GB 23200.74-2016
基本信息
标准号： GB 23200.74-2016
中文名称：食品安全国家标准 食品中井冈霉素残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
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相关标签： 食品安全 国家标准 食品 霉素 残留量 测定 色谱 质谱 质谱法
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标准简介
GB 23200.74-2016 食品安全国家标准 食品中井冈霉素残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法
GB23200.74-2016
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中华人民共和国国家标准國
GB23200.742016
代替SN/T23872009
食品安全国家标准
食品中井冈霉素残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Nationalfood safety standards-DeterminationofvalidamycinresidueinfoodsLiquid chromatography-mass spectrometry2016-12-18发布
2017-06-18实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会中华人民共和国农业部
国家食品药品监督管理总局
GB23200.742016
本标准代替SN/T2387-2009《进出口食品中井冈霉素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》本标准与SN/T2387-2009相比，主要变化如下：一标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式：一标准名称中“进出口食品”改为“食品”；一标准名称中“液相色谱-质谱/质谱法”改为“液相色谱-串联质谱法”；一标准范围中增加“其它食品可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：—SN/T2387-2009。
1范围
食品安全国家标准
GB23200.74-2016
食品中井风霉素残留量的测定液相色谱一质谱/质谱法本标准规定了食品中井冈霉素残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。本标准适用于大米、卷心菜、葱、胡萝卜、番茄、黄瓜、菠菜、木耳、梨、柠檬、杏仁、茶叶、猪肉、猪肝、罗非鱼、虾中井冈霉素残留的检测和确证，其它食品可参照执行。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样中的井冈霉素残留用甲醇水溶液提取，经HLB固相萃取柱或乙酸乙酯液液萃取净化，用液相色谱质谱/质谱仪检测和确证，外标法定量。4试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为液相色谱纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。4.1试剂
4.1.1乙酸铵（CH,COONH4，CAS号：631-61-8）。4.1.2甲醇（CH,OH，CAS号：67-56-1）。4.1.3乙晴（CH,CN，CAS号：75-05-8）。4.1.4乙酸乙酯（CH,COOCH2CH3，CAS号：141-78-6）。4.1.5冰乙酸（CH;COOH，CAS号：64-19-7）。4.2溶液配制
4.2.1甲醇溶液（9+1）：量取90mL甲醇加入10mL水中，混匀4.2.25mmo1/乙酸铵缓冲溶液：称取0.385g乙酸铵，用水溶解并定容至1000mL，以冰乙酸调节pH到4.5±0.1。
4.3标准品
4,3.1井冈霉素标准品（ValidamycinA，分子式：C20H35NO13，CAS：37248-47-8）：纯度≥91.0%。4.4标准溶液配制
4.4.1井冈霉素标准储备溶液：称取2mg（精确到0.1mg）井冈霉素的标准品，用水溶解并定容至25mL棕色容量瓶中，配制成浓度为80mg/L的标准储备溶液。4.4.2井冈霉素基质标准工作溶液：根据需要，用空白样品按照样品处理步骤得到的提取液，配制不同浓度的基质标准溶液，现用现配。4.5材料
4.5.1HLB柱：6mL/200mg或相当者：使用前依次用6mL甲醇和6mL水活化。4.5.2滤膜：0.22μm，双相。
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配大气压化学电离源（APCI）。5.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。5.3旋涡混合器。
5.4均质器。
5.5离心机：转速大于3000r/min。5.6氮吹浓缩仪。
5.7离心管：50mL聚四氟乙烯离心管和50mL具塞玻璃离心管。5.8刻度试管：30mL，最小刻度为0.1mL。5.9pH计：感量0.1。
6样品制备与保存
6.1制样要求
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.2茶叶及粮谷类
GB23200.742016
