LS/T 6130-2017
基本信息
标准号： LS/T 6130-2017
中文名称：粮油检验 粮食中伏马毒素B1、B2的测定 超高效液相色谱法
标准类别：粮食行业标准(LS)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 粮油 检验 粮食 中伏 毒素 测定 高效 色谱法
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
LS/T 6130-2017 粮油检验 粮食中伏马毒素B1、B2的测定 超高效液相色谱法
LS/T6130-2017
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标准内容
ICS67.040
中华人民共和国粮食行业标准
LS/T6130—2017
粮油检验
粮食中伏马毒素B1、B的测定
超高效液相色谱法
Inspection of grain and oils-Determination of fumonisins B,,B, in grains-Ultra-highperformanceliquid chromatography2017-10-27发布
新治房质真乐
国家粮食局
2017-12-20实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家粮食局提出。
本标准由全国粮油标准化技术委员会（SAT/TC270）归口。IS/T6130—2017
本标准起草单位：国家粮食局科学研究院、安徽国家粮食质量监测中心、黑龙江粮油卫生检验监测站、湖南国家粮食质量监测中心、遂宁市粮食质量监督检验站、北京农业质量标准与检测技术研究中心。本标准主要起草人：谢刚、黎睿、李丽、叶金、王松雪、吴宇、胡斌、徐春锋、许艳霞、李小明、李森陆安祥。
1范围
粮油检验粮食中伏马毒素B1、B2的测定超高效液相色谱法
LS/T6130—2017
本标准规定了粮食及其制品中伏马毒素B、B2超高效液相色谱法测定的原理、试剂与仪器设备、分析步骤、结果计算等内容。
本标准适用于粮食及相关制品中伏马毒素B：、B2的测定。本标准方法伏马毒素B、Bz的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.25mg/kg。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682
分析实验空用水规格和试验方法3原理
用提取液提取试样中的伏马毒素B、Bz，经免疫亲和柱净化、富集后，用邻苯二甲醛衍生，超高效液相色谱荧光检测器测定，外标法定量。4试剂和仪器设备
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。4.1试剂
甲醇(CH,OH)：色谱纯。
乙晴（CH,CN）：色谱纯：
四硼酸钠（NazB.O，·10HzO)：分析纯。氯化钠(NaCI)：分析纯。
磷酸氢二钠（NazHPO）)：分析纯。磷酸二氢钾（KH,PO）：分析纯。氯化钾（KCI)：分析纯。
浓盐酸（HCI)：分析纯。
乙酸（CH,COOH）：色谱纯。
邻苯二甲醛（OPA,CHO）：分析纯。2-硫基乙醇(C,HOS)：分析纯。
0.1mol/L四硼酸钠溶液：称取3.8g四硼酸钠（4.1.3），用水溶解并定容至100mL。1
LS/T6130—2017
4.1.132mo1/L盐酸溶液：将1体积浓盐酸（4.1.8）溶解在5体积水中。4.1.14乙睛水溶液（50+50）：取50体积乙晴（4.1.2）加入50体积水。4.1.15磷酸盐缓冲液（PBS）：将8.0g氟化钠（4.1.4）、1.2g磷酸氢二钠（4.1.5）、0.2g磷酸二氢钾（4.1.6）、0.2g氯化钾（4.1.7)溶解于990mL水中，用2mol/L盐酸溶液（4.1.13）调节pH为7.0最后定容为1L。
4.1.161%乙酸水溶液：量取99体积水，加人1体积乙酸（4.1.9）。4.1.17衍生溶液：取40mg邻苯二甲醛（4.1.10)加入1mL甲醇(4.1.1)溶解，加人0.1mol/L四硼酸钠溶液（4.2.1)5mL稀释，加人2-硫基乙醇（4.1.11)80μL，混勾。过0.22μm滤膜后，存于具塞棕色瓶中，在室温避光处可储藏1周。
4.1.182%乙酸化甲醇：量取98体积甲醇（4.1.1），加人2体积乙酸（1.1.9）。其他试剂应符合GB/T602的要求。4.2标准品
B，和B标准品：晶体，纯度95%；或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。4.2.1伏马毒素
