DBS22 012-2013 食品安全地方标准 动物源性食品中24种受体激动剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 DBS22012-2013 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

吉林省地
方标准
DBS22/012—2013
食品安全地方标准
动物源性食品中24种受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法2013-10-08发布
吉林省卫生厅
2013-10-08实施
本标准的附录A为规范性附录，附录B和附录C为资料性附录。本标准起草单位：吉林省疾病预防控制中心本标准起草人：刘思洁、方赤光、李青、崔勇、姜楠、郭金芝DBS22/012-2013
1范围
食品安全地方标准
动物源性食品中24种受体激动剂液相色谱-串联质谱法
残留量的测定
DBS22/012-2013
本标准规定了动物源性食品中24种受体激动剂残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于动物源性食品猪肉、猪肝、猪肾和牛肉中24种受体激动剂残留量的测定本标准方法的检出限：马布特罗、克仑潘特、克仑丙罗、沙丁胺醇、克伦特罗、莱卡多巴胺、溴氯布特罗、溴布特罗、奥西那林、利妥特灵、塞布特罗、苯氧丙酚胺、克仑塞罗、妥布特罗、R-美托洛尔、S-美托洛尔、马喷特罗、西马特罗、苯乙醇胺A、非诺特罗、福莫特罗、拉贝特罗、异克仑潘特、丙卡特罗均为0.1μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
样品经酶解、高氯酸沉淀蛋白，混合型阳离子交换固相萃取小程净化和富集，采用液相色谱-串联质谱仪测定24种受体激动剂的残留量，外标法定量。4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲酸（HCOOH）：色谱纯。
4.2乙腈（C2H3N）：色谱纯
4.3乙酸乙酯（C4H802）：色谱纯。4.4甲醇（CH3OH）：色谱纯。
4.5高氯酸（HC104）：优级纯。4.6氢氧化钠（NaOH）：优级纯。4.7氨水(NH40H)：优级纯。
4.8乙酸(C2H402)。
4.9乙酸钠（C2H3Na02）
4.10乙酸一乙酸钠缓冲溶液（pH=5.2）。4.110.1mo1/L高氯酸溶液。
DBS22/012-2013
4.125mo1/L氢氧化钠溶液。
4.130.1mo1/L乙酸溶液。
4.1445%氨水甲醇溶液。
4.150.1%甲酸水溶液。
4.1624种受体激动剂标准品：纯度均>95%，见附录A中表A.1。4.17标准储备液：分别称取上述24种受体激动剂10.0mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，于4℃条件下保存。
4.18标准工作液：分别吸取上述各储备溶液，用甲醇稀释，配成浓度为1.0ug/mL的混和标准储备溶液。根据需要，用甲醇稀释上述标准储备溶液，配制成不同浓度的标准工作液。4.19β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶（β-glucuronidasc/arylsulfatasc）：酶活性100,000units/min。
4.20混合型阳离子交换固相萃取小柱，（6mL，200mg）或其他等效柱。4.21行
微孔滤膜：0.22um，水相。
仪器与设备
5.1液相色谱-串联质谱仪。
5.2电子分析天平：感量0.1mg。5.3冷冻高速离心机：土20℃，转速15000r/min。5.4氮吹仪。
5.5固相萃取装置。
5.6超声清洗仪，功率500W。
5.7恒温箱。
5.8涡旋混合器。
分析步骤
6.1样品制备
动物组织样品绞碎混合均匀，置于4℃冰箱中保存待测。6.2样品提取
准确称取绞碎混合均匀的动物组织样品5.0g，置于50mL离心管中，加入乙酸一乙酸钠缓冲溶液（pH=5.2）（4.10)10mL，加入5uL的β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶，50℃水解2h，加高氯酸调节pH值至1.0，在80℃超声提取30min，取出冷却至室温在8000r/min离心10min。沉淀再用10mL0.1mo1/L高氯酸溶液（4.11）提取一次，合并两次提取液。用5mo1/L的NaOH（4.12）调pH=4.0,以10000r/min冷冻离心，待过混合型阳离子固相萃取小固相萃取柱。6.3净化
混合型阳离子交换固相萃取小柱用6mL甲醇、6mL水活化后，加入上述溶液过柱，弃去过滤液。依次用5mL的0.1mo1/L乙酸（4.13）、5mL甲醇淋洗，弃去过滤液和淋洗液，再用6mL的5%氨水2
DBS22/012-2013
