标准号：WS 286-2008
标准名称：传染性非典型肺炎诊断标准
英文名称：Diagnostic criteria for severe acute respiratory syndrome
标准格式：PDF
发布时间：2008-02-28
实施时间：2008-09-01
标准大小：6.53M
标准介绍：1范围
本标准规定了传染性非典型肺炎的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。
本标准适用于全国各级医疗卫生机构及其工作人员对传染性非典型肺炎的诊断、报告。
2术语和定义、缩略语
2.1术语和定义
下列术语、定义和缩略语适用于本标准。
2.1.1传染性非典型肺炎 severe acute respiratory syndrome
世界卫生组织将其命名为严重急性呼吸综合征( severe acute respiratory syndrome,SARS)，是由SARS冠状病毒( SARS-COronavirus, SARS COV)引起的一种具有明显传染性，可累及多个脏器和系统，以肺炎为主要临床表现的急性呼吸道传染病。该病具有传染性强、人群普遍易感、病情进展快、预后
较差和危害大的特点。
2.1.2密切接触 close contact
治疗或护理、探视病例，与病例共同生活，以及通过其他方式直接接触病例的呼吸道分泌物、体液和排泄物(如粪便)等
2.2缩略语
SARS: severe acute respiratory syndrome,严重急性呼吸综合征，传染性非典型肺炎
SARS-COV: SARS-Coronavirus,SARS冠状病毒
wHO: world health organization,世界卫生组织
ARDS: acute respiratory distress syndrome,急性呼吸窘迫综合征
LDH: lactate dehydrogenase,乳酸脱氢酶
AST: aspartate aminotransferase,天冬氨酸转氨酶 根据《中华人民共和国传染病防治法》制定本标准。本标准的附录A是规范性附录附录B是资料性附录。本标准由卫生部传染病标准专业委员会提出。
本标准由中华人民共和国卫生部批准。
本标准起草单位：中国疾病预防控制中心、北京大学人民医院本标准主要起草人：杨维中、阮力、冯了健、高占成余宏杰。

ICS11.020
23227-2008
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中华人民共和国卫生行业标准
WS286—2008
传染性非典型肺炎诊断标准
Diagnostic criteria for severe acute respiratory syndrome2008-02-28发布
天民卫地服站
2008-09-01实施
中华人民共和国卫生部发布
术语和定义、缩略语
诊断依据
诊断原则
诊断标准
6鉴别诊断
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附录A（规范性附录）传染性非典型肺炎实验室检测方法附录B（资料性附录）传染性非典型肺炎病原学、流行病学与临床表现WS286—2008
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根据《中华人民共和国传染病防治法》制定本标准。本标准的附录A是规范性附录，附录B是资料性附录。本标准由卫生部传染病标准专业委员会提出。本标准由中华人民共和国卫生部批准。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心、北京大学人民医院。本标准主要起草人：杨维中、阮力、冯子健、高占成、余宏杰。WS286-2008
1范围
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传染性非典型肺炎诊断标准
