GB 23200.45-2016 食品安全国家标准 食品中除虫脲残留量的测定 液相色谱-质谱法 GB23200.45-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

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中华人民共和国国家标准國
GB23200.452016
代替SN0528—2012
食品安全国家标准
食品中除虫脲残留量的测定
液相色谱-质谱法
National food safety standards-DeterminationofdiflubenzuronresidueinfoodsLiquid chromatography-mass spectrometry2016-12-18发布
2017-06-18实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会中华人民共和国农业部
国家食品药品监督管理总局
GB23200.452016
本标准代替SN/T0528-2012《出口食品中除虫脲残留量检测方法高效液相色谱一质谱/质谱法》本标准与SN/T0528-2012相比，主要变化如下：一标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式：一标准名称中“出口食品”改为“食品”：一标准范围中增加“其它食品可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：—SN0528-1996：
—SN/T0528-2012。
1范围
食品安全国家标准
GB23200.45-2016
食品中除虫残留量的测定，液相色谱一质谱法本标准规定了食品中除虫脲残留的液相色谱-质谱检测方法。本标准适用于大米、玉米、大豆、小麦、花生（仁）、橙子、苹果、西芹、洋葱、蘑菇（鲜）、蜂蜜、蘑菇（干）、茶、鸡肉、牛肉、猪肉、猪肝中除虫脲残留量的测定和确证，其它食品可参照执行。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样中的除虫腺用之睛提取，分散固相萃取净化后，用液相色谱一串联质谱仪测定并确证，外标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1试剂
4.1.1乙睛（CH,CN）：色谱纯
2正已烷（CH14）。
冰乙酸（CH,COOH）。
无水乙酸钠（CHCOONa）
氯化钠（NaCI）：450℃灼烧4h，密封备用。4.1.6
无水硫酸钠（Na2SO4）：650℃灼烧4h，贮藏干燥器中备用。无水硫酸镁（MgSO4：650℃灼烧4h，贮藏干燥器中备用。4.1.7
4.1.8N-丙基乙二胺（Primarysecondaryamine，PSA）：PSA填料或相当，粒度40μm。4.1.9十八烷基硅烷键合相（C1s）：Cis填料或相当，粒度50μm。4.2溶液配制
4.2.1冰乙酸-乙腈溶液（0.1+99.9，V/V）：取0.1mL冰醋酸加入99.9mL乙睛，混匀后备用。4.3标准品
4.3.1除虫脲标准品：CAS号：35367-38-5，纯度大于等于96%。4.4标准溶液配制
4.4.1除虫脲标准储备溶液：准确称取适量除虫脲标准品（精确至0.1mg），用乙睛配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液，置-18℃冰箱中保存，保存期为6个月。4.4.2除虫脲标准工作溶液：根据需要用乙睛将标准储备溶液稀释成适当浓度的标准工作液，临用现配。
4.4.30.005mo1/L乙酸铵水溶液：称取0.3850g乙酸铵，用水溶解定容到1L，过0.45μum滤膜备用。
4.5材料
4.5.1微孔滤膜：0.22um，有机系。5仪器和设备
5.1高效液相色谱-串联质谱仪：三重四极杆串联质谱，配有电喷雾离子源（ESI）。5.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。1
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5.3具塞离心管：50mL，聚丙烯旋盖塑料离心管或相当者；10mL，玻璃具塞离心管或相当者。5.4涡旋混合器。
5.5超声波清洗器。
5.6离心机。
5.7样品粉碎机。免费标准下载网bzxz
5.8组织捣碎机。
5.9样品筛：孔径为2mm。
5.10高速组织匀浆机。
6试样制备与保存
6.1试样制备
6.1.1大米、玉米、大豆、小麦、蘑菇（干）、茶取代表性样品500g，粉碎后使其全部通过样品筛，混匀后装入洁净容器内，密封并标识。6.1.2花生（仁）、橙子、苹果、西芹、洋葱、蘑菇（鲜）取有代表性样品500g，用粉碎机粉碎。混匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。6.1.3鸡肉、牛肉、猪肉、猪肝
样品用组织捣碎机捣碎，充分混匀。取250g捣碎样用高速组织匀浆机匀浆至糊状，若不立即测定则需冷冻保存。
6.1.4牛肉、牛肝、鱼肉、鸡肉