4.2.2伏马毒素标准储备液：使用伏马毒索标准物质溶液；或准确称取适量伏马毒素Bl和B标准品（4.2.1），用乙情水溶液（4.1.14)溶解，配成伏马毒素BB浓度均为100mg/L的标准储备液。一20℃避光保存
4.2.3伏马毒素混合标准容液准确吸取适量快马毒素B标准储备液（4.2.2），用乙腈水溶液（4.1.14)定容，摇匀，配成伏
雪奇表EB浓度均为10ng/L的混合标准浴液分别取适量伏
4.2.4伏马毒素标准工作液
配成伏马每素、B.浓度周勇mg/L、0标准工作液。
4.3材料与仪器设备
维溶液（123）用睛水溶液（41.14)稀释，neg/L.o.o
mg/L、1.00mgaL2.00mg/L、5.00mg/L的快速定性滤纸：12mWhman1号或佳能相名4.3.1
4.3.2滤膜.022Am，有机系，
玻璃微纤维滤纸：$9 cmWhatmanGF/A，或性能相当者。4.3.3
伏马毒素免疫亲和柱：对伏马毒素B和B，均有100%的交叉反应性注射器：20ml
离心管：10mL.50mL
三角瓶：250mL。
量筒：100mL、10mL。
天平：感量0.1g和0.01mg。
高速粉碎机。
空气压力泵。
氮气吹干仪。
高速均质器：转速6500r/min~24000r/min离心机：转速≥5000r/min。
调速多用振荡器（振荡频率≥150次）。泵流操作架。
试验筛：1mm孔径。
样品瓶：2mL。
玻璃内衬管：250μL。www.bzxz.net
LS/T6130—2017
4.3.20液相色谱柱：C18柱（柱长50mm或100mm，柱内径2.1mm，填料粒径1.7μm），或性能相当者。
4.3.21超高效液相色谱仪：包括超高效液相色谱仪、超高压液相色谱仪和超高速液相色谱仪，配备荧光检测器和数据处理系统。
色谱参考条件：
色谱柱：C18柱（柱长50mm或100mm，柱内径2.1mm，填料粒径1.7um），或性能相当者柱温：30C。
流动相：A为1%乙酸水溶液（4.1.16），B为乙晴（4.1.2)，等度洗脱，A：B=50：50。流速：0.2mL/min。
进样量：2uL。
荧光检测波长：激发波长310nm、发射波长4355分析步骤
5.1扦样与分样
按GB/T5491执行，在采样过程
5.2样品制备
5.2.1提取
样品用高速粉碎机（4.0粉摔
第，过1mm孔径试验筛
3.11），混会均身后，有代表性样品不少于500g：供检测用。称取20情确到0.1g充分混匀的试样，置于两质林或250mL三角瓶中，加入
100mL(V乙腈水溶液（4.1
10高速均质提取2mm或者用调速多用振器（5.3.15）振荡提取30min，用定性滤纸（4.3.1)过滤或转我ml的提取液于5gm的离心管中5000/min离心
5min。取1.5mlV，）滤液或离心管中主层液体班人3lPBs缓冲液（4.1.15）稀释，混匀，于7000r/min离心10
min，离心液备用。
5.2.2净化
将免疫亲和杜（4.34)与20mL注射器（4.3.5)下端连接，将上述36.5mL离液(V)全部注人注射器内，将空气压力泵（4.3.11)与注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至空气进人亲和柱中，依次用10mLPBS缓冲液（4.1.15）)、10mL水淋洗亲和柱，流速为1滴/s~2滴/s，弃掉全部流出液，抽干免疫亲和柱。免疫亲和柱中注人3mL酸化甲醇（4.1.18），流速以1滴/s缓慢流出，收集全部洗脱液于10mL离心管中，在55℃下氮气吹干，准确加入0.5mL（V）乙睛水溶液（4.2.3）溶解残留物，涡旋混合30s.过0.22um滤膜（4.3.2）.备用。注：由于不同！商提供的亲和柱操作程序可能有所不同，实际操作时，也可参照免疫亲和柱厂商提供的操作说明和程序使用。
5.3衍生化反应
分别取上述净化液和标准工作液（4.2.4）各100L，置于装有内衬管（4.1.19）的样品瓶中，加入100μLOPA衍生液（4.1.17），混合均勾后，静置3min，作为待测液，应立即进样分析。5.4标准曲线的制作
将衍生后伏马毒素标准系列溶液（4.2.4)由低到高浓度检测分析。以伏马毒素浓度为横坐标，相对3
LS/T6130—2017
应的色谱峰峰面积为纵坐标，建立伏马毒素B,、B，的标准曲线。5.5试样溶液的测定
待测样液（5.3）中待测化合物的响应值应在标准曲线线性范国内，浓度超过线性范围的样品则应重新按5.2和5.3进行处理符合要求后再进样分析，待测样液中伏马毒素B或B，的浓度为c1。液相色谱图参见附录A。