本标准规定了传染性非典型肺炎的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。WS286-2008
本标准适用于全国各级医疗卫生机构及其工作人员对传染性非典型肺炎的诊断，报告。2术语和定义、缩略语
2.1术语和定义
下列术语，定义和缩略语适用于本标准。2.1.1传染性非典型肺炎severe acuterespiratory syndrome世界卫生组织将其命名为严重急性呼吸综合征（severeacuterespiratory syndrome，SARS），是由SARS冠状病毒（SARS-Coronavirus，SARS-CoV）引起的一种具有明显传染性，可累及多个脏器和系统，以肺炎为主要临床表现的急性呼吸道传染病。该病具有传染性强、人群普遍易感、病情进展快，预后较差和危害大的特点。
2.1.2密切接触closecohtact
治疗或护理探视病例，与病例共同生活，以及通过其他方式直接接触病例的呼吸道分泌物、体液和排泄物（如粪便）等。
2.2缩略语
SARS：severeacuterespiratorysyndrome，严重急性呼吸综合征，传染性非典型肺炎SARS-CoV.SARS-Coronavirus,SARS冠状病毒WHO：worldhealthorganization，世界卫生组织ARDS：acuterespiratorydistresssyndrome，急性呼吸窘迫综合征LDH：lactatedehydrogenase，乳酸脱氢酶AST：aspartateaminotransferase.天冬氨酸转氨酶ALT：alanineaminotansferase，丙氨酸氨基转移酶CK，creatinekinase，肌酸激酶PCR：polymerasechain reaction，聚合酶链反应ELISA：enzymelinked immunosorbentassay.酶联免疫吸附试验IFA：immunofluorescenceassay，免疫荧光试验3诊断依据
3.1流行病学史
3.1.1发病前14d内曾经接触过疑似或临床诊断或实验室确诊SARS病例，尤其是与其密切接触。3.1.2病例有明确传染他人，尤其是传染多人发病的证据，他人或多人被诊断为疑似或临床或实验室确诊SARS病例。
3.1.3发病前14d内有与果子狸或相关野生动物的接触史，如曾经到过饲养、贩卖，运输、加工，烹饪果子狸或相关野生动物的场所和环境，直接接触过其分泌物和（或）排泄物等。3.1.4从事SARS-CoV检测、科研的相关实验室工作人员。3.1.5发病前2周内居住在或曾到过SARS流行的区域（由卫生部组织专家评估确定）。3.2临床表现（参见附录B.3.1）WS286—2008
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SARS的潜伏期通常限于2周之内，一般2d～10d3.2.1临床症状
急性起病，自发病之日起2周～3周内病情都可处于进展状态。主要有以下三类症状：a）发热及相关症状：常以发热为首发和主要症状，体温一般高于38℃，常呈持续性高热，可伴有畏寒、头痛、乏力、肌肉和关节酸痛。在早期，使用退热药可有效：进人进展期，通常难以用退热药控制高热。使用糖皮质激素可对热型造成干扰。b）呼吸系统症状：咳嗽不多见，表现为干咳，少痰，少数患者出现咽痛。可有胸闷，严重者逐渐出现呼吸加速、气促，甚至呼吸窘迫。常无上呼吸道卡他症状。呼吸困难和低氧血症多见于发病6d~12d以后。
c）其他方面症状：部分患者出现腹泻恶心、呕吐等消化道症状。3.2.2体征
SARS患者的肺部体征常不明显部分惠者可闻及少许湿啰音，或有肺实变体征。偶有局部叩浊、呼吸音减低等少量胸腔积液的体3.2.3实验室检查
3.2.3.1外周血象
a）多数患者白细胞计数在正常范围内，部分患者白细胞计数减低。b）大多数SARS惠者淋巴细胞计数绝对值减少，随病程进展呈逐步减低趋势，并有细胞形态学变化。判断淋色细胞计数减低的临界值为1.2×10/L。淋巴细胞计数色对值<0.9×10°/L。）发病后期容易合并细菌感染，白细胞计数明显升高，中性粒细胞比例升高。3.2.3.2T淋巴细胞亚群
