ICS11.080
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中华人民共和国卫生行业标准
WS/T6862020
消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求
Analytical method and evaluation requirements of antiviral drugs in disinfectant andantibacterial and bacteriostatic agents2020-07-20发布
2021-02-01实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。iiiKAa~cJouaKA
WS/T6862020
本标准起草单位：北京市疾病预防控制中心、中国计量科学研究院、北京市理化分析测试中心、中国食品药品检定研究院、江苏省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心、山东省疾病预防控制中心。本标准主要起草人：丁晓静、王萍、杨奕、高运华、赵新颖、勾新磊、牛夏梦、李莉、李硕、李洁、赵珊、徐燕、李放、张流波、李炎、崔树玉、苏冠民。1范围
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WS/T686—2020
消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求本标准规定了消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物的检测方法和评价要求本标准适用于消毒剂与抗抑菌剂中更昔洛韦、阿昔洛韦、喷昔洛韦和利巴韦林及其它抗病毒药物的测定和评价。
规范性引用文件
下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法，中华人民共和国药典
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
antiviraldrugs
抗病毒药物
用于预防和治疗病毒感染的药物。更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦的检测方法4
4.1高效液相色谱法
4.1.1原理
以乙酸甲醇混合溶液超声提取试样中的更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦，提取液经离心、过滤，C18色谱柱分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。4.1.2
试剂和材料
除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水4.1.2.1试剂
4.1.2.1.1甲醇（CH.OH）：色谱纯。4.1.2.1.2冰乙酸（CH.COOH）。4.1.2.1.3乙酸铵（CH.COONH）。4.1.2.2试剂配制
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4.1.2.2.1样品提取溶液：分别移取甲醇80mL和冰乙酸10mL，置于试剂瓶中，加入水10mL，混匀。4.1.2.2.2乙酸铵乙酸缓冲溶液：称取乙酸铵0.77g，置于试剂瓶中，加入水400mL溶解，再加入冰乙酸2mL，加水至500mL，混匀。4.1.2.3标准品
更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦纯度均大于97%或经国家认证并授予证书的标准物质，其它相关信息参见附录A。
4.1.2.4标准溶液配制
4.1.2.4.1标准储备液：准确称取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦各25.0mg，分别置于50mL容量瓶中，加入样品提取溶液约40mL，超声10min，溶解，用样品提取溶液定容至刻度，配制成质量浓度均为500mg/L的标准储备液。冷藏保存，有效期为3个月。4.1.2.4.2混合标准中间液：分别移取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦标准储备液，用样品提取溶液稀释成质量浓度均为50mg/的混合标准中间液。冷藏保存，有效期为1个月。4.1.2.4.3混合标准系列溶液：取不同体积的混合标准中间液，用样品提取溶液稀释成混合标准系列溶液，如0.5mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L。临用现配，4.1.2.5材料
4.1.2.5.1有机系滤膜：孔径为0.45μm。4.1.2.5.2玻璃珠：Φ<5mm。
4.1.3仪器和设备
4.1.3.1高效液相色谱仪：带二极管阵列检测器或紫外检测器。4.1.3.2分析天平：最小分度值为0.1mg。4.1.3.3离心机：≥3000r/min。4.1.3.4涡旋混合器。
4.1.3.5超声波清洗器。
4.1.4分析步骤
4.1.4.1样品前处理
4.1.4.1.1液体剂型
称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10ml刻度，涡旋混匀1min，超声10min，经滤膜过滤，备用。4.1.4.1.2其它剂型
称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，加入1至2颗玻璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声10min，离心5min，取上清液经滤膜过滤，备用。
4.1.4.2高效液相色谱参考条件
高效液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：Cis柱（柱长250mm，内径4.6mm，粒径5um），或相当者：2
流动相：A相为甲醇，B相为乙酸铵乙酸缓冲溶液：流速：1.0mL/min：
柱温：30℃
进样体积：5μL；
检测波长：254nm