取有代表性样品500g，取可食部分经捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。
6.1.5蜂蜜
取代表性样品500g，对于无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀。对于有结晶的样品，在密闭的情况下，低于60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，于常温下保存。注：以上样品取样部位按GB2763附录A执行。6.2试样保存
粮谷类、坚果类、茶叶等脱水类试样可在常温下密封保存：水果、蔬菜试样应密封冷藏保存，如果不进行立即检测，则需冷冻保存：畜禽肉及其制品需冷冻保存制样和样品保存过程中，应防止样品污染或待测物的含量变化。所有制备样品应置于洁净、密封容器内并做好标识。含水样品解冻后应充分混匀。7测定步骤
7.1提取
7.1.1大米、玉米、大豆、小麦、花生、（仁）称取5g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加5mL水混匀，放置30min。加入10mL冰乙酸一乙睛溶液，加入1g无水乙酸钠和2g氯化钠，涡旋振荡2min，30℃恒温水浴超声提取30min后5000r/min离心10min，上层清液过装填适量无水硫酸钠漏斗收集于50mL具塞离心管中，加入10mL用乙睛饱和的正已烷，振荡5min，静置分层，弃去正已烷层，待净化。7.1.2橙子、苹果、西芹、洋葱、蘑菇（鲜）、蜂蜜称取5g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中。加5mL水混匀，放置30min。加入10mL冰乙酸一乙睛溶液，加入1g无水乙酸钠和2g氯化钠，涡旋振荡2min，30℃恒温水浴超声提取30min后5000r/min离心10min，上层清液过装填适量无水硫酸钠漏斗收集于50mL具塞离心管中，待净化。7.1.3蘑菇（干）、茶
称取2.5g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加10mL水混匀，放置60min。加入10mL冰乙酸一乙睛溶液，加入1g无水乙酸钠和2g氯化钠，涡旋振荡2min，30℃恒温水浴超声提取302
GB23200.452016
min后5000r/min离心10min，上层清液过装填适量无水硫酸钠漏斗收集于50mL具塞离心管中，待净化。
7.1.4鸡肉、牛肉、猪肉、猪肝
称取2.5g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中。加入10mL冰乙酸一乙睛溶液，加入1g无水乙酸钠和2g氯化钠，均质2min，30℃恒温水浴超声提取30min后5000r/min离心10min，上层清液过装填适量无水硫酸钠漏斗收集于50mL具塞离心管中，加入10mL用乙睛饱和的正已烷，振荡5min，静置分层，弃去正已烷层，待净化。7.2净化
称取0.05gPSA，0.1gC18，0.15g无水硫酸镁置于10mL玻璃具塞离心管中，准确吸取7.1所得提取液2.0mL至此离心管中，准确涡旋振荡1min，以5000r/min的转速离心2min。取上清液1mL过0.22μm有机微孔滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定。7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Cis柱，150mm×2.1mm（内径），粒径5μm，或相当者；流动相：A（乙睛），B（0.005mol/L乙酸铵水溶液）。梯度洗脱条件参见附录A中表A.1：b)
进样量：10μL；
柱温：30℃：
流速：0.2mL/min。
质谱参考条件
离子源：电喷雾离子源（ESI)；扫描方式：负离子扫描：
检测方式：多反应监测（MRM)：监测离子对：母离子308.9（m/z），定量离子对308.9/288.9（m/z）；定性离子对分别为308.9/288.9d)
(m/z)、308.9/92.9（m/z);
e）其它质谱参考条件见附录A中表A.2和A.3。7.3.3定量测定
根据样液中待测物的含量，选定浓度相近的标准工作溶液一起进行色谱分析。待测样液中除虫脲的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液及样液等体积参插进样测定。在上述仪器条件下，除虫脲保留时间约为7.51min。液相色谱-串联质谱总离子流和质量色谱图参见附录B图B.1。7.3.4定性测定
按照上述条件测定样品和标准品，样品中待测物色谱峰保留时间与标准品对应的保留时间偏差应一致，允许偏差小于±2.5%；并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大充许相对偏差不超过表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。
表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对丰度（基峰）