CD3+CD4
3.2.3.3其他
8+细胞计数减少，以CD4+亚群减低为著。CD4+/CD8+正常或降低。C
部分患者伴有肝力能及肾功能异常，LDH、ALT、AST、CK的升高。3.2.4影像学表现
SARS患者的胸部X线和CT基本影像表现为磨玻璃密度影和肺实变影a）磨玻璃密度磨玻璃密度影在胸部X线和CT上的判定标准为病变的密度比血管密度低，其内可见血管
在X线胸片上磨玻璃密度影也可采用低于肺门的密度作为识别标准。磨玻璃密度影的形态可为单发或多发的小片状，大片状，或在肺内弥漫分布。在CT上有的磨玻璃影内可见细线和网状影，为肺血管分支增厚的小叶间隔及小叶内间质的影像。磨玻璃密度影内若合并较为广集的网状影，称为“碎石路”（crazypaving）正。有的磨玻璃影内可见含有气体密度的支气管分支影像，称为\空气支气管”（airbronchogram）行b）肺实变影：在胸部线和T上肺实变影的判定标准为病变的密度接近或高于血管密度，其内不能见到血管影像，但有时可见空气支气管征。在×线胸片上肺实变影又可以以等于或高于肺门阴影的密度作为识别的依据。病变可为小片状或大片状，单发或多发。3.3SARS-CoV实验室检测
3.3.1SARS-CoV核酸(RNA)检测
应用逆转录聚合酶链反应（reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT-PCR）方法检测SARS-CoV的RNA，检测方法见A.1：RT-PCR检测阳性结果应使用原始标本进行重复试验或在第二个实验室检测同一份标本。
3.3.1.1任何一种标本经任何一间具备RT-PCR检测和生物安全资质的实验室检测阳性。3.3.1.2至少需要两种不同部位的临床标本检测阳性（例如血液和鼻咽分泌物或粪便）。3.3.1.3连续收集2d或以上的同一种临床标本送检，检测阳性（例如2份或多份鼻咽分泌物）。3.3.1.4在每一个特定检测中对原始临床标本使用两种不同的方法，或从原始标本重新提取RNA，2
RT-PCR检测阳性。
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3.3.2SARS-CoV特异性抗原N蛋白检测WS286—2008
以ELISA检测血清或血浆标本中SARS-CoV核衣壳（N）蛋白抗原阳性，重复一次试验，结果仍为阳性。检测方法见A.2。
3.3.3SARS-CoV特异性抗体检测
急性期血清标本是指发病后7d内采集的标本，应尽可能早地采集：恢复期血清标本是指发病后3周～4周采集的标本。WHO推荐以ELISA和IFA作为血清SARS-CoV抗体检测方法，见A.3、A.4，SARS-CoV抗体中和试验（neutralizationtest）作为SARS血清学诊断的特异方法，有条件的实验室可以开展。
3.3.3.1病例的任何一份血清抗体检测阳性平行检测急性期和恢复期血清抗本阳转3.3.3.2
平行检测急性期和恢复期青九体滴度升高≥4倍。HO
4诊断原则
SARS的诊断需要依据易例的流行病学史、临床表现和实验室检测综合进行判断，确诊病例需要病原学或血清学检测证居
心具是血清抗体阳转或急性期与恢复期有4倍以上增长的证据。为早期、及时人员应详细询问患者的流行病学史。发现疑似SARS病例
流行病学方面有支持证据和从临床或实验室上能够排除其他疾病，是做出临床诊断最重要的未能明确流行病学依据者
支持依据。对于就诊时
继续进行流行病学追访。
动态观察病情演（症状、氧合状况、肺部X线影像）抗菌药物治疗效果和SARS特异性病原学检测结果，对于诊断具有
重要意义。
传染性非典型肺炎病原学、流行病学与临床表现参见附录B。5诊断标准
5.1SARS疑似病例
符合以下任付
一项可诊断为SARS疑似病例：
5.1.1具备3.1中的
2中SARS的相应临床表现，但尚没有典型3.24肺部X线影像学项，和3.2
表现者：