5.6空白试验
不称取试样，按5.2和5.3的步骤做空白实验，分析得到空白试样中待测物的浓度为co。5.7平行试样
按5.2、5.3的操作步骤，对同一试样进行平行试验测定。6
结果计算
样品中伏马毒素B、B，的含量，按式（1)、式（2)计算：(c-c)XVXf
其中：
式中：
样品中伏马毒素B、B，的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；试样液中伏马毒素B、Bz的含量，单位为毫克每升（mg/L)；空白试验伏马毒素B，、Bz的含量，单位为毫克每升（ng/L)；最终定容体积，单位为毫升（mL)；最终样液所含的试样质量，单位为克（g）；试样称取的质量，单位为克（g)；样品提取液总体积，单位为毫升（mL）；移取样品滤液的休积，单位为毫升（mL）；用于稀释滤液的缓冲液体积，单位为毫升（mL）；通过免疫亲和柱的稀释后样品提取液体积，单位为毫升（mL）；稀释倍数。
计算结果表示到小数点后两位。7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。4
.（1)
附录A
（资料性附录）
伏马毒素B,、Bz标准溶液超高效液相色谱图伏马毒素B、B.标准溶液超高效液相色谱图见图A.1。5. 00 -
伏马毒素B,、B2(浓度比例1：1)谱图8.00
LS/T6130—2017
LS/T 6130-2017
中华人民共和国粮食
行业标准
粮油检验
粮食中伏马毒素Bi、Bz的测定
超高效液相色谱法
LS/T 6130—2017
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045）网址spc.net.cn
总编室：（010)68533533
发行中心：(010)51780238
读者服务部：（010)68523946
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
开本880X12301/16
2017年12月第一版
印张0.75字数12千字
2017年12月第一次印刷
书号：155066·232637
7定价16.00元
告由本社发行中心调换
如有印装差错
版权专有侵权必究
举报电话：（010）68510107
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中华人民共和国粮食行业标准
LS/T6130—2017
粮油检验
粮食中伏马毒素B1、B的测定
超高效液相色谱法
Inspection of grain and oils-Determination of fumonisins B,,B, in grains-Ultra-highperformanceliquid chromatography2017-10-27发布
新治房质真乐
国家粮食局
2017-12-20实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家粮食局提出。
本标准由全国粮油标准化技术委员会（SAT/TC270）归口。IS/T6130—2017
本标准起草单位：国家粮食局科学研究院、安徽国家粮食质量监测中心、黑龙江粮油卫生检验监测站、湖南国家粮食质量监测中心、遂宁市粮食质量监督检验站、北京农业质量标准与检测技术研究中心。本标准主要起草人：谢刚、黎睿、李丽、叶金、王松雪、吴宇、胡斌、徐春锋、许艳霞、李小明、李森陆安祥。
1范围
粮油检验粮食中伏马毒素B1、B2的测定超高效液相色谱法
LS/T6130—2017
本标准规定了粮食及其制品中伏马毒素B、B2超高效液相色谱法测定的原理、试剂与仪器设备、分析步骤、结果计算等内容。
本标准适用于粮食及相关制品中伏马毒素B：、B2的测定。本标准方法伏马毒素B、Bz的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.25mg/kg。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682
分析实验空用水规格和试验方法3原理
用提取液提取试样中的伏马毒素B、Bz，经免疫亲和柱净化、富集后，用邻苯二甲醛衍生，超高效液相色谱荧光检测器测定，外标法定量。4试剂和仪器设备
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。4.1试剂
甲醇(CH,OH)：色谱纯。
乙晴（CH,CN）：色谱纯：