允许的相对偏差
7.4空白实验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。>20%至50%
>10%至20%
≤10%
结果计算和表述
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用LC-MS/MS的数据处理软件或按下式（1）计算试样中除虫脲的含量，计算结果应扣除空白值。AxcxV
式中：
-试样中除虫脲含量，单位为微克每千克（μug/kg）；样液中除虫脲的峰面积；
标准工作溶液中除虫腺的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；标准工作溶液中除虫的峰面积：样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）：注：计算结果须扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。9精密度
9.1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录D的要求
9.2在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录E的要求。
10定量限和回收率
10.1定量限
本方法中除虫脲在大米、玉米、大豆、小麦、花生（仁）、橙子、苹果、西芹、洋葱、蘑菇（鲜）、蜂蜜的定量限为10.0μg/kg，鸡肉、牛肉、猪肉、猪肝、蘑菇（干）、茶的定量限为20.0ug/kg。10.2回收率
本方法在不同基质中10~500μg/kg添加浓度水平上的回收率为65%~115%，数据参见附录C。4
化合物
除虫脲
时间/min
10.1~15.0
仪器参数
电喷雾电压（IS）
附录A
（资料性附录）
参考液相色谱一串联质谱条件
表A.1液相色谱洗脱条件
表A.2质谱条件
雾化气压力（GS1）
气帘气压力（CUR）
辅助气压力（GS2）
离子源温度（TEM）
表A.3多反应监测条件
母离子
*离子用于定量。
子离子
去簇电压
碰撞电压
参数值
-4500V
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45psi（氮气）
10psi（氮气）
50psi（氮气）
500℃
碰撞室入
口电压/
碰撞室出
口电压/
驻留时间/
(msec)
1）非商业性声明：附录表A所列参数是在API4000质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。5
附录B
（资料性附录）
液相色谱-质谱/质谱法除虫脲标准品色谱图751
1-6522 3.26
Ti-e rnirn
limemin
308.9/288.9
308 5873
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除兰眠业，LS1
M1ex3020.= cps
843.3313319819812245
17 1224 74
I'time mia
图B.1除虫脲标准物质（0.01ng/mL）的多反应监测（MIRM）色谱图13
Msx130.= cps
样品名称
花生(仁)
蘑菇(鲜）
附录C
（资料性附录）
不同基质中除虫脲的添加回收率表C.1添加水平及回收率范围
添加浓度/（μg/kg）
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回收率范围/%
73.3~82.6
70.5~101.5
77.2~107.1
72.4~81.5
75.5~106.4
71.0~95.1
67.2~90.5
70.5~95.7
77.3~87.5
75.3~94.1
70.1~85.5
72.0~98.7
85.6~107.6
87.2~115.4
79.5~109.5
86.3~115.5
82.4~107.6
85.0~109.2
75.3~89.6
85.0~103.5
82.6~105.5
75.0~112.8
72.4~102.5
72.1~101.5
76.0~87.6
75.0~109.2
81.0~106.8
80.5~105.5
90.0~108.2
82.0~105.7
80.0~103.7
92.0~100.0
93.8107.5
82.5~102.7
蘑菇 (干)
GB23200.452016
85.0114.2
87.5~105.3
78.6~108.5
65.4~92.1
70.3~81.6
68.8~87.4
被测组分含量
>0.001≤0.01
>0.01≤0.1
（规范性附录）
实验室内重复性要求
表D.1实验室内重复性要求
精密度
GB23200.452016
被测组分含量
>0.001≤0.01
>0.01≤0.1
(规范性附录）
实验室间再现性要求
实验室间再现性要求
精密度
GB23200.452016
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