5.1.2具备3.2中的相应临床表现，有或没有3.2.4肺部×线影象学表现者，同时具备3.3.1.1
5.1.3具备3.2中SARS的相应临床表现，有或没有3.2.4肺部×线影像学表现者，同时具备3.3.3.1。
5.2SARS临床诊断病例
具备3.1中的任一项和3.2电SAR的相应临床表现，尤其是3.2.4肺部X线影像学表现，并能排除其他疾病诊断者。
5.3SARS确诊病例
符合以下任何一项者为SARS确定病例：5.3.1具备3.2中SARS相应的临床表现及3.3.1.2：5.3.2具备3.2中SARS相应的临床表现及3.3.1.35.3.3具备3.2中SARS相应的临床表现及3.3.1.45.3.4具备3.2中SARS相应的临床表现及3.3.2；5.3.5具备3.2中SARS相应的临床表现及3.3.3.2；5.3.6具备3.2中SARS相应的临床表现及3.3.3.3。3
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6鉴别诊断
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需要与SARS进行鉴别的重点疾病包括上呼吸道感染、流行性感冒、人禽流感、细菌性肺炎、肺炎支原体肺炎、肺炎衣原体肺炎军团菌性肺炎真菌性肺炎，其他病毒性肺炎肺结核，其他需要鉴别的疾病还包括艾滋病或其他使用免疫抑制剂（如器官移植术后等）患者合并的肺部感染、汉坦病毒肺综合征、肺部肿瘤、非感染性间质性肺疾病、肺水肿、肺不张、肺栓塞、肺血管炎、肺嗜酸粒细胞浸润症等。iiiKAa~cJouaKAa
附录A
（规范性附录
传染性非典型肺炎实验室检测方法A.1荧光定量实时RT-PCR方法检测SARS-CoV核酸A.1.1原理
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该方法利用荧光能量共振转移（fluorescenceresonanceenergytransfer，FRET）原理，即两荧光集团相靠小于10×10-10m～100×10-10m（10~100A）时，一个荧光基团所释放的能量就会使相邻的荧光基团发光。根据FRET原理，设计两条相邻探针，一条探针的5端标记FAM荧光基团·另一探针的3端标记Red640荧光基团，当复性时，探针结合在模板上，有红色荧光信号产生。当变性时，探针游离，两基团距离远，该荧光信号消失，并且被相应的仪器检测到。所以能实时检测核酸每次扩增的信号，实现对核酸扩增的实时检测与定量。SARS患者发病期，不同样本中含有不同量的SARS-CoV或病毒核酸，本方法可用于SARS患者样品中SARSCoV特异的核酸检测。A.1.2实验条件及主要材料
本试验应在符合国家生物安全规定和PCR检测标准的实验室中进行，并使用国家批准的SARSCoV核酸荧光定量实时PCR检测试剂盒（例如深圳市基生物工程股份有限公司生产）所有仪器，材料及方法均按试剂盒说明书操作。须注意，不同的试剂盒的操作仪器、材料及方法会有所不同。A.1.2.1荧光PCR检测仪（RocheLightCycler）。A.1.2.2病毒核酸（RNA）制备：使用试剂盒推荐的核酸提取试剂制备病毒核酸，详见A.1.3。A.1.2.3PCR反应用毛细管：使用试剂盒提供的规格。A.1.2.4试剂：下述试剂详见说明书。SARSPCR反应液
RT-PCR酶：
增强剂（enhancer）：
DEPC水。
A.1.3病毒核酸(RNA)的制备
A.1.3.1样本要求：采集患者发病早期咽子（2mL/咽拭子）和全血或血清等样本。A.1.3.2提取试剂准备（在使用前进行）a）BufferAVL工作液的制备将试剂盒提供的BufferAVL液ImL加人到I管冻干的CarrierRNA中，混合均匀.彻底溶解CarrierRNA。在第1次使用前将溶解的CarrierRNA加人到1瓶BufferAVL中.制成BuflerAVL工作液，保存于2C~8C（稳定性为6个月。在2C~8℃C条件下，BufferAVL/CarrierRNA混合物可能会析出沉淀，可在使用前80℃温育使之溶解。b）BufferAWI工作液的制备试剂盒中BufferAW1以浓缩液的状态提供。第1次使用前，按照试剂瓶上的说明向其中加人规定量的无水乙醇制备成工作液。BufferAW1工作液在室温条件下可稳定保存1年。