甲醇溶液（4.14）洗脱，收集洗脱液于玻璃小瓶中，氮气吹干，用5mL0.1%甲酸水溶液（4.15）定容，涡漩1min，经0.22um微孔滤膜过滤液相色谱-串联质谱测定标准工作曲线的制备
称取与试样基质相应的阴性样品5.0g，按6.1和6.2进行处理后得到基质溶液。根据需要，制备不同浓度的基质加标标准工作曲线5测定
色谱参考条件
BEHShieldRP18柱(100mm×2.1mm，1.7μm)或相当色谱柱色谱柱：
柱温：40℃。
流动相：A相：含0.1%（体积分数）甲酸水溶液：B相：乙睛。梯度洗脱情况见表1。
表1梯度洗脱程序
时间（min）
进样量：2uL。
质谱参考条件
流速（ml/min）
流动相A
离子源：电喷雾电离(ESI（+)），毛细管电压：3.2kV，锥孔电压：35V。射频透镜1(RFLens1)和射频透镜2(RFLens2)电压分别为35.0V和0.5V。离子源温度：110℃：脱溶剂温度：300℃；脱溶剂气流量：600L/h；
离子能1和离子能2分别为1.8和1.5。质谱分析优化参数见表2。
流动相B
DBS22/0122013
化合物
奥西那林
非诺特罗
西马特罗
沙丁胺醇
塞布特罗
丙卡特罗
克仑塞罗
克仑丙罗
利妥特灵
妥布特罗
克伦特罗
S-美托洛尔
R-美托洛尔
莱卡多巴胺
溴氯布特罗
福莫特罗
溴布特罗
马布特罗
克仑潘特
苯氧丙酚胺
拉贝特罗
异克仑潘特
马喷特罗
苯乙醇胺A
6.6测定
表224种受体激动剂定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量锥孔电压（v）
母离子（m/z）
定性/定量离子
(m/z）
212.2/152.0
304.1/135.1
220.2/202.1
240.2/147.9
234.2/160.0
291.2/273.2
319.2/202.9
263.0/245.0
288.3/270.2
228.2/153.1
277.3/203.2
268.3/116.1
267.0/115.0
302.3/164.2
323.1/248.9
345.2/149.1
367.1/292.9
311.2/237.1
291.1/202.9
302.3/284.2
329.2/311.3
291.1/273.1
325.2/237.0
345.2/150.1
碰撞能量（eV）
在上述仪器条件下测定基质加标标准溶液及样品溶液。各检测目标化合物以保留时间和特征离子与定量离子所对应的LC-MS/MS色谱峰面积相对丰度进行定性。要求被测试样中目标化合物的保留时间与4
DBS22/012-2013
标准溶液中目标化合物保留时间的相对偏差小于20%；样品特征离子的相对丰度与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
空白试验
20%——50%
除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。6.6.2色谱图
色谱图参见附录B中图B.1。
7结果计算
10%—20%
以标准溶液浓度对定量离子峰面积绘制标准曲线，外标法定量。按式（1）计算X-
式中：
C×V1000
一样品中目标化合物含量，单位为微克每千克（ug/kg）：一测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）：V—定容体积，单位为毫升（mL）：m
-最终样液代表的试样量，单位为克（g）。注：计算结果需将空白值扣除。8准确度和精密度
8.1准确度
本方法添加浓度为0.5ug/kg~10.0μg/kg时，加标回收率见附录C中表C.1。8.2精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。<10%
...(1)
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化合物
奥西那林
非诺特罗
西马特罗
沙丁胺醇
塞布特罗
丙卡特罗
克仑塞罗
克仑丙罗
利妥特灵
妥布特罗
克伦特罗
S-美托洛尔
R-美托洛尔
莱卡多巴胺
溴氯布特罗
福莫特罗
溴布特罗
马布特罗
克仑潘特
苯氧丙酚胺
拉贝特罗
异克仑潘特
马喷特罗
苯乙醇胺A
附录A
（规范性附录）
24种受体激动剂一览表
24种受体激动剂一览表
英文名称
metaproterenol
fenoterol
cimaterol
salbutamol
cimbuterol
procaterol
clencyclohexerol
clenproperol
ritodrine
tulobuterol
clenbuterol
S-metaprolol
R-metaprolol
ractopamine
bromchlorbuterol
formoterol
brombuterol
mabuterol
clenpenterol
isoasuprine
labetalol
clenisopenterol
mapenterol
2-(4-nitrophenyl)