取代表性样品约500g，经磨碎机全部磨碎并通过2.0mm圆孔筛，混匀，装入洁净容器内密封，标明标记，于0℃～4℃冷藏存放。
6.3蔬菜及水果类
取代表性样品约500g，切碎，经多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标记，于-18℃以下冷冻存放。
6.4坚果
取代表性样品约500g，用磨碎机全部磨碎并通过20mm圆孔筛，混匀，装入洁净容器内密封，标明标记于0℃～4℃冷藏存放
6.5动物肌肉、肝脏、鱼肉、虾
取代表性样品部分约500g，切碎，经多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标记，于-18℃以下冷冻存放。
注：以上样品取样部位按GB2763附录A执行。7分析步骤
7.1提取
7.1.1大米、木耳、否仁
称取2.5g试样（精确至0.01g），置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入20mL甲醇溶液，用均质器高速匀浆提取2min，3000r/min离心5min，收集上清液于一刻度试管中。离心后的残渣用5mL甲醇溶液重复上述提取步骤1次，合并上清液，在45℃水浴下吹氮浓缩至2.5mL以下，待净化。7.1.2、卷心菜、葱、胡萝卜、番茄、黄瓜、菠菜、梨、柠檬、猪肉、猪肝、鱼肉、虾称取2.5g试样（精确至0.01g），置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入20mL甲醇，用均质器高速匀浆提取2min，3000r/min离心5min，收集上清液于一刻度试管中。离心后的残渣用5mL甲醇溶液重复上述提取步骤1次，合并上清液，在45℃水浴下吹氮浓缩至2.5mL以下，待净化。7.1.3茶叶
称取1g试样（精确到0.01g），加1.5mL水，混匀，其余按7.1.1操作。7.2净化
7.2.1固相萃取（SPE）净化
GB23200.742016
将7.1中所得提取溶液转入经过预处理的HLB固相萃取柱中，以约1滴/s流速使样品溶液通过固相萃取柱，用2mL水淋洗柱子，收集全部流出液和淋洗液到一刻度试管，加水定容至5.00mL，混匀，过0.22μm滤膜，供测定。
7.2.2液-液分配净化
将7.1中所得提取溶液用水定容至5.00mL，混匀，转入50mL具塞玻璃离心管中，加入5mL乙酸乙酯，旋涡振荡3min，3000r/min离心5min，弃去上层乙酸乙酯相，再用5mL乙酸乙酯重复操作一次。过0.22um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
色谱柱：HILIC（250mm×4.6mm，粒径5um），或相当者。流动相：乙睛+5mmo1/L乙酸铵缓冲溶液，梯度洗脱（见表1）。流速：1000μL/min。
a）柱温：35℃。
b）进样量：10μL。
表1液相色谱的梯度洗脱条件
时间/min
7.3.2质谱参考条件
质谱条件参见附录A。
7.3.3色谱测定与确证
5mmo1/L乙酸铵缓冲溶液/%
乙睛/%
在仪器最佳工作条件下，根据样液中被测化合物的含量情况，选定峰高相近的基质标准工作溶液，对基质标准工作溶液和样液等体积参差进样测定。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，基质标准工作溶液和样液中待测化合物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述仪器条件下，并冈霉素的参考保留时间约为8.10min；井冈霉素标准品色谱图参见附录B中图B.1。
表2在相同实验条件下，样液中待测物质的保留时间，与基质标准工作溶液的保留时间偏差在土2.5%之内；且样液中定性离子对的相对丰度与浓度接近的基质标准工作溶液进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表2使用液相色谱-质谱/质谱定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
7.4空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。8结果计算与表述
>20%至50%
>10%至20%
≤10%
采用外标法定量，按式（1）计算试样中并风霉素残留量，计算结果应扣除空白值。cxV
式中：
X一试样中井冈霉素残留量，单位为微克每千克（ug/kg）；c一从标准工作曲线得到的样液中被测组分浓度，单位为微克每升（ug/L）：V一样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：m一最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。注：计算结果须扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。精密度
GB23200.74-2016
9.1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录D的要求。
9.2在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录E的要求。
10定量限和回收率
10.1定量限
本方法井冈霉素的定量限为10μg/kg。10.2回收率
当添加水平为10Hg/kg、25μg/kg、50μg/kg时，不同基质中井冈霉素的添加回收率参见附录C。V
参考质谱条件：
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件