c）BufferAW2工作液的准备试剂盒中BufferAW2以浓缩液的状态提供。第1次使用前，按照试剂瓶上的说明向其中加人规定量的无水乙醇制备成工作液。BufferAW2工作液在室温条件下可稳定保存1年
①给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他产品有相同的效果，则可使用这些等效的产品
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A.1.3.3病毒核酸（RNA）提取步骤所有试剂在使用前应平衡至室温：所有离心步骤应在室温下进行。A.1.3.3.1取n个1.5mL灭菌离心管，作好标记。n=样本数十3（1管强阳性对照.1管临界阳性对照和1管阴性对照）。
A.1.3.3.2每个离心管加560uLBufferAVL工作液。A.1.3.3.3裂解样本：将140uL待测样本及对照样本加到上述离心管中，振荡混匀15s.室温孵育10min。
A.1.3.3.4平衡样本：短暂离心后加人560uL无水乙醇，振荡混匀15s，再短暂离心，以便上柱纯化核酸。
A.1.3.3.5上样吸附核酸
第一次加样：取步骤A.1.3.3得到的混合物630pL(一次上样的最大量），加人到QIAampRNA提取柱中（带有2mL的集液管）盖上管盖，6000r/min离心Imin，以便将核酸吸附在柱上，并离去未吸柱的成份。
第二次加样：更换新的集液管，将A.1.3.3.4剩余的样本加人到QIAampRNA提取柱中，盖上管盖，6000r/min离心1min以便将剩余样品中的核酸也吸附到同一个柱上。A.1.3.3.6洗柱
第一次洗柱：更换新的集液管，打开管盖，加人500uLBufferAW1工作液6000r/min离心1min，洗柱。
的集液管打开管益，加人500lLBtferAW2工作液以>00/min离心第二次洗柱：
3min，再次洗柱。
主：更项新的集液管，以20.000r/min离心Imin.彻底离去柱系统中残余的洗液。第三次洗柱
A.1.3.3.7洗脱加收核酸样本：将QIAampRNA提取柱置于新的1.5mL离心管小心地打开管盖，加人60uL核酸洗脱液BufferAVE，盖上管盖，室温条件下孵育1min，6000/min离心1min，收集核酸洗脱液，做好标记℃保存备用。A.1.4荧光定量实时RT-PCR检测
A.1.4.1实时RTPCR反应液的准备：每个待检样本反应液的组成为：SARSPCR反应液9.8uL，enhancer0.2uL，RT-PCR酶1/2粒：根据每个样本反应液的组成和待检测样本数量确定总反应体积和配制反应液（因为试剂盒的酶是以一粒为单位提供的.2个反应用一粒酶，所以当样本数为奇数时，应按增加1个样本数计算总反应体积，以确保反应体系的准确性），反应液配制完毕后充分混合，2000r/min离心10s，按每管10uL分装至PCR反应管中。A.1.4.2加样：每反应管中加人核酸15uL，盖紧管盖，室温下放置5min，置于PCR检测仪上。A.1.4.3扩增条件设定见表A.1
循环数
设定温度（℃）
反应时间（s）
扩增条件设定
温度变化率（℃/s)
信号获取模式
single（单通道）
分析模式
quantification（定量）
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A.1.4.4仪器检测通道选择
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使用RocheLightCyeler荧光PCR检测仪时，选定F1通道，在60℃时荧光信号收集方式设为1。具体设置方法请参照各仪器使用说明书。A.1.4.5结果分析阈值设定