butan-2-ylamino)-1-
（4-methoxypheny1)
ethanol hydrochloride
CAS号
586-06-1
13392-18-2
54239-37-1
51022-70-9
54239-39-3
72332-33-3
157877-79-7
38339-11-6
26652-09-5
41570-61-0
37148-27-9
253-483-7
51384-51-1
97825-25-7
73573-87-2
41937-02-4
56341-08-3
37158-47-7
579-56-6
36894-69-6
157664-68-1
54238-51-6
化学分子式
CuHiNO3
Ci2HiNao
CisHa.NOs
CrsHaN:o
CiH2N203
CH2oC12N202
CiHieCl2N20
CiH2iNO3
Ci2HisCINO
C2HisC1N20
CisHasNO
Ci5H2sNO3
C18H23NO3
C2HisBrC1N20
CigHaN204
CizHisBr2N20
CaHi.C1FaN.0
Ci3H2C13N20
CrsH2CINO
CigHaN203
Ci3H2oC12N20
C1H2iC12F3N20
CigH2N2O4
metapt
h04J3n-201
附录B
（资料性附录）
24种受体激动剂标准色谱图
DBS22/012-2013
MRMot1Ch
R2245de
MRMof1C
2>147.9(sal
277.3>203.2(clembom
eMof1i
MR231042（(a）
t200Tme
MRMfChaT
R01290
MRMof1
2.too1cgta
1RN2152842E
DBS22/012-2013
lenrvtndlan2nt
Lobusemo
R-metop
s-meto
mapent
hunan14-Feb-2012
formotero
labetalo
denisopenterc
orocatera
图B.124种受体激动剂标准色谱图10.00
MRNa229
11:01200
268.3Mfi6.c
MRMof1ChevetES+
2202-20210mob
MMaCheE
TIC (fen
MRMdt1ChannelES+
1ChermelES
（从上之下依次为马布特罗、克仑潘特、克仑丙罗、沙丁胺醇、克伦特罗、莱卡多巴胺、溴氯布特罗、溴布特罗、奥西那林、利妥特灵、塞布特罗、苯氧丙酚胺、克仑塞罗、妥布特罗、R-美托洛尔、S-美托洛尔、马喷特罗、西马特罗、苯乙醇胺A、非诺特罗、福莫特罗、拉贝特罗、异克仑潘特、丙卡特罗）8
化合物
奥西那林
非诺特罗
西马特罗
沙丁胺醇
塞布特罗
丙卡特罗
克仑塞罗
克仑丙罗
利妥特灵
要布特罗
克伦特罗
附录C
（资料性附录）
回收率范围免费标准bzxz.net
三个水平添加回收率范围
表C.124种受体激动剂的不同基质、3添加水平
(μg/kg)
猪肾/
回收率%
72.5~88.2
80.5~94.1
74.6101.1
72.0~80.6
73.6~83.3
78.2~102.2
80.5~91.4
74.9~90.0
72.7~92.6
72.6~87.8
79.1~95.2
80.8~96.4
73.5~93.1
73.6~94.5
78.1~93.7
83.4~96.6
78.5~103.4
78.1~93.6
74.9~97.6
82.3~96.9
78.5~104.6
74.1~95.0
81.6~96.9
73.8~93.6
78.6~97.2
84.5~95.8
82.6~97.3
76.5~95.2
75.9~102.1
75.2~95.2
73.4~92.9
80.2~103.5
猪肝/
回收率%
72.3~86.1
75.9~90.8
80.7～91.2
73.1~86.9
72.5~87.8
74.6~91.5
82.7~91.8
80.4~94.9
83.8~97.9
74.4~107.2
77.3~93.8
85.3~94.9
79.3~93.6
75.6~95.8
82.2~96.4
77.7~93.5
82.1~95.6
76.7~98.0
75.9~103.7
80.5~94.5
73.9~105.0
81.3~95.3
80.2~94.9
81.6~105.9
77.3~97.4
79.2~96.8
83.4~107.3
74.5~95.8
74.3~90.9
83.2~98.1
84.2~95.9
牛肉/
回收率%
74.6~90.5
83.8~100.6
82.0~91.5
75.6~89.0
76.4~101.1
75.0~93.3
80.0~93.4
71.2~93.6
80.5~105.3
82.1~93.4
73.9~96.0
80.8~95.7
86.7~102.5
78.4~92.4
83.6~95.0
75.2~102.6
73.8~93.3
82.8~97.3
81.5~96.4
