GB 4789.8-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验 GB4789.8-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB4789.8—2016
食品安全国家标准
食品微生物学检验
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验
2016-08-31发布
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2017-03-01实施
本标准代替GB/T4789.82008《食品卫生微生物学检验本标准与GB/T4789.8—2008相比，主要变化如下GB4789.8—2016
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》。标准名称修改为“食品安全国家标准食品微生物学检验修改了典型菌落的形态描述；
删除了生化鉴定中的商品化名称；描述了血清鉴定的方法。
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验”；I
1范围
食品安全国家标准
食品微生物学检验
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验
GB4789.8—2016
本标准规定了食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersiniaenterocolitica）的检验方法。本标准适用于食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检验。设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：冰箱：0℃~4℃。
恒温培养箱：26℃±1℃、36℃土1℃。显微镜：10倍～100倍。
均质器。
天平：感量0.1g。
灭菌试管：16mm×160mm、15mmX100mm。灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。锥形瓶：200mL、500mL。
灭菌平皿：直径90mm。
微生物生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统。培养基和试剂
改良磷酸盐缓冲液：见A.1。
CIN-1培养基（CepulodinIrgasanNovobiocinAgar)：见A.2。改良Y培养基（AgarY,Modified）：见A.3。改良克氏双糖培养基：见A.4。
糖发酵管：见A.5。
鸟氨酸脱羧酶试验培养基：见A.6。半固体琼脂：见A.7。
缓冲葡萄糖蛋白陈水[甲基红(MR)和V-P试验用]：见A.8。碱处理液：见A.9。
尿素培养基：见A:10。
营养琼脂：见A.11。
小肠结肠炎耶尔森氏菌诊断血清1
检验程序
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验程序见图1。签样25（或25ml.225ml.改良渐缓冲液 ±
肉及其而，食品
0.5ml.详液14.5 ml.战处理液，混合48 h-72 h
凯及花制品
按种CT>-I1培养其、改良 Y培养26+:℃4812h
挑取可疑菌着，改息戊双油词验2 +1
尿索酶试验
et cl ch-i h
半固体动力试验
生化装定
九清分（可造假）
图1小肠结肠炎耶尔森氏菌检验程序5操作步骤
5.1增菌
GB4789.8—2016
以无菌操作取25g（或25mL）样品放人含有225mL改良磷酸盐缓冲液增菌液的无菌均质杯或均质袋内，以8000r/min均质1min或拍击式均质器均质1min。液体样品或粉末状样品，应振荡混匀均质后于26℃土1℃增菌48h～72h。增菌时间长短可根据对样品污染程度的估计来确定。5.2碱处理
除乳与乳制品外，其他食品的增菌液0.5mL与碱处理液4.5mL充分混合15s。2
5.3分离
GB 4789.8—2016
将乳与乳制品增菌液或经过碱处理的其他食品增菌液分别接种于CIN-1琼脂平板和改良Y琼脂平板：26℃士1℃培养48h士2h。典型菌落在CIN-1上为深红色中心.周围具有无色透明圈（红色牛眼状菌落）.菌落大小为1mm～2mm，在改良Y琼脂平板上为无色透明、不黏稠的菌落。5.4改良克氏双糖试验
分别挑取5.3中的可疑菌落3个～5个，分别接种于改良克氏双糖铁琼脂，接种时先在斜面划线，再于底层穿刺，26℃土1℃培养24h，将斜面和底部皆变黄且不产气的培养物做进一步的生化鉴定5.5尿素酶试验和动力观察
用接种环挑取一满环5.4得到的可疑培养物，接种到尿素培养基中，接种量应足够大，振摇几秒钟，26℃士1℃培养2h～4h。将尿素酶试验阳性菌落分别接种于两管半固体培养基中，于26℃士1℃和36℃士1℃培养24h。将在26℃有动力而36℃无动力的可疑菌培养物划线接种营养琼脂平板，进行纯化培养，用纯化物进行革兰氏染色镜检和生化试验。5.6革兰氏染色镜检
将纯化的可疑菌进行革兰染色。小肠结肠炎耶尔森氏菌呈革兰氏阴性球杆菌，有时呈椭圆或杆状大小为（0.8μm~3.0μm）×0.8μm5.7
生化鉴定
从5.5中的营养琼脂平板上挑取单个菌落接种生化反应管，生化反应在26℃士1℃进行。小肠5.7.1
结肠炎耶尔森氏菌的主要生化特征以及与其他相似菌的区别见表1表1
小肠结肠炎耶尔森氏菌与其他相似菌的生化性状鉴别表小肠结肠炎
动力（26℃）
尿素酶
V-P试验（26℃）
鸟氨酸脱羧酶
棉子糖
山梨醇
甘露醇
鼠李糖
耶尔森氏菌
Yersinia
enterocolitica
中间型耶
尔森氏菌
Yersinia
intermedia
注：十阳性；一阴性：d有不同生化型弗氏耶
尔森氏菌
Yersinia
frederiksenii
克氏耶
尔森氏菌
Yersinia
kirstensenii
假结核耶
尔森氏菌
Yersinia
pseudotuberculosis
鼠疫耶
尔森氏菌
Yersinia
pestis
5.7.2如选择微生物生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统，可根据5.6镜检结果，选择革兰阴性球杆菌菌落作为可疑菌落：从5.5所接种的营养琼脂平板上挑取单菌落，使用微生物生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统进行鉴定。