离子化模式：大气压化学电离正离子模式（APCI+）。质谱扫描方式：多反应监测（MRM）分辨率：单位分辨率。
气帘气压力（CUR）：207KPa（氮气）。电晕放电电流（NC）：5.00uA。雾化温度（TEM）：600℃。
雾化气压力：138KPa（氮气）
碰撞气压力（CAD）：34.5KPa（氮气）。其它质谱参数见表A.1。
主要参考质谱参数
化合物
井冈霉素
离子对
498.3/336.3
498.3/178.1*
498.3/142.2bzxZ.net
驻留时间
去簇电压
(DP）/V
入口电压
(EP）/N
碰撞能量
(CE)/eV
GB23200.742016
碰撞池出口电压
(CXP）V
注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。离子对为定量离子对
附录B
(资料性附录）
标准品的多反应监测（MRM）色谱图8.10
Time, min
Time. min
Time, min
GB23200.742016
离子对498.3/336.3
离子对498.3/178.1
离子对498.3/142.2
图B.1井冈霉素标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图16
卷心菜
胡萝卜
附录C
（资料性附录）
不同基质中井冈霉素的添加回收率表C.1不同基质中井冈霉素的添加回收率添加浓度/ug/kg
回收率范围/%
87.2~101.8
92.8~101.6
89.2~100.8
96.8~109.4
94.4~108.0
96.0~108.0
94.6~108.4
93.6~109.6
93.6108.0
91.6~109.2
91.2~105.6
91.2~108.4
91.6~107.2
91.2~111.2
94.8~111.6
98.6~111.4
89.6~108.8
95.2~111.6
87.0104.2
92.8~108.8
89.6~108.0
92.8107.2
92.8~109.6
89.2~108.8
罗非鱼
添加浓度/ug/kg
GB23200.742016
回收率范围/%
86.6~111.0
87.2~108.8
87.2~113.6
86.2~111.6
89.6~102.4
87.6~106.8
90.6~105.4
87.2~111.2
99.6~113.2
86.0~107.8
87.2~106.4
86.8~104.0
89.4~105.6
87.2~108.0
88.0~101.6
90.0~106.4
92.0~106.4
87.2~106.4
88.8~107.2
96.8~112.8
88.4~113.2
93.4~106.2
93.6113.6
88.0112.0
被测组分含量
>0.001≤0.01
>0.01≤0.1
附录D
(规范性附录）
实验室内重复性要求
表D.1实验室内重复性要求
精密度
GB23200.742016
被测组分含量
>0.001≤0.01
>0.01≤0.1
附录E
(规范性附录）
实验室间再现性要求
表E.1实验室间再现性要求
精密度
GB23200.742016
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代替SN/T23872009
食品安全国家标准
食品中井冈霉素残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Nationalfood safety standards-DeterminationofvalidamycinresidueinfoodsLiquid chromatography-mass spectrometry2016-12-18发布
2017-06-18实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会中华人民共和国农业部
国家食品药品监督管理总局
GB23200.742016
本标准代替SN/T2387-2009《进出口食品中井冈霉素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》本标准与SN/T2387-2009相比，主要变化如下：一标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式：一标准名称中“进出口食品”改为“食品”；一标准名称中“液相色谱-质谱/质谱法”改为“液相色谱-串联质谱法”；一标准范围中增加“其它食品可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：—SN/T2387-2009。
1范围
食品安全国家标准
GB23200.74-2016
食品中井风霉素残留量的测定液相色谱一质谱/质谱法本标准规定了食品中井冈霉素残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。本标准适用于大米、卷心菜、葱、胡萝卜、番茄、黄瓜、菠菜、木耳、梨、柠檬、杏仁、茶叶、猪肉、猪肝、罗非鱼、虾中井冈霉素残留的检测和确证，其它食品可参照执行。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样中的井冈霉素残留用甲醇水溶液提取，经HLB固相萃取柱或乙酸乙酯液液萃取净化，用液相色谱质谱/质谱仪检测和确证，外标法定量。4试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为液相色谱纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。4.1试剂