73.7~98.8
82.0~95.6
72.6～105.2
83.0~95.6
82.4~98.6
82.2~95.2
80.6~97.5
72.2~103.5
73.6~96.4
76.2~105.4
83.8~105.2
84.0~96.9
75.8~95.6
DBS22/012-2013
/回收率%
71.7~85.2
78.8~89.7
84.2~93.3
73.4~87.3
74.2~92.1
73.6~104.7
81.5~95.2
74.6~95.2
80.4~95.9
72.9~91.7
75.6~95.8
83.5~104.0
72.4~94.7
85.2106.2
78.3~96.2
80.0~103.3
76.6~94.7
74.2~106.3
80.5~94.6
79.7~96.7
78.5~94.8
82.8~96.3
81.5~95.9
77.9~97.0
82.7~94.3
80.6~97.5
73.6~96.4
79.2~97.9
80.7~98.0
76.9~94.1
81.8~97.1
71.2~93.6
83.5~98.5
DBS22/012-2013
S-美托洛尔
R-美托洛尔
莱卡多巴胺
溴氯布特罗
福莫特罗
溴布特罗
马布特罗
克仑潘特
苯氧丙酚胺
拉贝特罗
异克仑潘特
马喷特罗
苯乙醇胺A
88.3~106.3
85.1~93.9
82.9~98.4
81.0~108.0
67.9~89.8
75.6~95.3
71.2~93.6
73.4~92.9
81.8~96.2
70.2~85.1
76.3~90.7
73.5~92.0
81.0~108.0
74.9~92.8
75.6~95.3
85.2~98.6
86.4~100.9
83.8~99.0
88.3~106.3
85.1~93.9
82.9~98.4
83.1~96.5
80.8~92.3
90.3~106.4
80.3~97.1
83.5~96.9
85.2~98.2
78.8~95.5
83.2~94.9
85.9~95.8
83.4~89.9
80.0~92.4
79.7~96.1
76.6~94.3
70.2～97.5
75.7~92.5
76.4~96.8
80.1~94.9
86.3~94.6
81.7~94.3
78.4~96.1
75.8~95.6
83.1~108.2
78.4~105.8
86.6~95.5
84.2~95.9
74.5~91.9
80.3~96.2
73.4~95.8
76.1~102.6
84.3~93.7
83.8~96.8
82.9104.3
85.5~98.7
79.9~94.8
83.9~96.0
86.5~98.2
73.9~91.7
88.2~98.3
78.7~96.5
82.4~95.2
85.1~95.5
84.3~96.1
87.7~105.6
78.4~90.2
84.5~95.0
82.6~93.1
79.5~96.3
75.2~94.7
76.2~96.2
77.4~95.3
75.8~95.9
73.6~89.8
77.5~90.4
80.9~96.1
83.1~96.5
80.8~92.3
90.3~106.4
78.6~93.4
75.7~93.8
80.3~92.7
75.8~95.6
83.1~108.2
78.4~105.8
79.9~90.3
76.8~96.1
73.7~89.9
79.9~95.0
83.7~97.9
87.6~104.4
82.6~96.3
85.8103.7
79.2~95.9
81.7~94.3
78.4~96.1
85.8~94.8
79.9~104.3
80.6~94.7
86.1~95.8
77.9~94.6
81.1~93.8
85.4~99.0
83.3~107.4
77.7~90.4
70.0~96.7
78.3~101.2
74.6~102.7
72.5~94.6
77.8~96.0
86.6~95.5
85.8~96.1
84.2~95.9
77.9~94.6
81.1~93.8
85.4~99.0
77.0~92.8
75.4~107.4
85.6~97.3
66.8~94.2
79.7~98.9
84.5~97.6
76.7~96.1
84.2~106.6
77.5~96.3
84.3~98.6
82.5~99.2
80.8~95.7
85.7~97.2
83.6~95.1
75.4~101.1
84.5~104.5
81.0~95.2
84.5~96.4
82.1~93.9
85.3~98.4
84.4~97.5
82.3~93.3
85.1~106.6
79.9~93.8
75.5~90.3
76.7~91.2
83.8~93.2
78.6~105.3
71.7~90.9
75.1~91.7
71.2~96.4
79.6~105.8
72.2~98.5
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