LS/T 6126-2017 粮油检验 粮食中赭曲霉毒素A的测定 超高效液相色谱法 LS/T6126-2017 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS67.040
中华人民共和国粮食行业标准
LS/T6126—2017
粮油检验
粮食中赭曲霉毒素A的测定
超高效液相色谱法
Inspection of grain and oils-Determination of ochratoxin A in grains-Ultra-highperformanceliquid chromatography2017-10-27发布
国家粮食局
2017-12-20实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家粮食局提出
本标准由全国粮油标准化技术委员会（SAT/TC270)归口。LS/T6126—2017
本标准起草单位：国家粮食局科学研究院、吉林省粮油卫生检验监测站、遂宁市粮食质量监督检验站、北京农业质量标准与检测技术研究中心。本标准主要起草人：谢刚、黎睿、李丽、王松雪、辛媛媛、叶金、徐振斌、李小明、王媛媛、陆安祥。1范围
粮食中赭曲霉毒素A的测定
粮油检验
超高效液相色谱法
LS/T6126—2017
本标准规定了粮食及其制品中赭曲需毒素A的超高效液相色谱法测定的原理、试剂与仪器设备分析步骤、结果计算等内容。
本标准适用于粮食及其制品中赭曲霉毒素A的测定。本标准方法赭曲霉毒素A的检出限为0.5μg/kg，定量限为1ug/kg。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
用提取液提取试样中的赭曲霉毒素A，免疫亲和柱净化、富集后，超高效液相色谱荧光检测器测定外标法定量。
4试剂与仪器设备
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级用水要求。4.1试剂
甲醇(CH,OH)：色谱纯。
乙腊（CH,CN）：色谱纯。
氯化钠(NaCI)：分析纯。
磷酸氢二钠（Na2HPO）：分析纯。磷酸二氢钾（KH2PO4)：分析纯。氯化钾（KCI)：分析纯。
浓盐酸（HCI)：分析纯。
乙酸（CH：COOH）：色谱纯。
碳酸氢钠（NaHCO.）：分析纯。吐温-20：分析纯。
乙十水（60十40）：60体积乙睛（4.1.2）和40体积水混合。酸化甲醇：1休积的色谱级乙酸（4.1.8）和99体积的甲醇（4.1.1)混合。1
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4.1.13真菌毒素清洗缓冲液：称取25.0g氧化钠（4.1.3）、5.0g碳酸氢钠（4.1.9）溶于水巾，加入0.1mL叶温-20（4.1.10）.用水稀释至1L4.1.14磷酸盐缓冲液：8.0g氯化钠（4.1.3）、1.2g磷酸氢钠（4.1.4）,0.2g磷酸二氢钾（4.1.5）、0.2g氯化钾（4.1.6)溶解于约990mL水中，用浓盐酸（4.1.7)调节pH至7.0.用水稀释至1L。其他试剂应符合GB/T602的要求，4.2标准品
4.2.1赭曲霉毒素A标准品：纯度>99%；或经国家认证并授权标准物质证书的标准物质。4.2.2曲霉毒素A标准储备液：使用有证标准物质溶液；或准确称取适量的赭曲霉毒素A标准品（4.2.1），用甲醇溶解，配成浓度为1009/L的标准储备液，一29C避光保存4.2.3赭曲霉毒素A标准工作溶液：准确移取适的猪曲需毒素A标准储备液（4.2.2），用流动相稀2μg/L5/4g/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L的标准工作溶液。释，配成浓度为1μg/L
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赭曲霉靠素A免疫亲和柱。
定性滤纸：o12cnWhamen号.或性能相当者。4.3.2
纤维滤纸：@gcmwhaimanGtA或能相当者4.3.3
um孔径，看机箱
滤膜：0.22
注射器：20ml。
离心管
角瓶250mL
高速粉碎机。
.5007mm00c
高速均质器：转速
氮气吹干
天平：感量0.7g和0.01mg。
离心机：转速≥5000r/min，
调速多用振荡器（振荡频率≥150次）。空气压力泵。
试验筛：1mm孔径试验筛
当者。