使用RocheLightCycler进行结果分析时.用荧光记数值F1读取结果，阈值设定的原则是阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，通常在0.001～0.1内调整，或可根据仪器噪音情况进行调整。
A.1.5实时RT-PCR反应
反应结果应同时符合以
A.1.5.1阴性对照无扩增
强阳性对照Ct
临界阳性对照C
结果判断
阴性。
阴性：无Ct
阳性：Ct值
Ct值在
试验结果的解料
符合下刻情况之
A. 1. 7. 1. 1
至少2个同
可以报告患者样本SARS病毒核酸检测结果阳性时间收集的不同类型的临床样本（例如血浆、粪便》检测结果阳性从发病第2天起不同时间收集的相同类型的临床样本检测结果均为阳性A.1.7.1.2Www.bzxZ.net
A.1.7.1.3使用2种不同的检测方法或试剂（基于其他反应原理或其他企业产品），对同一临床样本重复检测结果均为阳或从原始标本重新提取RNA.RT-PCR检测阳性。由于样本的质量和检测方法等因素的限制，检测结果为阴性时，尚不能完全排除样本中含有A.1.7.2
病毒核酸。
A.2ELISA检测血清中SARS-CoV核衣壳抗原（N蛋白）A.2.1原理
用抗SARS-CoVN蛋自的特异性单克隆抗体包被聚苯乙烯微孔反应板，加人待检血清标本，再加体夹心免疫复合物，然后加人羊抗兔酶标抗体，形成（抗体-病毒抗原-二抗人免抗N蛋白抗体形成双
抗二抗酶标记物）免疫复合
SARS患者早中期血滑清
诊断。
A.2.2实验条件及主要材料
显色，通过酶标仪进行定性和定量测定。每度的SARS·CoVN蛋白，本方法可用于SARS患者的早期本试验应在符合国家生物安全规定和血清学检测标准的实验室中进行，并使用国家批准的检测血清中SARS-CoV核衣壳蛋白抗原的ELISA试剂盒，所有仪器、材料及方法均按试剂盒说明书操作。须注意，不同的试剂盒的操作仪器、材料及方法会有所不同。A.2.2.1主要材料
a）包被抗SARS-CoVN蛋白特异性单抗的反应板：b）兔抗SARS-CoVN蛋白抗体：
c）酶标记的羊抗兔IgG抗体：
d）洗涤液；
e）底物显色液；
f）终止液；
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g）阴、阳性对照血清。
A.2.2.2主要仪器
a）洗板机；
b）酶标仪：
c）37℃恒温箱。
A.2.3操作步骤
A.2.3.1样本要求
采集思者发病早中期血清样本，并将血清样本56C温育90min灭活处理A.2.3.2试验步骤
a）将不稀释的待检血清，阴性对照和阳性对照样本各10OuL加人已包被抗SARS-CoVN蛋白特异性单抗的反应孔中，每次试验设阴性对照3孔、阳性对照2孔和空白对照1孔（空白孔不加液体）置37℃温育60min。
b）弃去各孔中液体，每孔加满洗涤液，反复洗涤5次，每次需静止30s，吸净各孔中的洗涤液。c）除空白孔外，每孔加人兔抗SARS冠状病毒N蛋白抗体100L，置37℃温育60min。d）弃去各孔中的样本，洗涤反应板。方法同步骤b)。e）除空白孔外，每孔加入酶标羊抗兔IgG抗体100mL，置37℃温育60min。D弃去各孔中的样本，洗涤反应板。方法同步骤b）。g）每孔加人酶底物反应液100μL，置37℃避光温育10minh）每孔加人终止液50mL，混匀后立即以空白孔调零，置酶标仪450nm波长下测定OD值。A.2.4反应体系质量控制
阳性对照OD值有效范围：≥0.5.阴性对照OD值有效范围：<0.20.否则试验无效，A.2.5结果判定
A.2.5.1阴、阳性对照和被检血清样本各自的OD值减去空白对照OD值为计算值。A.2.5.2临界值=0.09十阴性对照平均A值（当阴性对照平均A值小于0.10时，按0.10计算：当阴性对照平均A值大于或等于0.10时按实际值计算）。A2.5.3被检样本血清的OD值≥临界值应判为抗原阳性，小于临界值判定为阴性反应，临界值附近建议重新检测，复测阳性判定为阳性，否则判定为阴性。A.2.6试验结果的解释