5.8血清型鉴定（选做项目）
GB4789.8—2016
除进行生化鉴定外，可选择做血清型鉴定。在洁净的载玻片上加一滴O因子血清，将待试培养物混人其内，使成为均一性混浊悬液.将玻片轻轻摇动0.5min～1min，在黑色背景下观察反应。如在2min内出现比较明显的小颗粒状凝集者，即为阳性反应，反之则为阴性，另用生理盐水作对照试验，以检查有无自凝现象；具体操作方法可按GB4789.4中沙门氏菌O因子血清分型方法进行。6
结果与报告
综合以上及生化特征报告结果，报告25g（或25mL）样品中检出或未检出小肠结肠炎耶尔森氏菌。4
改良磷酸盐缓冲液
磷酸氢二钠
磷酸二氢钠
氯化钠
三号胆盐
山梨醇
2制法
附录A
培养基和试剂
GB 4789.8—2016
将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中，再加人三号胆盐及山梨醇，溶解后校正pH至7.6，分装试管，于121℃高压灭菌15min，备用。
2CIN-1培养基
基础培养基：
酵母浸膏
甘露醇
氯化钠
去氧胆酸钠
硫酸镁
蒸馏水
校正pH至7.5土0.1，将基础培养基于121℃高压灭菌15min，备用。2Irgasan（二氯苯氧氯酚）：可用95%的乙醇作溶剂，溶解二苯醚，配成0.4%的溶液来替代A.2.2
Irgasan，待基础培养基冷至80℃时，加人1mL混匀。3冷至50℃时，加人：
中性红（3.0mg/mL）
结晶紫（0.1mg/mL）
头孢菌素（1.5mg/mL）
新生霉素（0.25mg/mL）
最后不断搅拌加人10.0mL的10%氯化锶，倾注平血。5
改良Y培养基
蛋白陈
氯化钠
草酸钠
去氧胆酸钠
三号胆盐
丙酮酸钠
孟加拉红
水解酪蛋白
蒸馏水
1000ml
GB4789.8—2016
将A.3.1中成分混合，校正pH至7.4士0.1。于121℃高压灭菌15min，待冷至45℃左右时，倾注平血。
改良克氏双糖培养基
蛋白陈
牛肉膏
酵母膏
山梨醇
葡萄糖
氯化钠
柠檬酸铁铵
硫代硫酸钠
蒸馏水
1000mL
将酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH至7.4。加人0.2%的酚红溶液12.5mL，摇匀，分装试管，装量宜多些，以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。A.5
糖发酵管
牛肉膏
蛋白陈
氯化钠
磷酸氢二钠
0.2%溴麝香草酚蓝溶液
蒸馏水
2制法
1000mL
GB4789.8—2016
A.5.2.1葡萄糖发酵管按A.5.1中成分配好后，校正pH至7.4，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。A.5.2.2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。A.5.3
试验方法
从琼脂斜面上挑取少量培养物接种于26℃士1℃培养，一般观察2d～3d。迟缓反应需观察14d30d
鸟氨酸脱羧酶试验培养基
A.6.1成分
蛋白陈
酵母浸膏
葡萄糖
蒸馏水
1.6%溴甲酚紫-乙醇溶液
L-鸟氨酸或DL-鸟氨酸
1000mL
0.5g/100mL或1g/100mL
除鸟氨酸以外的成分加热溶解后，分装，每瓶100mL，分别加人鸟氨酸。L-鸟氨酸按0.5%加人，DL-鸟氨酸按1%加人。再校正pH至6.8。对照培养基不加鸟氨酸。分装于无菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。试验方法
从琼脂斜面上挑取培养物接种，于26℃士1℃培养18h～24h，观察结果。鸟氨酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管为黄色A.7半固体琼脂
A.7.1成分
蛋白陈
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
2制法
0.35g~0.4g
GB4789.8—2016
将A.7.1中成分配好，煮沸使溶解，并校正pH至7.4。分装小试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。
注：供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用、缓冲葡萄糖蛋白陈水[甲基红（MR)和V-P试验用A.8
A.8.1成分
磷酸氢二钾
葡萄糖
蒸馏水
1000ml
溶化后校正pH至7.0，分装试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。A.8.3
甲基红（MR）试验
自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于26℃土1℃培养2d～5d,哈夫尼亚菌则应在22℃～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。4V-P试验
用琼脂培养物接种本培养基中，于26℃士1℃培养2d～4d。哈夫尼亚菌则应在22℃～25℃培养。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36℃土1℃培养4h再进行观察。碱处理液
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氯化钠
蒸馏水
121℃高压灭菌15min。
0.5%氢氧化钾溶液
氢氧化钾
蒸馏水
121℃高压灭菌15min。
将0.5%氯化钠及0.5%氢氧化钾等量混合。A.10
尿素培养基
酵母浸膏
磷酸二氢钾
磷酸氢二钠
蒸馏水
A.10.2制法
1000mL
GB4789.8—2016
将A.10.1中成分于蒸馏水中溶解，校正pH至6.8土0.2。不要加热，过滤除菌，无菌分装于灭菌小试管中,每管约为3mL。
试验方法
挑取琼脂培养物接种在尿素培养基,26℃士1℃培养24h。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。
营养琼脂
蛋白陈
牛肉浸膏
氯化钠
蒸馏水
1000mL
将A.11.1中成分于蒸馏水中溶解，校正pH至7.3士0.2。121℃高压灭菌15min。9
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