液相色谱柱：C18柱（柱长50mm或100mm，柱内径2.1mm，填料粒径1.7μm），或性能相超高效液相色谱仪：包括超高效液相色谱仪、超高压液相色谱仪和超高速液相色谱仪，配备荧光检测器和数据处理系统。
色谱参考条件：
色谱柱：C18柱（4.3.17）。
柱温：35℃；
流动相：乙晴十水+冰乙酸（96+102十2）流速：0.3mL/min。
进样量：10μL。
荧光检测器：激发波长310nm，发射波长465nm。2
5分析步骤
5.1扦样与分样
按GB/T5491执行，在采样过程中，注意防止样品污染。5.2样品制备
5.2.1提取
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样品用高速粉碎机（4.3.9）粉碎，过1mm孔径试验筛（4.316），混合均匀后，取有代表性样品不少于500g，供检测用。准确称取25.0g（精确到01g）充分混勾的试样，置于均质杯或250mL三角瓶中，加入100mL(V,）乙睛水溶液（1.1.11)，高速均质提取2min，或者使用调速多用振荡器（4.3.14）振荡提取30min，用定性滤纸过滤或转移25mL的提取液于50mL的离心管中，在5000r/min下离心
4mL(V滤液或离心管上层液体加入26mL（V,）磷酸盐缓冲液（4.1.14），混合均匀5min。准确移取
后，于8000r/m离
10min，上清液备用。
5.2.2净化
将免疫亲和柱（4.3.1)与20mL破璃注射器
部注人注射器中将空气压力
东（4315与玻璃注
3.5）下端连
器连构
将上述30mLV.）的上清液分两次全调节压力便落液队
药1滴的流速缓慢通
过免疫亲和柱，直至空气进人亲和佳中，依次期10ml真毒素清洗缓冲液（1.1.13）、10mL水淋洗亲和柱，弃掉全部流出液，抽平免疫亲和柱。推确加人1.5mL洗脱液112或免疫亲和桂厂家推荐的洗脱液进行乱脱流速约为1滴/s，收集开十净的玻璃试重在1下以氨吹仪用氮气吹至净于准菌人0.5mL流动相溶解全部洗脱液
残渣，涡旋混盒30
过0.22m滤膜（434）作为待测样液备用厂商提供的亲租柱操作程序可能有所不同更际操作时，也可参照免疫案和样商提供的操作说明和注：由于不同
程序使用。
5.3标准曲线的制作
赭曲毒素A标准工作溶液（42.3）由低到高注人液相色谱检测分析。以猪曲霉毒素A标准工作液浓度为横坐标，相对应色谱峰峰面积为纵坐标，建立标准工作曲线5.4试样溶液的测定
待测样液（5.2)中待测化合物的响应值应在标准曲线线性范围内，浓度超过线性范围的样品则应重新按5.2进行处理符合要求后再进样分析。待测样液中赭曲霉毒素A的浓度为C1。液相色谱图详见附录A。
5.5空白试验
不称取试样，按5.2的步骤做空白实验，分析得到空白试样中待测物的浓度为co。5.6平行试验
按5.2步骤，对同试样进行平行试验测定。3
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结果计算
样品中赭曲霉毒素A的含量按式（1）、式（2)计算：(ci-c)xV
其中：
式中：
样品中赭曲霉毒素A的含量，单位为微克每千克（ug/kg)；试样液中赭曲霉毒素A的含量，单位为微克每升（μg/L)；空白试验赭曲霉毒素A的含量，单位为微克每升（μg/L)；最终甲醇洗脱液体积，单位为毫升（mL)；最终净化洗脱液所含的试样质量，单位为克（g）；试样称取的质量，单位为克（g）；样品提取液总体积，单位为毫升（mL）；移取样品滤液的体积，单位为毫升（mL)；用于稀释滤液的缓冲液休积，单位为毫升（mL）；通过免疫亲和柱的稀释后样品提取液体积，单位为毫升（mL）。计算结果表示到小数点后·位。7
精密度
在重复性条件下获得的两次独立实验结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。4
附录A
（资料性附录）
赭曲霉毒素A标准溶液超高效液相色谱图赭曲霉毒素A标准溶液超高效液相色谱图见图A.1。0. 20
赭曲霉毒素A标准谱图
1829-V1O
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中华人民共和国粮食
行业标准
粮油检验
粮食中赭曲霉毒素A的测定
超高效液相色谱法
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2017年12月第版
2017年12月第一次印刷
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