A.2.6.1检测结果阳性只表明该样品中含有SARS-CoVN蛋白抗原。A.2.6.2注意事项：检测结果为阳性，需要密切结合临床指征及其他测定结果进行综合分析，可疑及阳性血清标本应进行第2次试验加以复核，并进行双孔测定。检测结果为阴性的标本，不能完全排除SARSCoV感染。SARS患者病程早期3d~1Od)的标本，SARS-CoVN蛋白有相对较高的阳性检出率：发病10d以上患者标本，阳性率逐渐下降，此时应当同时进行抗体检测。A.3间接ELISA检测血清中SARS-CoVIgG抗体A.3.1原理
先将SARS-CoV裂解液包被聚苯乙烯微孔反应板，再将待检血清标本和酶标抗人IgG与反应板上的抗原特异性结合，洗去游离的成分。加人相应的酶底物催化显色。用酶标仪进行定性和定量测定。SARS患者在发病中晚期血清IgG抗体较高，本方法可用于SARS患者血清中特异IgG抗体的检测。
A.3.2实验条件及主要材料
本试验应在符合国家生物安全规定和血清学检测标准的实验室中进行，并使用国家批准的检测血清中SARS-CoVIgG抗体的ELISA试剂盒，所有仪器、材料及方法均按试剂盒说明书操作。须注意，不同的试剂盒的操作仪器、材料及方法会有所不同。8
A.3.2.1主要材料
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a）SARS冠状病毒裂解液包被板：b）酶标记抗人IgG抗体；
e）样本稀释液：
d）洗涤液；
e）底物显色液：
D终止液；
g）阴、阳性对照血清。
A.3.2.2主要仪器
a)洗板机：
b）酶标仪：
c）37℃恒温箱。
A.3.3操作步骤
A.3.3.1样本要求
采集患者发病早，中期及恢复期血清样本，并将血清样本56℃温育90min灭活处理。A.3.3.2试验步骤
a）每次试验设空白对照，阳性对照1孔，阴性对照2孔。空白孔不加液体b）每孔加人1：10稀释的血清样本100gL，置37℃温育30min。WS286—2008
c）弃去各孔中的样本，每孔加满洗涤液，反复洗涤5次。每次需静止30s。吸净各孔中的洗涤液。d）除空白孔外，每孔加人酶标记抗人IgG抗体100L。置37℃温育20min。e）弃去各孔中的样本，洗涤反应板。方法同步骤）。f）每孔加入酶底物反应液100mL，置37℃避光温育10min。g）每孔加人终止液50uL，混匀后立即以空白孔调零，置酶标仪450nm波长下测定OD值。A.3.4反应体系质量控制
阳性对照OD值有效范围：>0.50.阴性对照OD值有效范围：≤0.10.否则试验无效A.3.5结果判定
A.3.5.1阴、阳性标本和被检样本血清各自的OD值减去空白对照OD值为计算值A.3.5.2若阴性对照血清OD均值小于0.05按0.05计算。A.3.5.3临界值的设定：临界值一0.13十阴性对照标本OD均值A.3.5.4被检样本血清的OD值大于临界值应判为SARS-CoVIgG抗体阳性，小于临界值判定为阴性反应，临界值附近建议重新检测，复测阳性判定为阳性，否则判定为阴性。A.3.6试验结果的解释
A.3.6.1根据机体感染后产生抗体的基础理论，SARS-CoVIgG抗体检测结果应依据机体从感染病毒到产生抗体的时间，样品采集时间，抗体强度的个体差异及临床指征等情况，并结合其他测定结果综合考虑。
A.3.6.2抗体检测为阴性者，并不能排除存在SARS-CoV感染。A.3.6.3早期和恢复期SARS冠状病毒抗体阳转或病程中SARSCoV抗体4倍升高都具有确定诊断价值。
A.4间接ELISA检测血清中SARS-CoVIgM抗体A.4.1原理
先将SARS-CoV裂解液包被聚苯乙烯微孔反应板，再将待检血清标本和酶标抗人IgM抗体与反应板上的抗原特异性结合，洗去游离的成分。加人相应的酶底物催化显色。用酶标仪进行定性和定量测定。
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