4.1.1乙酸铵（CH,COONH4，CAS号：631-61-8）。4.1.2甲醇（CH,OH，CAS号：67-56-1）。4.1.3乙晴（CH,CN，CAS号：75-05-8）。4.1.4乙酸乙酯（CH,COOCH2CH3，CAS号：141-78-6）。4.1.5冰乙酸（CH;COOH，CAS号：64-19-7）。4.2溶液配制
4.2.1甲醇溶液（9+1）：量取90mL甲醇加入10mL水中，混匀4.2.25mmo1/乙酸铵缓冲溶液：称取0.385g乙酸铵，用水溶解并定容至1000mL，以冰乙酸调节pH到4.5±0.1。
4.3标准品
4,3.1井冈霉素标准品（ValidamycinA，分子式：C20H35NO13，CAS：37248-47-8）：纯度≥91.0%。4.4标准溶液配制
4.4.1井冈霉素标准储备溶液：称取2mg（精确到0.1mg）井冈霉素的标准品，用水溶解并定容至25mL棕色容量瓶中，配制成浓度为80mg/L的标准储备溶液。4.4.2井冈霉素基质标准工作溶液：根据需要，用空白样品按照样品处理步骤得到的提取液，配制不同浓度的基质标准溶液，现用现配。4.5材料
4.5.1HLB柱：6mL/200mg或相当者：使用前依次用6mL甲醇和6mL水活化。4.5.2滤膜：0.22μm，双相。
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配大气压化学电离源（APCI）。5.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。5.3旋涡混合器。
5.4均质器。
5.5离心机：转速大于3000r/min。5.6氮吹浓缩仪。
5.7离心管：50mL聚四氟乙烯离心管和50mL具塞玻璃离心管。5.8刻度试管：30mL，最小刻度为0.1mL。5.9pH计：感量0.1。
6样品制备与保存
6.1制样要求
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.2茶叶及粮谷类
GB23200.742016
取代表性样品约500g，经磨碎机全部磨碎并通过2.0mm圆孔筛，混匀，装入洁净容器内密封，标明标记，于0℃～4℃冷藏存放。
6.3蔬菜及水果类
取代表性样品约500g，切碎，经多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标记，于-18℃以下冷冻存放。
6.4坚果
取代表性样品约500g，用磨碎机全部磨碎并通过20mm圆孔筛，混匀，装入洁净容器内密封，标明标记于0℃～4℃冷藏存放
6.5动物肌肉、肝脏、鱼肉、虾
取代表性样品部分约500g，切碎，经多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标记，于-18℃以下冷冻存放。
注：以上样品取样部位按GB2763附录A执行。7分析步骤
7.1提取
7.1.1大米、木耳、否仁
称取2.5g试样（精确至0.01g），置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入20mL甲醇溶液，用均质器高速匀浆提取2min，3000r/min离心5min，收集上清液于一刻度试管中。离心后的残渣用5mL甲醇溶液重复上述提取步骤1次，合并上清液，在45℃水浴下吹氮浓缩至2.5mL以下，待净化。7.1.2、卷心菜、葱、胡萝卜、番茄、黄瓜、菠菜、梨、柠檬、猪肉、猪肝、鱼肉、虾称取2.5g试样（精确至0.01g），置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入20mL甲醇，用均质器高速匀浆提取2min，3000r/min离心5min，收集上清液于一刻度试管中。离心后的残渣用5mL甲醇溶液重复上述提取步骤1次，合并上清液，在45℃水浴下吹氮浓缩至2.5mL以下，待净化。7.1.3茶叶
称取1g试样（精确到0.01g），加1.5mL水，混匀，其余按7.1.1操作。7.2净化
7.2.1固相萃取（SPE）净化
GB23200.742016
将7.1中所得提取溶液转入经过预处理的HLB固相萃取柱中，以约1滴/s流速使样品溶液通过固相萃取柱，用2mL水淋洗柱子，收集全部流出液和淋洗液到一刻度试管，加水定容至5.00mL，混匀，过0.22μm滤膜，供测定。
7.2.2液-液分配净化
将7.1中所得提取溶液用水定容至5.00mL，混匀，转入50mL具塞玻璃离心管中，加入5mL乙酸乙酯，旋涡振荡3min，3000r/min离心5min，弃去上层乙酸乙酯相，再用5mL乙酸乙酯重复操作一次。过0.22um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
色谱柱：HILIC（250mm×4.6mm，粒径5um），或相当者。流动相：乙睛+5mmo1/L乙酸铵缓冲溶液，梯度洗脱（见表1）。流速：1000μL/min。
a）柱温：35℃。
b）进样量：10μL。
表1液相色谱的梯度洗脱条件
时间/min
7.3.2质谱参考条件
质谱条件参见附录A。
7.3.3色谱测定与确证
5mmo1/L乙酸铵缓冲溶液/%
乙睛/%
在仪器最佳工作条件下，根据样液中被测化合物的含量情况，选定峰高相近的基质标准工作溶液，对基质标准工作溶液和样液等体积参差进样测定。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，基质标准工作溶液和样液中待测化合物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述仪器条件下，并冈霉素的参考保留时间约为8.10min；井冈霉素标准品色谱图参见附录B中图B.1。