梯度洗脱程序：见附录B.1。
4.1.4.3标准曲线的制作
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将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入高效液相色谱仪，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的质量浓度为横坐标，绘制峰面积一质量浓度（mg/L）标准曲线。更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦混合标准溶液的高效液相色谱图参见附录C.14.1.4.4测定
将处理好的试样溶液注入高效液相色谱仪，根据标准曲线计算试样溶液中目标化合物的质量浓度4.1.4.5结果计算和表述
试样中目标化合物的含量按式（1）计算：X=PxV
式中：
X一试样中目标化合物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：p一标准曲线计算的试样溶液中目标化合物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L)：V—定容体积，单位为毫升（mL）：m称样量，单位为克（g）。
结果保留三位有效数字。
4.1.4.6精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。本方法回收率和精密度见附录D。
4.1.4.7检出限和定量限
当取样量为0.5g，定容体积为10mL，本方法的检出限和定量限：更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛书的检出限均为2.0mg/kg；定量限均为7.0mg/kg。4.2胶束电动毛细管色谱法
4.2.1原理
以含有十二烷基硫酸钠的样品提取溶液提取试样中的更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦，用胶束电动毛细管色谱分离模式进行分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。4.2.2试剂和材料
除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3
4.2.2.1试剂
4.2.2.1.1十二烷基硫酸钠（SDS，CizH2SO,Na）。4.2.2.1.2硼砂（NazB,0-10H20）。4.2.2.1.3无水磷酸二氢钠（NaHPO）。4.2.2.1.4氢氧化钠（NaOH）。
4.2.2.2试剂配制
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4.2.2.2.1分离缓冲溶液：称取SDS2.019g、硼砂0.191g和无水磷酸二氢钠0.150g，置于同一具塞带刻度塑料离心管中，加水至50mL刻度，超声溶解、混匀，配制成含有140mmo1/LSDS、10mmo1/L硼砂和25mmo1/L磷酸二氢钠的分离缓冲溶液4.2.2.2.2样品提取溶液：将分离缓冲溶液用水稀释10倍，配制成样品提取溶液。4.2.2.2.3氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠2g，加入预先装有40mL水的塑料离心管中，振摇溶解，再加水至50mL刻度、混匀，配制成1mo1/L氢氧化钠溶液。4.2.2.3标准品
同4.1.2.3。
4.2.2.4标准溶液配制
4.2.2.4.1标准储备液：准确称取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦各10.0mg，分别置于10mL容量瓶中，加入样品提取溶液约5mL，振摇（或超声）溶解，用样品提取溶液定容至刻度，配制成质量浓度均为1000mg/L的标准储备液。临用现配。4.2.2.4.2混合标准中间液：分别移取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦标准储备液，用样品提取溶液稀释成质量浓度均为100mg/L的混合标准中间液。临用现配。4.2.2.4.3混合标准系列溶液：取不同体积的混合标准中间液，用样品提取溶液稀释成混合标准系列溶液，如1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、40.0mg/L。临用现配。4.2.2.5材料
同4.1.2.5。
4.2.3仪器和设备
4.2.3.1毛细管电泳仪：带二极管阵列检测器或紫外检测器。4.2.3.2未涂层熔融石英毛细管：内径50μm，外径375μm。4.2.3.3同4.1.3.2
4.2.3.4同4.1.3.4。
4.2.3.5同4.1.3.5
4.2.4分析步骤
4.2.4.1样品预处理
4.2.4.1.1液体剂型
称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，涡旋混匀1min，超声10min，备用。4
4.2.4.1.2其它剂型
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称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，加入1至2颗玻璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声10min，备用。4.2.4.2毛细管电泳参考条件
毛细管电泳参考条件如下：
分离柱：未涂层熔融石英毛细管，302mm（有效长度为200mm）：a)
电压：10kV：
进样压力：3.448kPa；
进样时间：4s（进样体积约7.9nL）：检测波长：254nm：
清洗程序：新装毛细管在使用前分别用NaOH溶液冲洗20min，水冲洗5min，分离缓冲溶液冲洗5min。每次进样前依次用NaOH溶液冲洗1.5min，水冲洗1.5min，分离缓冲溶液冲洗1.5min。
4.2.4.3标准曲线的制作
