰面积比（测定值）：低标中肌酐与内标的含量比；
高标中肌酐与内标的合量比；
血清样本中内标的含量，单位为微克（μg）；血清样本的质量，单位为克（g)；血清的密度：
校准品的认定纯度（由标准物质证书提供）；肌酐的相对分子质量
分析可靠性
不确定度评估
11.1.1不确定度来源分析
本标推的血清肌酐参考
测量程序！
样本和内标的添
液的配制
可位量
量法。
国使用量
肌醉校准品的称量
水的称量
肌酐校准品的纯度
样本的称量
内标溶液的称量
样本的重复测定
11.1.2不确定度的计算
测定间
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售法为测定原理，以包括法为校难方法。校推落确定度
表2。
要来源见
不确定度主要来
美源分析表
根据JJF1135和11.1.1中不确定度主要米源计算合成不确定度（uc:）。以包含因子为2，计算扩展不确定度（U)与相对扩展不确定(Ural）。测定结果的相对扩展不确定度应≤2%。11.2加样回收实验
以肌酐标准物质（见8.2.1.1）为标准品，添加至待测血清中，混合均匀。用所建测量程序测定添加标推品前后的肌酐浓度。计算方法的加样回收率。加样回收率应在（100士2）%范周之间。11.3测定有证标准物质
测定血清肌酐的国际有证标准物质或国家一级标准物质，所得结果应在标准物质（认定值士不确定7
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度)的范围之间。
应使用与校准物质（见8.2.1.1)不同的有证标准物质用于正确性验证。示例：美国国家标准和技术研究院（NIST)有证标准物质SRM909b和SRM967b。11.4测定精密度
为保证测定结果的靠性，应对样本进行重复性测定，包括批内试验和批间试验。测定结果的批内和批间不精密度应≤2%。12实验室间验证
除按照11的要求对所使用的测定过程进行分析可靠性的研究，还应通过有计划的实验室间研究进行验证，测定结果应符合所参加实验室间研究的要求，示例：参加由国际临床化学联合会(IF(XC)和德国临床化学与检验医学学会(DGKL)共同组织的环形比对试验(RingTrials)。
13特殊情况
使用本标准描述的参考测量方法测定制各物（如质控品和校准品)或有证标准物质的肌酐浓度，其结果不能直接用于肌酐常规测定方法的校准。应考察制备物或有证标准物质的互通性对肌酐常规测定方法的影响。
14报告
14.1样本来源的说明
应报告样本的类型：新鲜、冰冻或冻干。应报告样本的保存方式和保存时间：重组的样本应同时报告重组的过程，14.2使用测量程序的说明
应说明所使用测量程序的原理：同位素稀释液相色谱串联质谱法。应报告所使用校准物质的溯源性、名称和认定纯度。14.3测定结果
报告血清肌酐浓度的单位为微摩尔每升（umol/L）。应报告測定结果的不确定度。
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