四硼酸钠（NazB.O，·10HzO)：分析纯。氯化钠(NaCI)：分析纯。
磷酸氢二钠（NazHPO）)：分析纯。磷酸二氢钾（KH,PO）：分析纯。氯化钾（KCI)：分析纯。
浓盐酸（HCI)：分析纯。
乙酸（CH,COOH）：色谱纯。
邻苯二甲醛（OPA,CHO）：分析纯。2-硫基乙醇(C,HOS)：分析纯。
0.1mol/L四硼酸钠溶液：称取3.8g四硼酸钠（4.1.3），用水溶解并定容至100mL。1
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4.1.132mo1/L盐酸溶液：将1体积浓盐酸（4.1.8）溶解在5体积水中。4.1.14乙睛水溶液（50+50）：取50体积乙晴（4.1.2）加入50体积水。4.1.15磷酸盐缓冲液（PBS）：将8.0g氟化钠（4.1.4）、1.2g磷酸氢二钠（4.1.5）、0.2g磷酸二氢钾（4.1.6）、0.2g氯化钾（4.1.7)溶解于990mL水中，用2mol/L盐酸溶液（4.1.13）调节pH为7.0最后定容为1L。
4.1.161%乙酸水溶液：量取99体积水，加人1体积乙酸（4.1.9）。4.1.17衍生溶液：取40mg邻苯二甲醛（4.1.10)加入1mL甲醇(4.1.1)溶解，加人0.1mol/L四硼酸钠溶液（4.2.1)5mL稀释，加人2-硫基乙醇（4.1.11)80μL，混勾。过0.22μm滤膜后，存于具塞棕色瓶中，在室温避光处可储藏1周。
4.1.182%乙酸化甲醇：量取98体积甲醇（4.1.1），加人2体积乙酸（1.1.9）。其他试剂应符合GB/T602的要求。4.2标准品
B，和B标准品：晶体，纯度95%；或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。4.2.1伏马毒素
4.2.2伏马毒素标准储备液：使用伏马毒索标准物质溶液；或准确称取适量伏马毒素Bl和B标准品（4.2.1），用乙情水溶液（4.1.14)溶解，配成伏马毒素BB浓度均为100mg/L的标准储备液。一20℃避光保存
4.2.3伏马毒素混合标准容液准确吸取适量快马毒素B标准储备液（4.2.2），用乙腈水溶液（4.1.14)定容，摇匀，配成伏
雪奇表EB浓度均为10ng/L的混合标准浴液分别取适量伏
4.2.4伏马毒素标准工作液
配成伏马每素、B.浓度周勇mg/L、0标准工作液。
4.3材料与仪器设备
维溶液（123）用睛水溶液（41.14)稀释，neg/L.o.o
mg/L、1.00mgaL2.00mg/L、5.00mg/L的快速定性滤纸：12mWhman1号或佳能相名4.3.1
4.3.2滤膜.022Am，有机系，
玻璃微纤维滤纸：$9 cmWhatmanGF/A，或性能相当者。4.3.3
伏马毒素免疫亲和柱：对伏马毒素B和B，均有100%的交叉反应性注射器：20ml
离心管：10mL.50mL
三角瓶：250mL。
量筒：100mL、10mL。
天平：感量0.1g和0.01mg。
高速粉碎机。
空气压力泵。
氮气吹干仪。
高速均质器：转速6500r/min~24000r/min离心机：转速≥5000r/min。
调速多用振荡器（振荡频率≥150次）。泵流操作架。
试验筛：1mm孔径。
样品瓶：2mL。
玻璃内衬管：250μL。www.bzxz.net
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4.3.20液相色谱柱：C18柱（柱长50mm或100mm，柱内径2.1mm，填料粒径1.7μm），或性能相当者。
4.3.21超高效液相色谱仪：包括超高效液相色谱仪、超高压液相色谱仪和超高速液相色谱仪，配备荧光检测器和数据处理系统。
色谱参考条件：
色谱柱：C18柱（柱长50mm或100mm，柱内径2.1mm，填料粒径1.7um），或性能相当者柱温：30C。
流动相：A为1%乙酸水溶液（4.1.16），B为乙晴（4.1.2)，等度洗脱，A：B=50：50。流速：0.2mL/min。
进样量：2uL。
荧光检测波长：激发波长310nm、发射波长4355分析步骤
5.1扦样与分样
按GB/T5491执行，在采样过程
5.2样品制备
5.2.1提取
样品用高速粉碎机（4.0粉摔
第，过1mm孔径试验筛
3.11），混会均身后，有代表性样品不少于500g：供检测用。称取20情确到0.1g充分混匀的试样，置于两质林或250mL三角瓶中，加入
100mL(V乙腈水溶液（4.1