将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入毛细管电泳仪，以色谱峰的校正峰面积（峰面积除以迁移时间）为纵坐标，与其对应的质量浓度为横坐标，绘制校正峰面积一质量浓度（mg/）标准曲线，更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦混合标准溶液的毛细管电泳图参见附录E.1。4.2.4.4测定
将处理好的试样溶液注入毛细管电泳仪，根据标准曲线计算试样溶液中目标化合物的质量浓度4.2.4.5结果计算和表述
试样中自标化合物的含量按式（1）计算结果保留三位有效数字。
4.2.4.6精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。4.2.4.7检出限和定量限
当取样量为0.5g，定容体积为10mL，本方法的检出限和定量限：更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦的检出限均为4.0mg/kg；定量限均为14.0mg/kg。4.3超高效液相色谱-串联质谱确证方法4.3.1原理
以乙酸甲醇混合溶液超声提取试样中的更普落韦、阿普落韦和喷普落韦，经离心、过滤，用超高效液相色谱-串联质谱仪进行确证。4.3.2试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。5
4.3.2.1试剂
4.3.2.1.1甲醇（CH:OH）：色谱纯。4.3.2.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.3.2.1.3冰乙酸（CH.COOH）。4.3.2.2试剂配制
4.3.2.2.1同4.1.2.2.1。
4.3.2.2.20.1%甲酸甲醇溶液：100mL甲醇中加入0.1mL甲酸，混匀。4.3.2.2.30.1%甲酸水溶液：100mL水中加入0.1mL甲酸，混匀。4.3.2.3标准品
同4.1.2.3。
4.3.2.4标准溶液配制
4.3.2.4.1同4.1.2.4.1。
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WS/T6862020
4.3.2.4.2混合标准中间液：分别移取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦标准储备液，用水释成质量浓度均为5mg/L的混合标准中间液。冷藏保存，有效期为1个月。4.3.2.4.3混合标准应用液：将混合标准中间液用水稀释100倍，配成质量浓度均为50μg/L的混合标准应用液。临用现配。
4.3.2.5材料
4.3.2.5.1有机系滤膜：孔径为0.22μm。同4.1.2.5.2。
4.3.2.5.2
4.3.3仪器和设备
4.3.3.1超高效液相色谱-串联质谱仪：带电喷雾离子源。4.3.3.2同4.1.3.2。
4.3.3.3同4.1.3.3。
4.3.3.4同4.1.3.4。
4.3.3.5同4.1.3.5。
4.3.4分析步骤
4.3.4.1样品前处理
4.3.4.1.1液体剂型
称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，涡旋混匀1min，超声10min，经滤膜过滤，滤液用水稀释至少10倍，混匀，备用。4.3.4.1.2其它剂型
称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，加入1至2颗玻璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声10min，离心5min，上清液经滤膜过滤，将滤液用水稀释至少10倍，混匀，备用。6
4.3.4.2超高效液相色谱参考条件超高效液相色谱参考条件如下：iiKAa-cJouaKA
WS/T6862020
色谱柱：Cis（柱长50mm，内径2.1mm，粒径1.7um），或相当者：a)
流动相：A相为0.1%甲酸甲醇溶液；B相为0.1%甲酸水溶液：流速：0.3mL/min：
柱温：40℃：
进样量：5μL：
梯度洗脱程序：见附录B.2。
质谱参考条件
质谱参考条件如下：
电离方式：ESI+：
脱溶剂气温度：350℃；
干燥气流量：550L/h；
碰撞气流量：0.15mL/min：
毛细管电压：3.5kV；
监测模式：多反应监测（MRM）模式：其它质谱参数：见附录F.1。
4.3.4.4混合标准应用液测定
将均为50μg/L的混合标准应用液注入超高效液相色谱-串联质谱仪。质谱色谱图参见附录C.24.3.4.5确证
将处理好的试样溶液注入超高效液相色谱-串联质谱仪。在相同测试条件下，试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在土2.5%之内，且检测到的离子相对丰度，应与浓度相当的标准溶液中相对离子丰度一致。其相对丰度比偏差应符合表1要求。表1相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度（A，%）
允许的最大偏差（%）
4.3.4.6检出限
20
10当取样量为0.5g，定容体积为10mL，本方法的检出限：更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦均为20.0μg/kg
5利巴韦林的检测方法
5.1电渗流反转的毛细管电泳法
5.1.1原理
以含有硼酸和硼砂的样品提取溶液提取试样中的利巴韦林，用电渗流反转的区带电泳分离模式进行1
分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。5.1.2试剂和材料
iiiKAacJouaKA
WS/T6862020
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。5.1.2.1试剂
5.1.2.1.1硼酸（HsB0）。
5.1.2.1.2硼砂（NazB,0·10H20）。5.1.2.1.3十六烷基三甲基溴化铵（CTAB，CigHzBrN）。5.1.2.1.4氢氧化钠（NaOH）。
5.1.2.2试剂配制