表2在相同实验条件下，样液中待测物质的保留时间，与基质标准工作溶液的保留时间偏差在土2.5%之内；且样液中定性离子对的相对丰度与浓度接近的基质标准工作溶液进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表2使用液相色谱-质谱/质谱定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
7.4空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。8结果计算与表述
>20%至50%
>10%至20%
≤10%
采用外标法定量，按式（1）计算试样中并风霉素残留量，计算结果应扣除空白值。cxV
式中：
X一试样中井冈霉素残留量，单位为微克每千克（ug/kg）；c一从标准工作曲线得到的样液中被测组分浓度，单位为微克每升（ug/L）：V一样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：m一最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。注：计算结果须扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。精密度
GB23200.74-2016
9.1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录D的要求。
9.2在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录E的要求。
10定量限和回收率
10.1定量限
本方法井冈霉素的定量限为10μg/kg。10.2回收率
当添加水平为10Hg/kg、25μg/kg、50μg/kg时，不同基质中井冈霉素的添加回收率参见附录C。V
参考质谱条件：
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件
离子化模式：大气压化学电离正离子模式（APCI+）。质谱扫描方式：多反应监测（MRM）分辨率：单位分辨率。
气帘气压力（CUR）：207KPa（氮气）。电晕放电电流（NC）：5.00uA。雾化温度（TEM）：600℃。
雾化气压力：138KPa（氮气）
碰撞气压力（CAD）：34.5KPa（氮气）。其它质谱参数见表A.1。
主要参考质谱参数
化合物
井冈霉素
离子对
498.3/336.3
498.3/178.1*
498.3/142.2bzxZ.net
驻留时间
去簇电压
(DP）/V
入口电压
(EP）/N
碰撞能量
(CE)/eV
GB23200.742016
碰撞池出口电压
(CXP）V
注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。离子对为定量离子对
附录B
(资料性附录）
标准品的多反应监测（MRM）色谱图8.10
Time, min
Time. min
Time, min
GB23200.742016
离子对498.3/336.3
离子对498.3/178.1
离子对498.3/142.2
图B.1井冈霉素标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图16
卷心菜
胡萝卜
附录C
（资料性附录）
不同基质中井冈霉素的添加回收率表C.1不同基质中井冈霉素的添加回收率添加浓度/ug/kg
回收率范围/%
87.2~101.8
92.8~101.6
89.2~100.8
96.8~109.4
94.4~108.0
96.0~108.0
94.6~108.4
93.6~109.6
93.6108.0
91.6~109.2
91.2~105.6
91.2~108.4
91.6~107.2
91.2~111.2
94.8~111.6
98.6~111.4
89.6~108.8
95.2~111.6
87.0104.2
92.8~108.8
89.6~108.0
92.8107.2
92.8~109.6
89.2~108.8
罗非鱼
添加浓度/ug/kg
GB23200.742016
回收率范围/%
86.6~111.0
87.2~108.8
87.2~113.6
86.2~111.6
89.6~102.4
87.6~106.8
90.6~105.4
87.2~111.2
99.6~113.2
86.0~107.8
87.2~106.4
86.8~104.0
89.4~105.6
87.2~108.0
88.0~101.6
90.0~106.4
92.0~106.4
87.2~106.4
88.8~107.2
96.8~112.8
88.4~113.2
93.4~106.2
93.6113.6
88.0112.0
被测组分含量
>0.001≤0.01
>0.01≤0.1
附录D
(规范性附录）
实验室内重复性要求
表D.1实验室内重复性要求
精密度
GB23200.742016
被测组分含量
>0.001≤0.01
>0.01≤0.1
附录E
(规范性附录）
实验室间再现性要求
表E.1实验室间再现性要求
精密度
GB23200.742016
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