10高速均质提取2mm或者用调速多用振器（5.3.15）振荡提取30min，用定性滤纸（4.3.1)过滤或转我ml的提取液于5gm的离心管中5000/min离心
5min。取1.5mlV，）滤液或离心管中主层液体班人3lPBs缓冲液（4.1.15）稀释，混匀，于7000r/min离心10
min，离心液备用。
5.2.2净化
将免疫亲和杜（4.34)与20mL注射器（4.3.5)下端连接，将上述36.5mL离液(V)全部注人注射器内，将空气压力泵（4.3.11)与注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至空气进人亲和柱中，依次用10mLPBS缓冲液（4.1.15）)、10mL水淋洗亲和柱，流速为1滴/s~2滴/s，弃掉全部流出液，抽干免疫亲和柱。免疫亲和柱中注人3mL酸化甲醇（4.1.18），流速以1滴/s缓慢流出，收集全部洗脱液于10mL离心管中，在55℃下氮气吹干，准确加入0.5mL（V）乙睛水溶液（4.2.3）溶解残留物，涡旋混合30s.过0.22um滤膜（4.3.2）.备用。注：由于不同！商提供的亲和柱操作程序可能有所不同，实际操作时，也可参照免疫亲和柱厂商提供的操作说明和程序使用。
5.3衍生化反应
分别取上述净化液和标准工作液（4.2.4）各100L，置于装有内衬管（4.1.19）的样品瓶中，加入100μLOPA衍生液（4.1.17），混合均勾后，静置3min，作为待测液，应立即进样分析。5.4标准曲线的制作
将衍生后伏马毒素标准系列溶液（4.2.4)由低到高浓度检测分析。以伏马毒素浓度为横坐标，相对3
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应的色谱峰峰面积为纵坐标，建立伏马毒素B,、B，的标准曲线。5.5试样溶液的测定
待测样液（5.3）中待测化合物的响应值应在标准曲线线性范国内，浓度超过线性范围的样品则应重新按5.2和5.3进行处理符合要求后再进样分析，待测样液中伏马毒素B或B，的浓度为c1。液相色谱图参见附录A。
5.6空白试验
不称取试样，按5.2和5.3的步骤做空白实验，分析得到空白试样中待测物的浓度为co。5.7平行试样
按5.2、5.3的操作步骤，对同一试样进行平行试验测定。6
结果计算
样品中伏马毒素B、B，的含量，按式（1)、式（2)计算：(c-c)XVXf
其中：
式中：
样品中伏马毒素B、B，的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；试样液中伏马毒素B、Bz的含量，单位为毫克每升（mg/L)；空白试验伏马毒素B，、Bz的含量，单位为毫克每升（ng/L)；最终定容体积，单位为毫升（mL)；最终样液所含的试样质量，单位为克（g）；试样称取的质量，单位为克（g)；样品提取液总体积，单位为毫升（mL）；移取样品滤液的休积，单位为毫升（mL）；用于稀释滤液的缓冲液体积，单位为毫升（mL）；通过免疫亲和柱的稀释后样品提取液体积，单位为毫升（mL）；稀释倍数。
计算结果表示到小数点后两位。7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。4
.（1)
附录A
（资料性附录）
伏马毒素B,、Bz标准溶液超高效液相色谱图伏马毒素B、B.标准溶液超高效液相色谱图见图A.1。5. 00 -
伏马毒素B,、B2(浓度比例1：1)谱图8.00
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中华人民共和国粮食
行业标准
粮油检验
粮食中伏马毒素Bi、Bz的测定
超高效液相色谱法
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中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045）网址spc.net.cn
总编室：（010)68533533
发行中心：(010)51780238
读者服务部：（010)68523946
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
开本880X12301/16
2017年12月第一版
印张0.75字数12千字
2017年12月第一次印刷
书号：155066·232637
7定价16.00元
告由本社发行中心调换
如有印装差错
版权专有侵权必究
举报电话：（010）68510107
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