5.1.2.2.1分离缓冲溶液：称取硼酸0.309g、硼砂1.144g和CTAB0.009g，置于同一具塞带刻度塑料离心管中，加水约40mL振摇溶解，再加水至50mL刻度，混匀，配制成含有100mmo1/L硼酸、60mmol1/L硼砂和0.5mmo1/LCTAB的分离缓冲溶液5.1.2.2.2样品提取溶液：将分离缓冲溶液用水稀释10倍，配制成样品提取溶液。5.1.2.2.3同4.2.2.2.3。
5.1.2.3标准品
利巴韦林纯度大于97%或经过国家认证并授予证书的标准物质，其它相关信息参见附录A。5.1.2.4标准溶液配制
5.1.2.4.1标准储备液：准确称取利巴韦林10.0mg，置于10mL容量瓶中，加入水约5mL振摇溶解再用水定容至刻度，配制成质量浓度为1000mg/L的标准储备液。冷藏保存，有效期为3个月。5.1.2.4.2标准中间液：将利巴韦林标准储备液用样品提取溶液稀释10倍，配制成质量浓度为100mg/L的标准中间液。临用现配。5.1.2.4.3标准系列溶液：取不同体积的利巴韦林标准中间液，用样品提取溶液稀释成混合标准系列溶液，如1.5mg/、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L。临用现配5.1.2.5材料
同4.1.2.5.2。
5.1.3仪器和设备
5.1.3.1毛细管电泳仪：带二极管阵列检测器或紫外检测器。5.1.3.2未涂层熔融石英毛细管：内径50μm，外径375μm。5.1.3.3同4.1.3.2。
5.1.3.4同4.1.3.4。
5.1.3.5同4.1.3.5。
5.1.4分析步骤
样品前处理
5.1.4.1.1液体剂型
iiiKAa-cJouaKA
WS/T6862020
称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10ml刻度，涡旋混匀1min，超声10min，备用。5.1.4.1.2膏体剂型
称取0.2g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10ml刻度，加入1至2颗玻璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声10min，备用。5.1.4.1.3其它剂型
称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，加入1至2颗玻璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声10min，备用。5.1.4.2毛细管电泳参考条件：
未涂层熔融石英毛细管，700mm（有效长度为600mm）；a）
电压：29kV：
进样压力：3.448kPa：
进样时间：20s（进样体积约17nL）检测波长：214nm：
清洗程序：新装毛细管在使用前分别用NaOH溶液冲洗20min，水冲洗5min，分离缓冲溶液f）
冲洗5min。每次进样前依次用NaOH冲洗1.5min，水冲洗1.5min，分离缓冲溶液冲洗1.5min5.1.4.3标准曲线的制作
将标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入毛细管电泳仪，以色谱峰的校正峰面积（峰面积除以迁移时间）为纵坐标，与其对应的质量浓度为横坐标，绘制校正峰面积一质量浓度（mg/）标准曲线。利巴韦林标准溶液的毛细管电泳图参见附录E.2。5.1.4.4测定
将处理好的试样溶液注入毛细管电泳仪，根据标准曲线计算试样溶液中利巴韦林的质量浓度。5.1.4.5结果计算和表述
样品中利巴韦林的含量按式（1）计算。结果保留三位有效数字。
5.1.4.6精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。5.1.4.7检出限和定量限
膏体试样：当取样量为0.20g，定容体积为10mL，本方法的检出限为20mg/kg，定量限为70mg/kg其它试样：当取样量为0.50g，定容体积为10mL，本方法的检出限为8mg/kg，定量限为30mg/kg。5.2超高效液相色谱-串联质谱确证方法5.2.1原理
以甲醇水混合溶液超声提取试样中的利巴韦林，经C18-固相萃取柱净化，用超高效液相色谱-串联9
质谱仪进行确证。
5.2.2试剂和材料
iiiKAa-cJouaKA
WS/T6862020
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。5.2.2.1试剂
5.2.2.1.1甲醇（CH.OH）：色谱纯。5.2.2.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯。5.2.2.1.3乙睛（CH.CN）：色谱纯。5.2.2.2试剂配制
5.2.2.2.1样品提取溶液：将甲醇10mL与水90mL混匀。5.2.2.2.20.1%甲酸水溶液：往100mL水中加入甲酸0.1mL，混匀。5.2.2.3标准品
同5.1.2.3。
5.2.2.4标准溶液配制
5.2.2.4.1标准储备液：准确称取利巴韦林10.0mg，置于10mL容量瓶中，加入约5mL水振摇溶解用水定容至刻度，配制成质量浓度为1000mg/L的标准储备液，冷藏保存，有效期为3个月。5.2.2.4.2标准中间液：将利巴韦林标准储备液，用样品提取溶液稀释成质量浓度为5mg/L的标准中间液。冷藏保存，有效期为1个月。5.2.2.4.3标准应用液：将利巴韦林标准中间液用样品提取液稀释100倍，配成质量浓度均为50μg/L的标准应用液。临用现配。
5.2.2.5材料
5.2.2.5.1C1s固相萃取小柱：3mL，200mg。5.2.2.5.2同4.3.2.5.1。
5.2.2.5.3
同4.1.2.5.2。
5.2.3仪器和设备
5.2.3.1超高效液相色谱-串联质谱仪：带电喷雾离子源（ESI）。5.2.3.2同4.1.3.2。
同4.1.3.3。
5.2.3.4同4.1.3.4。
5.2.3.5同4.1.3.5。
5.2.4分析步骤
5.2.4.1样品前处理
5.2.4.1.1液体剂型
称取0.5g（精确至1mg）试样于10mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10mL刻度，涡旋混匀1min，超声10min，经滤膜过滤，滤液用水稀释至少10倍，混匀，过C18-固10
